發(fā)布時(shí)間：2017-07-16 01:14

  本文關(guān)鍵詞：miR-375對(duì)Hep-2細(xì)胞生物學(xué)行為的影響及機(jī)制研究

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【摘要】：目的:喉癌是頭頸部常見的惡性腫瘤之一,近年來喉癌的發(fā)病呈現(xiàn)出年輕化及上升趨勢(shì)。本研究以人喉癌細(xì)胞系為研究對(duì)象,分析轉(zhuǎn)染miR-375對(duì)Hep-2細(xì)胞生物學(xué)行為的影響,并探討其可能的分子機(jī)制。方法:本實(shí)驗(yàn)研究設(shè)為miR-375 mimics組(轉(zhuǎn)染miR-375)、miR-NC組(轉(zhuǎn)染無義序列miR-NC)和空白對(duì)照組(未轉(zhuǎn)染);采用脂質(zhì)體Lipofectamine?2000將miR-375及miR-NC瞬時(shí)轉(zhuǎn)染Hep-2細(xì)胞;熒光顯微鏡,觀察GFP熒光細(xì)胞數(shù),檢測(cè)轉(zhuǎn)染效率;采用MTT法,檢測(cè)細(xì)胞生長(zhǎng)增殖速度變化;運(yùn)用流式細(xì)胞儀,檢測(cè)細(xì)胞周期及凋亡;通過劃痕試驗(yàn),觀察細(xì)胞遷移能力;利用生物信息學(xué)軟件,預(yù)測(cè)miR-375可能調(diào)控的靶基因;采用RT-PCR及Western Blot方法,分別從mRNA及蛋白質(zhì)表達(dá)水平,檢測(cè)IGF1R基因的表達(dá)。結(jié)果:miR-375導(dǎo)入Hep-2細(xì)胞,熒光檢測(cè)顯示,miR-375可在miR-375 mimics組Hep-2細(xì)胞高表達(dá);MTT檢測(cè)顯示,miR-375 mimics組Hep-2細(xì)胞生長(zhǎng)增殖速度減慢,低于miR-NC組和空白對(duì)照組;流式細(xì)胞儀檢測(cè)結(jié)果顯示,miR-375 mimics組Hep-2細(xì)胞處于亞G0/G1期細(xì)胞數(shù)目增加,高于miR-NC組和空白對(duì)照組;miR-375 mimics組Hep-2細(xì)胞凋亡增加,高于miR-NC組和空白對(duì)照組,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01);劃痕試驗(yàn)結(jié)果顯示,miR-375 mimics組Hep-2細(xì)胞遷移能力較miR-NC組和空白對(duì)照組降低,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01);生物信息學(xué)TargetScan及Pic Tar軟件預(yù)測(cè)分析,提示miRNA調(diào)控的靶基因可能是IGF1R基因;RT-PCR及Western Blot檢測(cè)結(jié)果均顯示,miR-375 mimics組Hep-2細(xì)胞IGF1R表達(dá)水平降低,低于miR-NC組和空白對(duì)照組,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01)。結(jié)論:1、miR-375導(dǎo)入Hep-2細(xì)胞,Hep-2細(xì)胞生長(zhǎng)增殖減慢,細(xì)胞阻滯在G0/G1期,細(xì)胞凋亡增加,遷移能力下降。2、miR-375導(dǎo)入Hep-2細(xì)胞,Hep-2細(xì)胞的IGF1R基因表達(dá)降低。
【關(guān)鍵詞】：喉癌 miR-375 IGF1R Hep-2細(xì)胞
【學(xué)位授予單位】：南華大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R739.65
【目錄】：

• 摘要5-7
• Abstract7-10
• 第1章 引言10-14
• 第2章 實(shí)驗(yàn)材料與方法14-22
• 2.1 實(shí)驗(yàn)材料14-15
• 2.2 實(shí)驗(yàn)方法15-21
• 2.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析21-22
• 第3章 實(shí)驗(yàn)結(jié)果22-32
• 3.1 轉(zhuǎn)染后GFP及miR-375的表達(dá)情況22
• 3.2 miR-375對(duì)Hep-2 細(xì)胞生長(zhǎng)增殖速度的影響22-23
• 3.3 miR-375對(duì)Hep-2 細(xì)胞細(xì)胞周期的影響23-24
• 3.4 miR-375對(duì)Hep-2 細(xì)胞凋亡的影24-25
• 3.5 miR-375對(duì)Hep-2 細(xì)胞遷移能力的影響25-27
• 3.6 miR-375與IGF1R基因mRNA的相關(guān)性27
• 3.7 高表達(dá)miR-375后IGF1R基因mRNA的表達(dá)情況27-29
• 3.8 高表達(dá)miR-375后IGF1R基因蛋白的表達(dá)情況29-32
• 第4章 討論32-36
• 4.1 miR-375對(duì)Hep-2 細(xì)胞生物學(xué)行為的影響32-33
• 4.2 miR-375對(duì)Hep-2 細(xì)胞生物學(xué)行為影響的分子機(jī)制33-36
• 第5章 結(jié)論36-38
• 參考文獻(xiàn)38-44
• 綜述 miRNA在頭頸腫瘤的研究進(jìn)展44-52
• 參考文獻(xiàn)49-52
• 碩士期間科研情況52-54
• 致謝54

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