本文關(guān)鍵詞：熱休克蛋白抑制劑對(duì)人鼻咽癌細(xì)胞增殖和凋亡的研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：實(shí)驗(yàn)?zāi)康?研究不同濃度的Hsp90抑制劑17-AAG和兒茶素(EGCG)單藥或聯(lián)合使用時(shí)對(duì)人鼻咽癌CNE細(xì)胞的凋亡誘導(dǎo)作用,以探討新的分子靶點(diǎn)對(duì)鼻咽癌的治療,為Hsp90抑制劑單獨(dú)或聯(lián)合兒茶素(EGCG)治療鼻咽癌、增強(qiáng)其治療效果提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。實(shí)驗(yàn)方法:1.MTT比色法檢測(cè)藥物抑制效應(yīng),研究不同濃度的17-AAG、EGCG單藥或聯(lián)合作用24h、48h和72h對(duì)人鼻咽癌CNE細(xì)胞的體外增殖抑制效應(yīng);2.利用Hoechst 33258熒光染色法觀(guān)察人鼻咽癌CNE細(xì)胞在不同濃度17-AAG、EGCG單藥或聯(lián)合作用48h引起的細(xì)胞形態(tài)學(xué)的變化;3.利用吖啶橙(A0)熒光染色法在熒光顯微鏡下觀(guān)察人鼻咽癌CNE細(xì)胞在17-AAG(0.625μmol/L)、EGCG(80mg/L)單獨(dú)以及聯(lián)合作用48h引起的細(xì)胞形態(tài)學(xué)的變化;4.利用吖啶橙(A0)/溴化乙錠(EB)熒光雙染色法在熒光顯微鏡下觀(guān)察人鼻咽癌CNE細(xì)胞在不同濃度17-AAG、EGCG單藥及聯(lián)合作用48h,引起的細(xì)胞形態(tài)學(xué)的變化;5.流式細(xì)胞術(shù)(FACS)分析不同濃度17-AAG、EGCG單獨(dú)及聯(lián)合用藥48h對(duì)人鼻咽癌CNE細(xì)胞周期的變化;6.Annexin V-FITC/PI雙染法檢測(cè)人鼻咽癌CNE細(xì)胞在17-AAG(0.625μmol/L)、EGCG(40mg/L)單獨(dú)以及聯(lián)合作用48h,細(xì)胞凋亡率的變化;7.RT-PCR法檢測(cè)CNE細(xì)胞在17-AAG(0.625μmol/L)、EGCG(80mg/L)單獨(dú)以及聯(lián)合作用48h,凋亡基因Bcl-2、Bax的m RNA表達(dá)和凋亡信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)分子Caspase-3的m RNA表達(dá)。8.Western Blotting檢測(cè)人鼻咽癌CNE細(xì)胞在EGCG(60、80、100mg/L)分別單獨(dú)以及聯(lián)合17-AAG(0.625μmol/L)作用48h,Bax、Bcl-2蛋白表達(dá)的變化。9.統(tǒng)計(jì)學(xué)處理,采用SPSS 22.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析,以P0.05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。實(shí)驗(yàn)結(jié)果:1.MTT比色法檢測(cè)藥物抑制效應(yīng):17-AAG(0.315、0.625、1.25、2.5、5μmol/L)作用于人鼻咽癌CNE細(xì)胞24h、48h和72h,EGCG(40、60、80、100mg/L)作用于人鼻咽癌CNE細(xì)胞24h、48h和72h.均對(duì)人鼻咽癌CNE細(xì)胞有抑制作用,其抑制作用與時(shí)間和劑量相關(guān),差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01)。17-AAG(0.625μmol/L)和EGCG(40、60、80、100mg/L)兩者聯(lián)合使用呈現(xiàn)抑制效果的顯著增加,且與EGCG的濃度和作用時(shí)間的正相關(guān),差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01)。2.光學(xué)顯微鏡、熒光顯微鏡(Hoechst 33258熒光染色、A0熒光染色、A0/EB熒光雙染色后)下觀(guān)察細(xì)胞形態(tài)的變化:隨著藥物濃度的增加細(xì)胞形態(tài)不規(guī)則隨之增多、染色質(zhì)濃縮、核固縮、凋亡小體、自噬泡等也增多,對(duì)照組的細(xì)胞形態(tài)良好。3.用流式細(xì)胞術(shù)(FACS)分析檢測(cè)人鼻咽癌CNE細(xì)胞的周期:不同濃度17-AAG和EGCG單獨(dú)及聯(lián)合用藥48h,經(jīng)FACS分析結(jié)果顯示,單獨(dú)用藥時(shí)17-AAG阻滯人鼻咽癌CNE細(xì)胞主要在S期,EGCG阻滯人鼻咽癌CNE細(xì)胞主要在G2/M期,17-AAG和EGCG聯(lián)合用藥時(shí)阻滯人鼻咽癌CNE細(xì)胞主要在G2/M期和S期,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01)。4.Annexin V-FITC/PI雙染法檢測(cè)人鼻咽癌CNE細(xì)胞凋亡率的變化:17-AAG(0.625μmol/L)、EGCG(40mg/L)單獨(dú)及聯(lián)合用藥48h,經(jīng)FACS分析結(jié)果顯示,聯(lián)合用藥組比單獨(dú)用藥組的CNE細(xì)胞凋亡率高,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01)。5.RT-PCR法檢測(cè)Bcl-2、Bax、Caspase-3的m RNA表達(dá):分別選取EGCG(80mg/L)、17-AAG(0.625μmol/L)單獨(dú)以及聯(lián)合作用于人鼻咽癌CNE細(xì)胞48h,Caspase-3和Bax的m RNA表達(dá),聯(lián)合用藥時(shí)明顯高于單獨(dú)用藥時(shí),并且Bcl-2的m RNA表達(dá)聯(lián)合用藥時(shí)明顯低于單獨(dú)用藥時(shí)。6.用Western Blotting檢測(cè)Bax、Bcl-2蛋白表達(dá)的變化:分別選取EGCG(40、60、80、100mg/L),17-AAG(0.625μmol/L)單獨(dú)以及聯(lián)合作用于人鼻咽癌CNE細(xì)胞48h,17-AAG和EGCG聯(lián)合用藥時(shí)Bax蛋白的表達(dá)明顯高于單獨(dú)用藥時(shí),17-AAG和EGCG聯(lián)合用藥時(shí)Bcl-2蛋白的表達(dá)也明顯低于單獨(dú)用藥。實(shí)驗(yàn)結(jié)論:作為新型的抗腫瘤藥物,17-AAG和EGCG單獨(dú)及聯(lián)合均能有效抑制人鼻咽癌CNE細(xì)胞的體外增殖,聯(lián)合使用時(shí)抑制效果更加明顯呈現(xiàn)抑制協(xié)同,作用均呈時(shí)間和劑量的依賴(lài)性。其作用機(jī)制可能與上調(diào)Bax和Caspase-3、下調(diào)Bcl-2的表達(dá)有關(guān)。
【關(guān)鍵詞】：人鼻咽癌 EGCG 熱休克蛋白 17-AAG
【學(xué)位授予單位】：延安大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類(lèi)號(hào)】：R739.63
【目錄】：

