發(fā)布時(shí)間：2017-06-06 10:23

  本文關(guān)鍵詞：SNPscan法與Sanger測(cè)序法用于甘肅省特有少數(shù)民族非綜合征型耳聾患者常見聾病基因及高危新生兒聾病基因的對(duì)比分析研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的：比較SNPscan法與Sanger測(cè)序法對(duì)甘肅省特有少數(shù)民族非綜合征型耳聾患者進(jìn)行常見聾病基因檢測(cè)的優(yōu)缺點(diǎn)。方法：本課題選取甘肅省東鄉(xiāng)族(122例)、裕固族(11例)、保安族(18例)三個(gè)特有少數(shù)民族151例中度至極重度感音神經(jīng)性聾患者為研究對(duì)象,在知情同意的前提下,抽取靜脈血,用磁珠法提取基因組DNA,應(yīng)用SNPscan法對(duì)GJB2、SLC26A4和mtDNA常見115個(gè)突變位點(diǎn)進(jìn)行篩查。結(jié)果：1、SNPscan法對(duì)甘肅省特有少數(shù)民族151例非綜合征型耳聾患者進(jìn)行GJB2基因、mtDNA A1555G和mtDNA C1494T、SLC26A4基因常見115個(gè)突變位點(diǎn)篩查,上述三個(gè)基因總檢出率為23.18%(35/151),其中東鄉(xiāng)族、裕固族、保安族的檢出率分別為21.31%(26/122)、54.54%(6/11)、16.67%(3/18)。2、東鄉(xiāng)族122例患者的致病突變率為11.48%(14/122),等位基因頻率為17.21%(42/244),其中c.299_300delAT的等位基因頻率最高,為4.51%(11/244)。裕固族11例患者的致病突變率為45.45%(5/11),等位基因頻率為59.09%(13/22),其中c.35de1G的等位基因頻率最高,為18.18%(4/22)。保安族18例患者的致病突變率為5.56%(1/18),等位基因頻率為11.11%(4/36),其中c.109GA的等位基因頻率最高,為5.56%。3、東鄉(xiāng)族122例非綜合征型耳聾患者GJB2基因的致病突變率為9.83%(12/122),等位基因頻率為13.11%(11/244),其中c.299_300delAT的等位基因頻率最高,為4.51%(11/244)。裕固族11例非綜合征型耳聾患者GJB2基因的致病突變率為36.36%(4/11),等位基因頻率為40.91%(9/22),其中c.35de1G的等位基因頻率最高,為18.18%(4/22)。保安族18例非綜合征型耳聾患者GJB2基因的致病突變率為5.56%(1/18),等位基因頻率為11.11%(4/36),其中c.109GA的等位基因頻率最高,為5.56%(2/36)。結(jié)論：1、本研究應(yīng)用SNPcan方法對(duì)甘肅省東鄉(xiāng)族、裕固族、保安族151例非綜合征型耳聾患者進(jìn)行GJB2、SLC26A4、mtDNA三個(gè)聾病基因的常見115個(gè)突變位點(diǎn)進(jìn)行檢測(cè),證實(shí)了該方法在基因檢測(cè)中具有低成本、高通量、高準(zhǔn)確性的優(yōu)勢(shì),是一種適合甘肅特有少數(shù)民族非綜合征型耳聾患者常見聾病基因篩查的方法。2、甘肅省特有少數(shù)民族非綜合征型耳聾患者的熱點(diǎn)突變存在差異,在GJB2基因的篩查中,東鄉(xiāng)族突變頻率最高,裕固族次之,保安族最低,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；對(duì)SLC26A4基因篩查,只在東鄉(xiāng)族檢測(cè)出有突變；mtDNA基因突變?cè)谠９套逯袡z測(cè)出有1例突變。