本文關鍵詞：喉鱗癌中mir-193b的表達及其對Hep-2細胞增殖的影響，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的：應用實時熒光定量PCR驗證喉鱗癌組織miR-193b的表達情況。構(gòu)建hsa-miR-193b-3p慢病毒表達載體,制備并包裝慢病毒,培養(yǎng)能夠穩(wěn)定表達目的基因的喉鱗狀細胞癌Hep-2細胞株。探討反義寡核苷酸重組慢病毒(ASO-miR-193b)對喉鱗癌細胞生物學行為的影響。方法：采用實時熒光定量PCR檢測喉癌組織以及癌旁組織中miR-193b的表達情況。設計并構(gòu)建miR-193b質(zhì)粒表達載體,共轉(zhuǎn)染293T細胞后得到下調(diào)miR-193b表達的慢病毒載體。實驗均分三組：實驗組(miR-193b)、空白組、陰性對照組(NC),將其轉(zhuǎn)染喉鱗癌Hep-2細胞,實時熒光定量PCR(Q-PCR)檢測miR-193b的表達水平來驗證其轉(zhuǎn)染效率。轉(zhuǎn)染喉鱗癌Hep-2細胞后通過CCK-8增殖實驗、克隆形成實驗等觀察其對Hep-2細胞增殖能力的影響。結(jié)果：Q-PCR檢測發(fā)現(xiàn)喉鱗癌組織較癌旁組織miR-193b表達水平顯著升高。成功構(gòu)建下調(diào)hsa-miR-193b表達的慢病毒表達載體,滴度為1×108TU/ml的慢病毒顆粒。慢病毒載體下調(diào)Hep-2細胞內(nèi)miR-193b的表達,細胞克隆形成率與對照組相比明顯降低,P0.05,48-72h組與對照組相比,ASO-miR-193b Hep-2細胞吸光度明顯減少(P0.05)。結(jié)論：本研究發(fā)現(xiàn)喉癌組織較癌旁組織miR-193b表達顯著上調(diào),提示miR-193b高表達可能與喉癌的發(fā)生發(fā)展相關。成功構(gòu)建穩(wěn)定且高表達的反義miR-193b的慢病毒表達載體。ASO-miR-193b可有效抑制喉癌細胞增殖。從而說明miR-193b的發(fā)揮致癌作用,為喉癌的基因治療提供新的治療靶點和理論依據(jù)。
【關鍵詞】：miR-193b 慢病毒 喉鱗癌 反義寡核苷酸 增殖
【學位授予單位】：延邊大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R739.65
【目錄】：

• 中文摘要6-7
• Abstract7-11
• 第一章 緒論11-13
• 第二章 資料與方法13-22
• 2.1 研究對象13
• 2.2 主要試劑和實驗儀器13-14
• 2.2.1 實驗試劑13
• 2.2.2 實驗材料13-14
• 2.2.3 實驗儀器14
• 2.3 實驗方法14-21
• 2.3.1 組織標本收集14
• 2.3.2 實時熒光定量PCR檢測miRNA-193b在喉癌組織中的表達14-17
• 2.3.3 細胞培養(yǎng)17-18
• 2.3.4 慢病毒載體的構(gòu)建與鑒定18-21
• 2.3.5 microRNA-193b重組慢病毒轉(zhuǎn)染喉鱗癌Hep-2細胞21
• 2.3.6 CCK8法檢測細胞增殖率21
• 2.3.7 克隆形成實驗檢測喉鱗癌Hep-2細胞的增殖21
• 2.4 統(tǒng)計學處理21-22
• 第三章 結(jié)果22-28
• 3.1 反義miRNA-193b慢病毒載體的構(gòu)建與鑒定22-24
• 3.2 Real-time PCR檢測miR-193b在喉鱗癌組織中高表達24-25
• 3.3 重組慢病毒ASO-miR-193b的轉(zhuǎn)染效率25-26
• 3.4 Real-time PCR檢測ASO-miR-193b在喉鱗癌Hep-2細胞中的表達26
• 3.5 ASO-miR-193b抑制喉鱗癌細胞增殖26-28
• 第四章 討論28-31
• 第五章 結(jié)論31-32
• 致謝32-33
• 參考文獻33-37
• 附錄37-38
• 綜述38-47
• 參考文獻43-47

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