• 摘要3-6
• Abstract6-12
• 前言12-16
• 實(shí)驗(yàn)材料16-22
• 1.細(xì)胞株16
• 2.主要試劑16-17
• 3.主要儀器17-19
• 4.試劑配制19-22
• 實(shí)驗(yàn)方法22-32
• 1.細(xì)胞培養(yǎng)22-23
• 2.MTT法檢測(cè)細(xì)胞增殖抑制率23-24
• 3.顯微鏡下觀(guān)察 17-AAG、EGCG單獨(dú)及聯(lián)合作用下CNE細(xì)胞形態(tài)變化24-25
• 4.Hoechst 33258熒光染色法觀(guān)察 17-AAG、EGCG單獨(dú)及聯(lián)合作用下CNE細(xì)胞形態(tài)變化25
• 5.利用吖啶橙(A0)熒光染色法觀(guān)察在 17-AAG聯(lián)合EGCG作用下CNE細(xì)胞形態(tài)變化25-26
• 6.吖啶橙(A0)/溴化乙錠(EB)熒光雙染色法觀(guān)察 17-AAG、EGCG單獨(dú)及聯(lián)合作用下CNE細(xì)胞形態(tài)變化26-27
• 7.流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞周期27
• 8.Annexin V- FITC/PI雙染法檢測(cè)細(xì)胞凋亡率的變化27-28
• 9.RT-PCR法檢測(cè)Bcl-2、Bax和Caspase-3 mRNA表達(dá)28-29
• 10.Western Blotting檢測(cè)檢測(cè)Bax、Bcl-2 蛋白表達(dá)的變化29-31
• 11.統(tǒng)計(jì)學(xué)處理31-32
• 實(shí)驗(yàn)結(jié)果32-54
• 1.MTT法檢測(cè)細(xì)胞增殖抑制率32-37
• 2.顯微鏡下觀(guān)察 17-AAG、EGCG單獨(dú)或聯(lián)合作用下CNE細(xì)胞形態(tài)變化37-39
• 3.熒光顯微鏡下觀(guān)察 17-AAG、EGCG單獨(dú)或聯(lián)合作用下CNE細(xì)胞形態(tài)變化39-45
• 4.流式細(xì)胞術(shù)分析細(xì)胞周期的變化45-48
• 5.Annexin V- FITC/PI雙染法檢測(cè)細(xì)胞凋亡率的變化48-50
• 6.RT-PCR法檢測(cè)Bcl-2、Bax和Caspase-3 mRNA表達(dá)50-51
• 7.Western Blotting檢測(cè)Bax、Bcl-2 蛋白表達(dá)的變化51-54
• 討論54-60
• 結(jié)論60-61
• 參考文獻(xiàn)61-70
• 綜述70-79
• 參考文獻(xiàn)75-79
• 致謝79-80
• 攻讀碩士期間發(fā)表論文80

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前1條

1 龐丹梅;鄧燕明;衛(wèi)光宇;;局部晚期鼻咽癌同步放化療單藥與聯(lián)合方案的療效對(duì)比[J];實(shí)用醫(yī)學(xué)雜志;2010年01期

  本文關(guān)鍵詞：熱休克蛋白抑制劑對(duì)人鼻咽癌細(xì)胞增殖和凋亡的研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號(hào)：453510