本文關鍵詞：組織型纖溶酶原激活劑通過影響γ-氨基丁酸能神經元而作用于視皮層可塑性的體外研究

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【摘要】：目的弱視是眼科常見的臨床疾病,其為一種因在視皮層可塑性關鍵期接受到異常的視覺經驗引起視力下降,而眼部無明顯器質性病變的眼科疾病。大齡兒童及成年弱視,治療極其困難,且治愈率極低,目前尚無有效治療藥物,同時,因矯正視力遠低于正常人,此病給人們的工作、學習、生活造成各種困難。目前發(fā)現(xiàn),弱視的形成、發(fā)展及其治療和視覺發(fā)育關鍵期(即視皮層可塑性關鍵期)十分相關,因而關于視皮層可塑性關鍵期終止機制的研究成為了尋找治療成年弱視新方法的重要突破口。近年來,tPA的作用成為研究視皮層可塑性終止及再激活機制的新關注點。其作為一種絲氨酸蛋白酶類物質,目前人們認為,其可通過局部降解ECM或有關細胞識別分子物質,幫助視皮層內重組神經聯(lián)系、視皮層雙眼區(qū)重新調整興奮一抑制性神經環(huán)路平衡,從而參與視皮層發(fā)育可塑性,再激活已被抑制的視皮層可塑性。然而tPA作用于視皮層可塑性的突觸機制,目前仍未明確。而同時許多研究提示,GABA能神經環(huán)路的成熟在tPA對視皮層可塑性的作用具有重要意義。因此本實驗擬通過對體外培養(yǎng)的視皮層神經元進行外源性tPA干擾,從結構和功能層面了解tPA和GABA能神經元、GABA能神經環(huán)路的關系,以探索tPA參與視皮層突觸發(fā)育可塑性及其激活作用的可能機制。方法1構建大鼠視皮層神經元培養(yǎng)體系,并鑒定神經元的形態(tài)及電生理功能,以期為下一步實驗提供狀態(tài)良好的神經元細胞來源。2運用tPA藥物增強/PAI-1藥物抑制神經元tPA作用后,應用tPA活性試劑盒檢測干擾tPA作用的效果,GAD67/MAP2免疫熒光顯色檢測干擾后GABA能神經元表達,膜片鉗技術檢測干擾后sIPSCs、mlPSCs及mEPSCs的改變以觀察tPA對GABA能神經環(huán)路的抑制性突觸傳遞功能影響,了解tPA和GABA能神經元、GABA神經環(huán)路的作用關系,以探索tPA參與視皮層突觸發(fā)育可塑性及其激活作用的可能機制。結果1相差顯微鏡結果顯示所培養(yǎng)的神經元胞體圓潤、邊界清晰透亮；MAP2免疫細胞顯色法成功對所培養(yǎng)的神經元進行形態(tài)鑒定；膜片鉗技術對所培養(yǎng)的神經元進行了電生理功能檢測,顯示神經元可被誘發(fā)出單峰型、瞬變型、持續(xù)型的動作電位,培養(yǎng)晚期的神經元可被記錄到頻繁的自發(fā)性動作電位,及典型的全細胞電流曲線以及微小性抑制性突觸后電流。2運用tPA增強/PAI-1抑制神經元tPA作用后,應用tPA活性試劑盒檢測示tPA作用成功被tPA增強(P0.05)及被PAI-1抑制(P0.05)；GAD67/MAP2雙重免疫熒光標記顯色檢測示PAI-1及tPA處理后,未見神經元密度明顯改變(P0.05),而PAI-1組的GAD67陽性細胞密度及GAD67/MAP2比例顯著增高(P0.05),tPA組GAD67陽性細胞密度及GAD67/MAP2比例則未見顯著改變(P0.05)；膜片鉗技術檢測示PAI-1及tPA處理后,PAI-1組sIPSC及mIPSCs、mEPSCs的電流幅度及頻率顯著增高(P0.05),tPA組sIPSC的電流頻率顯著降低(P0.05)而sIPSCs的電流幅度以及mlPSCs與mEPSCs的電流頻率及幅度未見顯著改變(P0.05)。結論1構建了一個成本經濟、穩(wěn)定高效、神經元生長狀態(tài)及電生理功能良好的大鼠視皮層神經元培養(yǎng)體系。2 tPA可抑制GABA能抑制性神經環(huán)路的形成,并降低其抑制性突觸傳遞功能,使GABA能抑制性突觸結構、功能趨于幼稚化,這可能是tPA參與并激活視皮層可塑性的作用機制之一。
【關鍵詞】：神經元培養(yǎng) 膜片鉗 tPA GABA
【學位授予單位】：重慶醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R777.44
【目錄】：

• 符號說明5-7
• 中文摘要7-10
• 英文摘要10-15
• 前言15-18
• 參考文獻17-18
• 第一部分 大鼠視皮層神經元培養(yǎng)及其形態(tài)、電生理功能鑒定18-30
• 1 實驗材料18-21
• 2 實驗方法21-23
• 3 實驗結果23-27
• 4 討論27-29
• 參考文獻29-30
• 第二部分 組織型纖溶酶原激活劑對視皮層γ—氨基丁酸能神經元表達及其抑制性突觸傳遞功能的影響30-47
• 1 實驗材料30-31
• 2 實驗方法31-35
• 3 實驗結果35-42
• 4 討論42-45
• 參考文獻45-47
• 全文總結47-48
• 文獻綜述48-58
• 參考文獻52-58
• 致謝58-59
• 碩士期間發(fā)表的論文59

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中國期刊全文數據庫 前10條

1 黃江濤;劉深泉;馬在光;;視皮層中神經元的同步發(fā)放現(xiàn)象[J];中國生物醫(yī)學工程學報;2009年02期

2 姚軍平;祝芹芳;;視皮層可塑性的分子生物學研究進展[J];中國醫(yī)藥指南;2012年15期

3 李O燦，

本文編號：532325