本文關(guān)鍵詞：組織型纖溶酶原激活劑通過(guò)影響γ-氨基丁酸能神經(jīng)元而作用于視皮層可塑性的體外研究

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【摘要】：目的弱視是眼科常見(jiàn)的臨床疾病,其為一種因在視皮層可塑性關(guān)鍵期接受到異常的視覺(jué)經(jīng)驗(yàn)引起視力下降,而眼部無(wú)明顯器質(zhì)性病變的眼科疾病。大齡兒童及成年弱視,治療極其困難,且治愈率極低,目前尚無(wú)有效治療藥物,同時(shí),因矯正視力遠(yuǎn)低于正常人,此病給人們的工作、學(xué)習(xí)、生活造成各種困難。目前發(fā)現(xiàn),弱視的形成、發(fā)展及其治療和視覺(jué)發(fā)育關(guān)鍵期(即視皮層可塑性關(guān)鍵期)十分相關(guān),因而關(guān)于視皮層可塑性關(guān)鍵期終止機(jī)制的研究成為了尋找治療成年弱視新方法的重要突破口。近年來(lái),tPA的作用成為研究視皮層可塑性終止及再激活機(jī)制的新關(guān)注點(diǎn)。其作為一種絲氨酸蛋白酶類物質(zhì),目前人們認(rèn)為,其可通過(guò)局部降解ECM或有關(guān)細(xì)胞識(shí)別分子物質(zhì),幫助視皮層內(nèi)重組神經(jīng)聯(lián)系、視皮層雙眼區(qū)重新調(diào)整興奮一抑制性神經(jīng)環(huán)路平衡,從而參與視皮層發(fā)育可塑性,再激活已被抑制的視皮層可塑性。然而tPA作用于視皮層可塑性的突觸機(jī)制,目前仍未明確。而同時(shí)許多研究提示,GABA能神經(jīng)環(huán)路的成熟在tPA對(duì)視皮層可塑性的作用具有重要意義。因此本實(shí)驗(yàn)擬通過(guò)對(duì)體外培養(yǎng)的視皮層神經(jīng)元進(jìn)行外源性tPA干擾,從結(jié)構(gòu)和功能層面了解tPA和GABA能神經(jīng)元、GABA能神經(jīng)環(huán)路的關(guān)系,以探索tPA參與視皮層突觸發(fā)育可塑性及其激活作用的可能機(jī)制。方法1構(gòu)建大鼠視皮層神經(jīng)元培養(yǎng)體系,并鑒定神經(jīng)元的形態(tài)及電生理功能,以期為下一步實(shí)驗(yàn)提供狀態(tài)良好的神經(jīng)元細(xì)胞來(lái)源。2運(yùn)用tPA藥物增強(qiáng)/PAI-1藥物抑制神經(jīng)元tPA作用后,應(yīng)用tPA活性試劑盒檢測(cè)干擾tPA作用的效果,GAD67/MAP2免疫熒光顯色檢測(cè)干擾后GABA能神經(jīng)元表達(dá),膜片鉗技術(shù)檢測(cè)干擾后sIPSCs、mlPSCs及mEPSCs的改變以觀察tPA對(duì)GABA能神經(jīng)環(huán)路的抑制性突觸傳遞功能影響,了解tPA和GABA能神經(jīng)元、GABA神經(jīng)環(huán)路的作用關(guān)系,以探索tPA參與視皮層突觸發(fā)育可塑性及其激活作用的可能機(jī)制。結(jié)果1相差顯微鏡結(jié)果顯示所培養(yǎng)的神經(jīng)元胞體圓潤(rùn)、邊界清晰透亮；MAP2免疫細(xì)胞顯色法成功對(duì)所培養(yǎng)的神經(jīng)元進(jìn)行形態(tài)鑒定；膜片鉗技術(shù)對(duì)所培養(yǎng)的神經(jīng)元進(jìn)行了電生理功能檢測(cè),顯示神經(jīng)元可被誘發(fā)出單峰型、瞬變型、持續(xù)型的動(dòng)作電位,培養(yǎng)晚期的神經(jīng)元可被記錄到頻繁的自發(fā)性動(dòng)作電位,及典型的全細(xì)胞電流曲線以及微小性抑制性突觸后電流。2運(yùn)用tPA增強(qiáng)/PAI-1抑制神經(jīng)元tPA作用后,應(yīng)用tPA活性試劑盒檢測(cè)示tPA作用成功被tPA增強(qiáng)(P0.05)及被PAI-1抑制(P0.05)；GAD67/MAP2雙重免疫熒光標(biāo)記顯色檢測(cè)示PAI-1及tPA處理后,未見(jiàn)神經(jīng)元密度明顯改變(P0.05),而PAI-1組的GAD67陽(yáng)性細(xì)胞密度及GAD67/MAP2比例顯著增高(P0.05),tPA組GAD67陽(yáng)性細(xì)胞密度及GAD67/MAP2比例則未見(jiàn)顯著改變(P0.05)；膜片鉗技術(shù)檢測(cè)示PAI-1及tPA處理后,PAI-1組sIPSC及mIPSCs、mEPSCs的電流幅度及頻率顯著增高(P0.05),tPA組sIPSC的電流頻率顯著降低(P0.05)而sIPSCs的電流幅度以及mlPSCs與mEPSCs的電流頻率及幅度未見(jiàn)顯著改變(P0.05)。結(jié)論1構(gòu)建了一個(gè)成本經(jīng)濟(jì)、穩(wěn)定高效、神經(jīng)元生長(zhǎng)狀態(tài)及電生理功能良好的大鼠視皮層神經(jīng)元培養(yǎng)體系。2 tPA可抑制GABA能抑制性神經(jīng)環(huán)路的形成,并降低其抑制性突觸傳遞功能,使GABA能抑制性突觸結(jié)構(gòu)、功能趨于幼稚化,這可能是tPA參與并激活視皮層可塑性的作用機(jī)制之一。
【關(guān)鍵詞】：神經(jīng)元培養(yǎng) 膜片鉗 tPA GABA
【學(xué)位授予單位】：重慶醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R777.44
【目錄】：

• 符號(hào)說(shuō)明5-7
• 中文摘要7-10
• 英文摘要10-15
• 前言15-18
• 參考文獻(xiàn)17-18
• 第一部分 大鼠視皮層神經(jīng)元培養(yǎng)及其形態(tài)、電生理功能鑒定18-30
• 1 實(shí)驗(yàn)材料18-21
• 2 實(shí)驗(yàn)方法21-23
• 3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果23-27
• 4 討論27-29
• 參考文獻(xiàn)29-30
• 第二部分 組織型纖溶酶原激活劑對(duì)視皮層γ—氨基丁酸能神經(jīng)元表達(dá)及其抑制性突觸傳遞功能的影響30-47
• 1 實(shí)驗(yàn)材料30-31
• 2 實(shí)驗(yàn)方法31-35
• 3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果35-42
• 4 討論42-45
• 參考文獻(xiàn)45-47
• 全文總結(jié)47-48
• 文獻(xiàn)綜述48-58
• 參考文獻(xiàn)52-58
• 致謝58-59
• 碩士期間發(fā)表的論文59

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中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 黃江濤;劉深泉;馬在光;;視皮層中神經(jīng)元的同步發(fā)放現(xiàn)象[J];中國(guó)生物醫(yī)學(xué)工程學(xué)報(bào);2009年02期

2 姚軍平;祝芹芳;;視皮層可塑性的分子生物學(xué)研究進(jìn)展[J];中國(guó)醫(yī)藥指南;2012年15期

3 李O燦，

本文編號(hào)：532325