3、SNPscan法與傳統(tǒng)的只檢測(cè)GJB2基因的第二個(gè)外顯子Sanger測(cè)序法相比較,工作量較輕,耗費(fèi)時(shí)間短,通量較高,成本較低,具有更高的檢出率,得到更多的有意義的突變位點(diǎn),降低了假陰性率,因此在進(jìn)行全部外顯子測(cè)序前先進(jìn)行SNPscan法篩查顯得更有意義。4、SNPscan法能夠檢測(cè)出單核苷酸的拷貝數(shù)變異,而傳統(tǒng)的Sanger測(cè)序法則不能,拷貝數(shù)變異可能會(huì)導(dǎo)致耳聾,相對(duì)于傳統(tǒng)的Sanger測(cè)序提高了疾病診斷的陽(yáng)性率。目的：比較SNPscan法與Sanger測(cè)序法在甘肅省部分高危新生兒聾病基因篩查中的優(yōu)缺點(diǎn)。方法：本課題選取甘肅省蘭大二院、省人民醫(yī)院、省婦幼保健醫(yī)院、天水市婦幼保健醫(yī)院四所醫(yī)院重癥監(jiān)護(hù)室100新生兒為研究對(duì)象,在簽署知情同意書的前提下,對(duì)新生兒進(jìn)行聽力篩查,并抽取靜脈血,用磁珠法提取基因組DNA,應(yīng)用SNPscan方法對(duì)GJB2、SLC26A4和mtDNA常見115個(gè)突變位點(diǎn)進(jìn)行篩查。結(jié)果：1、本研究用SNPscan方法對(duì)甘肅省重癥監(jiān)護(hù)室100例新生兒進(jìn)行GJB2基因、mtDNA A1555G和mtDNA C1494T、SLC26A4基因常見115個(gè)突變位點(diǎn)篩查,上述三個(gè)基因總檢出率為14%。本研究共明確了2例新生兒攜帶有A1555 G均質(zhì)性突變,還檢測(cè)出了6例c.109GA、1例c.919-2AG、1例同時(shí)攜帶有c.235delC與c.919-2AG、1例c.1174AT、1例c.2027TA、1例c.299_300delAT、1例c.571TC單雜合突變。2、重癥監(jiān)護(hù)室的100例新生兒致病突變陽(yáng)性率為2%,突變等位基因檢出率為8.5%,其中c.109GA等位基因頻率最高,為3%,其次為A1555G,等位基因頻率為2%,再次為c.919-2AG,最后為c.235de1C、c.1174AT、c.2027TA、 c.299_300delAT、c.571TC,等位基因頻率分別為1%、0.5%、0.5%、0.5%(1/200)、0.5%、0.5%。結(jié)論：1.本次研究采用SNPscan法對(duì)甘肅省重癥監(jiān)護(hù)室100例新生兒針對(duì)GJB2、SLC26A4、mtDNA三個(gè)常見聾病基因的常見115個(gè)突變位點(diǎn)進(jìn)行檢測(cè),最終明確了2例新生兒存在A1555G均質(zhì)性突變,還檢測(cè)出了6例c.109GA、1例c.919-2AG、1例同時(shí)攜帶有c235de1C與c.919-2AG、1例c.1174AT、1例c.2027TA、1例c.299_300delAT、1例c.571TC單雜合突變,三個(gè)常見聾病基因的致病突變檢出率為2%,等位基因檢出率為8.5%。2.相對(duì)于課題組以往采用的Sanger測(cè)序法,SNPscan法在降低測(cè)序成本的同時(shí),速度、通量都得到了巨大提高,而且其操作簡(jiǎn)便,大大提高了對(duì)聾病基因的篩查效率,是一種適合甘肅省新生兒的大規(guī)模聾病基因篩查的方法。
【關(guān)鍵詞】：SNPscan Sanger GJB2 mtDNA A1555G mtDNA C1494T SLC東鄉(xiāng)族 裕固族 保安族 突變 耳聾 SNPscan Sanger 耳聾 重癥監(jiān)護(hù)室 高危因素 新生兒 GJB2 SLC26A4 mtDNA C1494T mtDNAA1555G
【學(xué)位授予單位】：蘭州大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R764.43
【目錄】：

