本文關(guān)鍵詞：喉鱗癌中mir-193b的表達(dá)及其對(duì)Hep-2細(xì)胞增殖的影響，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的：應(yīng)用實(shí)時(shí)熒光定量PCR驗(yàn)證喉鱗癌組織miR-193b的表達(dá)情況。構(gòu)建hsa-miR-193b-3p慢病毒表達(dá)載體,制備并包裝慢病毒,培養(yǎng)能夠穩(wěn)定表達(dá)目的基因的喉鱗狀細(xì)胞癌Hep-2細(xì)胞株。探討反義寡核苷酸重組慢病毒(ASO-miR-193b)對(duì)喉鱗癌細(xì)胞生物學(xué)行為的影響。方法：采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測喉癌組織以及癌旁組織中miR-193b的表達(dá)情況。設(shè)計(jì)并構(gòu)建miR-193b質(zhì)粒表達(dá)載體,共轉(zhuǎn)染293T細(xì)胞后得到下調(diào)miR-193b表達(dá)的慢病毒載體。實(shí)驗(yàn)均分三組：實(shí)驗(yàn)組(miR-193b)、空白組、陰性對(duì)照組(NC),將其轉(zhuǎn)染喉鱗癌Hep-2細(xì)胞,實(shí)時(shí)熒光定量PCR(Q-PCR)檢測miR-193b的表達(dá)水平來驗(yàn)證其轉(zhuǎn)染效率。轉(zhuǎn)染喉鱗癌Hep-2細(xì)胞后通過CCK-8增殖實(shí)驗(yàn)、克隆形成實(shí)驗(yàn)等觀察其對(duì)Hep-2細(xì)胞增殖能力的影響。結(jié)果：Q-PCR檢測發(fā)現(xiàn)喉鱗癌組織較癌旁組織miR-193b表達(dá)水平顯著升高。成功構(gòu)建下調(diào)hsa-miR-193b表達(dá)的慢病毒表達(dá)載體,滴度為1×108TU/ml的慢病毒顆粒。慢病毒載體下調(diào)Hep-2細(xì)胞內(nèi)miR-193b的表達(dá),細(xì)胞克隆形成率與對(duì)照組相比明顯降低,P0.05,48-72h組與對(duì)照組相比,ASO-miR-193b Hep-2細(xì)胞吸光度明顯減少(P0.05)。結(jié)論：本研究發(fā)現(xiàn)喉癌組織較癌旁組織miR-193b表達(dá)顯著上調(diào),提示miR-193b高表達(dá)可能與喉癌的發(fā)生發(fā)展相關(guān)。成功構(gòu)建穩(wěn)定且高表達(dá)的反義miR-193b的慢病毒表達(dá)載體。ASO-miR-193b可有效抑制喉癌細(xì)胞增殖。從而說明miR-193b的發(fā)揮致癌作用,為喉癌的基因治療提供新的治療靶點(diǎn)和理論依據(jù)。
【關(guān)鍵詞】：miR-193b 慢病毒 喉鱗癌 反義寡核苷酸 增殖
【學(xué)位授予單位】：延邊大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R739.65
【目錄】：

• 中文摘要6-7
• Abstract7-11
• 第一章 緒論11-13
• 第二章 資料與方法13-22
• 2.1 研究對(duì)象13
• 2.2 主要試劑和實(shí)驗(yàn)儀器13-14
• 2.2.1 實(shí)驗(yàn)試劑13
• 2.2.2 實(shí)驗(yàn)材料13-14
• 2.2.3 實(shí)驗(yàn)儀器14
• 2.3 實(shí)驗(yàn)方法14-21
• 2.3.1 組織標(biāo)本收集14
• 2.3.2 實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測miRNA-193b在喉癌組織中的表達(dá)14-17
• 2.3.3 細(xì)胞培養(yǎng)17-18
• 2.3.4 慢病毒載體的構(gòu)建與鑒定18-21
• 2.3.5 microRNA-193b重組慢病毒轉(zhuǎn)染喉鱗癌Hep-2細(xì)胞21
• 2.3.6 CCK8法檢測細(xì)胞增殖率21
• 2.3.7 克隆形成實(shí)驗(yàn)檢測喉鱗癌Hep-2細(xì)胞的增殖21
• 2.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理21-22
• 第三章 結(jié)果22-28
• 3.1 反義miRNA-193b慢病毒載體的構(gòu)建與鑒定22-24
• 3.2 Real-time PCR檢測miR-193b在喉鱗癌組織中高表達(dá)24-25
• 3.3 重組慢病毒ASO-miR-193b的轉(zhuǎn)染效率25-26
• 3.4 Real-time PCR檢測ASO-miR-193b在喉鱗癌Hep-2細(xì)胞中的表達(dá)26
• 3.5 ASO-miR-193b抑制喉鱗癌細(xì)胞增殖26-28
• 第四章 討論28-31
• 第五章 結(jié)論31-32
• 致謝32-33
• 參考文獻(xiàn)33-37
• 附錄37-38
• 綜述38-47
• 參考文獻(xiàn)43-47