• 第一部分 中文摘要3-5
• The First Part Abstract5-7
• 第二部分 中文摘要7-8
• The Second Part Abstract8-10
• 英文縮略河表10-15
• 第一部分15-51
• 第一章 前言15-17
• 第二章 材料及方法17-30
• 2.1 研究對(duì)象17
• 2.1.1 入選標(biāo)準(zhǔn)17
• 2.1.2 排除標(biāo)準(zhǔn)17
• 2.2 研究對(duì)象資料采集17-19
• 2.2.1 病史資料采集17-18
• 2.2.2 耳鼻咽喉及全身檢查18
• 2.2.3 聽力學(xué)檢查18
• 2.2.4 血樣采集18-19
• 2.3 檢測(cè)和評(píng)估標(biāo)準(zhǔn)19-20
• 2.3.1 儀器19
• 2.3.2 聽力學(xué)檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)19
• 2.3.3 聽力學(xué)評(píng)估19-20
• 2.4 實(shí)驗(yàn)材料20-21
• 2.4.1 試劑及儀器20-21
• 2.5 相關(guān)互聯(lián)網(wǎng)網(wǎng)站和軟件21
• 2.6 實(shí)驗(yàn)方法21-30
• 2.6.1 磁珠法提取基因組DNA21-22
• 2.6.2 基因組DNA的檢測(cè)分析22-23
• 2.6.3 SNPscan法針對(duì)GJB2、mtDNA、SLC26A4基因進(jìn)行檢測(cè)23-24
• 2.6.4 Sanger測(cè)序法針對(duì)GJB2、mtDNA、SLC26A4基因進(jìn)行檢測(cè)24-29
• 2.6.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析29-30
• 第三章 結(jié)果30-41
• 3.1 臨床資料結(jié)果30-31
• 3.1.1 研究對(duì)象性別、年齡分布30
• 3.1.2 各民族聽力損失分級(jí)情況30-31
• 3.2 GJB2、SLC26A4和mtDNA基因突變檢測(cè)結(jié)果31-41
• 3.2.1 應(yīng)用SNPscan法對(duì)各族進(jìn)行常見聾病基因檢測(cè)的結(jié)果31-32
• 3.2.2 Sanger測(cè)序法對(duì)各民族進(jìn)行常見聾病基因檢測(cè)的結(jié)果32-33
• 3.2.3 Sanger測(cè)序法各族基因突變等位基因數(shù)檢測(cè)結(jié)果33-34
• 3.2.4 應(yīng)用SNPscan法對(duì)各民族進(jìn)行GJB2基因檢測(cè)的結(jié)果34-35
• 3.2.5 應(yīng)用Sanger測(cè)序法對(duì)各民族進(jìn)行GJB2基因檢測(cè)的結(jié)果35
• 3.2.6 應(yīng)用SNPscan法對(duì)各民族進(jìn)行SLC26A4基因檢測(cè)的結(jié)果35-36
• 3.2.7 應(yīng)用Sanger測(cè)序法對(duì)各民族進(jìn)行SLC26A4基因檢測(cè)的結(jié)果36
• 3.2.8 應(yīng)用SNPscan法對(duì)各民族進(jìn)行mtDNA基因檢測(cè)的結(jié)果36
• 3.2.9 應(yīng)用Sanger測(cè)序法對(duì)各民族進(jìn)行mtDNA基因檢測(cè)的結(jié)果36-37
• 3.2.10 SNPscan法對(duì)各民族基因突變位點(diǎn)檢測(cè)截圖37-38
• 3.2.11 Sanger測(cè)序法SNPscan法對(duì)各民族基因突變位點(diǎn)檢測(cè)截圖38-39
• 3.2.12 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析39-41
• 第四章 討論41-46
• 4.1 SNPscan法在甘肅特有少數(shù)民族常見聾病基因篩查的流行病學(xué)分析41-42