【相似文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 王大力;楊懷安;王鐵;;尿激酶型纖溶酶原激活劑受體在喉鱗癌中的表達(dá)及意義[J];中國醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào);2006年02期

2 曹峰;徐潔潔;喬明哲;陳曦;陸美萍;汪淵;;喉鱗癌中內(nèi)皮細(xì)胞特異性分子1的表達(dá)及臨床意義[J];江蘇醫(yī)藥;2008年05期

3 劉成;胡金旺;;手術(shù)治療晚期喉鱗癌的優(yōu)勢分析[J];貴陽中醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào);2013年05期

4 張曉晴,劉世喜,周光耀,梁傳余,林代誠,喬小明;抑癌基因p53第5～8外顯子突變與喉鱗癌關(guān)系的研究[J];華西醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào);2000年03期

5 杜波,王蘋,郭曉峰,杜寶東;膜型基質(zhì)金屬蛋白酶-1在喉鱗癌中的表達(dá)[J];耳鼻咽喉頭頸外科;2000年04期

6 張曉晴,林代誠,梁傳余;抑癌基因p53與喉鱗癌[J];華西醫(yī)學(xué);2000年03期

7 王利華,毋桂花,王斌全;P~(73)基因在喉鱗癌中的表達(dá)及相關(guān)性研究[J];山西中醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào);2002年01期

8 王中亮,陳堯,周斌,梁傳余,張林,李瑞祥;血管內(nèi)皮生長因子C在喉鱗癌中的表達(dá)[J];四川大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版);2004年01期

9 馬占龍,鄧紅;血管內(nèi)皮細(xì)胞生長因子、凋亡抑制基因蛋白的表達(dá)與喉鱗癌的關(guān)系[J];北京醫(yī)學(xué);2004年01期

10 汪照炎,王家東;喉鱗癌血管內(nèi)皮生長因子的表達(dá)及其臨床意義[J];中國耳鼻咽喉顱底外科雜志;2004年02期

中國重要會(huì)議論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 林山;鄭海洲;汪審清;戴利波;;喉鱗癌血管生成、凋亡的表達(dá)及其相關(guān)性研究[A];2005年浙江省耳鼻咽喉科學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2005年

2 王燕;陶澤璋;陳始明;肖伯奎;;多基因共沉默治療喉鱗癌的實(shí)驗(yàn)研究[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)第十次全國耳鼻咽喉-頭頸外科學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編（上）[C];2007年

3 劉勇;李果;粟忠武;邱元正;張欣;余長云;任舒靈;田勇泉;;星形膠質(zhì)細(xì)胞上調(diào)基因-1在喉鱗癌中的表達(dá)及其臨床意義[A];全國耳鼻咽喉頭頸外科中青年學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2012年

4 朱卉;于振坤;黃志剛;房居高;范爾鐘;李穎;;喉鱗癌上皮間質(zhì)化現(xiàn)象動(dòng)態(tài)觀察[A];2010全國耳鼻咽喉頭頸外科中青年學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2010年

5 曾泉;胡國華;朱江;柯霞;;喉鱗癌的中央?yún)^(qū)頸淋巴結(jié)清掃術(shù)[A];全國耳鼻咽喉頭頸外科中青年學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2012年

6 王超;金德均;王宇;;重組人內(nèi)皮抑素抑制喉鱗癌生長作用機(jī)制的初討[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)第十次全國耳鼻咽喉-頭頸外科學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編（下）[C];2007年

7 呂團(tuán)偉;翟妍;劉冰;;喉鱗癌微衛(wèi)星不穩(wěn)定性及雜合性丟失的研究[A];吉林省第六屆生命科學(xué)大型學(xué)術(shù)報(bào)告會(huì)論文集[C];2008年

8 朱剛才;蔡耿明;李果;劉勇;張欣;崔湘凝;譚浩蕾;余長云;黃東海;;泛素蛋白在轉(zhuǎn)移性喉鱗癌組織中的表達(dá)及臨床意義[A];全國耳鼻咽喉頭頸外科中青年學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2012年

9 陳立;梁傳余;歐華;溫蓓;李國義;;基質(zhì)金屬蛋白酶-2活性在人喉鱗癌浸潤轉(zhuǎn)移中的作用[A];2010全國耳鼻咽喉頭頸外科中青年學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2010年

10 卓賢露;向召蘭;姜振東;李琪;袁偉;;Livin在喉癌中的表達(dá)及其與血管生成的關(guān)系[A];2010全國耳鼻咽喉頭頸外科中青年學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2010年

中國重要報(bào)紙全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 李立安;KAI1基因與喉鱗癌發(fā)生發(fā)展相關(guān)[N];中國醫(yī)藥報(bào);2003年

中國博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 韓瑞珠;細(xì)胞凋亡相關(guān)基因在喉鱗癌中的表達(dá)及意義[D];復(fù)旦大學(xué);2005年

2 張宗敏;轉(zhuǎn)錄組異常改變與喉鱗癌復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移的研究[D];中國協(xié)和醫(yī)科大學(xué);2004年

3 張?jiān)倥d;喉鱗癌相關(guān)蛋白質(zhì)組學(xué)研究及腫瘤標(biāo)志物的鑒定[D];北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院;2011年

4 李亮;區(qū)域癌化與喉鱗癌外科手術(shù)切緣的研究[D];山西醫(yī)科大學(xué);2014年

5 龔洪立;喉黏膜部位微生物分析及其與喉鱗癌關(guān)系的研究[D];復(fù)旦大學(xué);2013年

6 徐鷗;喉鱗癌微環(huán)境乏氧的客觀評(píng)估及有效改善乏氧對(duì)喉鱗癌化療抵抗的影響[D];河北醫(yī)科大學(xué);2012年

7 袁彤;BNIP3基因表達(dá)及其啟動(dòng)子超甲基化與喉鱗癌發(fā)生發(fā)展的研究[D];吉林大學(xué);2008年

8 張海利;MTA1基因表達(dá)與喉鱗癌侵襲轉(zhuǎn)移的相關(guān)性及其調(diào)控作用的研究[D];山西醫(yī)科大學(xué);2012年

9 張柏濤;高效表達(dá)RKIP基因?qū)θ撕眵[癌化療增敏作用的實(shí)驗(yàn)研究[D];吉林大學(xué);2010年

10 程艷;前哨淋巴結(jié)檢測及腫瘤—睪丸抗原表達(dá)與喉鱗癌侵襲轉(zhuǎn)移的相關(guān)研究[D];山西醫(yī)科大學(xué);2009年

中國碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 詹雅光;喉鱗癌中mir-193b的表達(dá)及其對(duì)Hep-2細(xì)胞增殖的影響[D];延邊大學(xué);2015年

2 劉騰飛;DKK1、SFRP4和Wnt1在喉鱗狀細(xì)胞癌中的表達(dá)及意義[D];河北醫(yī)科大學(xué);2015年

3 趙穎;趨化因子CXCL12及其受體CXCR4、CXCR7在喉鱗癌組織中的表達(dá)及意義[D];河北醫(yī)科大學(xué);2015年

4 武曉龍;喉癌中VASH1與微血管密度、微淋巴管密度的關(guān)系及臨床意義[D];河北醫(yī)科大學(xué);2015年

5 張晨;AMFR和NID-2在喉鱗癌組織的表達(dá)及臨床意義[D];山西醫(yī)科大學(xué);2015年

6 郭修棟;術(shù)后輔助治療在喉鱗癌患者中的預(yù)后價(jià)值[D];山西醫(yī)科大學(xué);2011年

7 劉濤;骨橋蛋白誘導(dǎo)的信號(hào)途徑與喉鱗癌發(fā)生發(fā)展的相關(guān)性研究[D];鄭州大學(xué);2007年

8 李兆芳;血管內(nèi)皮生長因子及其受體在喉鱗癌中的表達(dá)[D];山西醫(yī)科大學(xué);2004年

9 金明;成束蛋白在喉鱗癌中的表達(dá)及其意義[D];延邊大學(xué);2012年

10 呂團(tuán)偉;喉鱗癌微衛(wèi)星不穩(wěn)定性及雜合性丟失的研究[D];吉林大學(xué);2008年

  本文關(guān)鍵詞：喉鱗癌中mir-193b的表達(dá)及其對(duì)Hep-2細(xì)胞增殖的影響，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

，

本文編號(hào)：486484