• 4.2 SNPscan法與Sanger測(cè)序法在甘肅特有少數(shù)民族常見聾病基因篩查的對(duì)比研究42-46
• 第五章 結(jié)論46-47
• 第一部分 參考文獻(xiàn)47-51
• 第二部分51-68
• 第一章 前言51-54
• 第二章 材料及方法54-58
• 2.1 研究對(duì)象54
• 2.1.1 入選標(biāo)準(zhǔn)54
• 2.1.2 排除標(biāo)準(zhǔn)54
• 2.2 研究對(duì)象資料采集54-55
• 2.2.1 病史資料采集54-55
• 2.2.2 耳鼻咽喉及全身檢查55
• 2.2.3 血樣采集55
• 2.3 檢測(cè)和評(píng)估標(biāo)準(zhǔn)55
• 2.4 實(shí)驗(yàn)材料55-56
• 2.4.1 儀器及試劑55-56
• 2.5 相關(guān)互聯(lián)網(wǎng)網(wǎng)站及軟件56
• 2.6 實(shí)驗(yàn)方法56-58
• 2.6.1 磁珠法提取基因組DNA56
• 2.6.2 基因組DNA的檢測(cè)分析56-57
• 2.6.3 SNPsacn法針對(duì)GJB2,mtDNA、SLC26A4基因進(jìn)行檢測(cè)57
• 2.6.4 Sanger測(cè)序針對(duì)GJB2、mtDNA、SLC26A4基因進(jìn)行檢測(cè)57
• 2.6.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析57-58
• 第三章 結(jié)果58-61
• 3.1 臨床資料結(jié)果58
• 3.1.1 研究對(duì)象性別、年齡分布58
• 3.2 GJB2、mtDNA、SLC26A4基因突變檢測(cè)結(jié)果58-59
• 3.2.1 SNPscan法在甘肅省重癥監(jiān)護(hù)室100例新生兒聾病基因篩查結(jié)果58-59
• 3.2.2 Sanger測(cè)序法對(duì)重癥監(jiān)護(hù)室1306例新生兒進(jìn)行聾病基因篩查結(jié)果59
• 3.3 致病突變位點(diǎn)截圖59-60
• 3.3.1 SNPscan法100例重癥監(jiān)護(hù)室新生兒mtDNA A1555G突變位點(diǎn)截圖59-60
• 3.3.2 Sanger測(cè)序法對(duì)甘肅省1306例新生兒聾病基因篩查致病突變位點(diǎn)截圖60
• 3.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析結(jié)果60-61
• 第四章 討論61-65
• 4.1 甘肅省重癥監(jiān)護(hù)室100例新生兒聾病基因篩查結(jié)果分析61-62
• 4.2 SNPscan法與Sanger測(cè)序法用于高危新生兒聾病基因檢測(cè)的對(duì)比分析研究62-65
• 第五章 結(jié)論65-66
• 第二部分 參考文獻(xiàn)66-68
• 個(gè)人簡(jiǎn)歷68-69
• 致謝69

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前1條

1 王秋菊;;新生兒聽力及基因聯(lián)合篩查——中國(guó)模式與未來(lái)發(fā)展[J];臨床耳鼻咽喉頭頸外科雜志;2014年22期

中國(guó)博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前1條

1 張哲文;甘肅省10043例新生兒聽力聯(lián)合聾病易感基因篩查的分子流行病學(xué)研究[D];蘭州大學(xué);2012年

  本文關(guān)鍵詞：SNPscan法與Sanger測(cè)序法用于甘肅省特有少數(shù)民族非綜合征型耳聾患者常見聾病基因及高危新生兒聾病基因的對(duì)比分析研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

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本文編號(hào)：426107