[研究背景] 研究發(fā)現(xiàn)DNA腫瘤病毒中有些病毒的編碼產(chǎn)物能與宿主細(xì)胞內(nèi)抑制細(xì)胞生長(zhǎng)和促進(jìn)細(xì)胞分化的蛋白結(jié)合,使其失活而發(fā)揮致瘤作用。EBV(Epstein-Barr virus, EBV)可能也具有此作用。我室克隆得到的鼻咽組織相關(guān)的特異性表達(dá)基因(nashopharynix associated specific, NASG),即短腭、肺及鼻咽上皮克隆(Short Palate, Lung and Nasal epithelium Clone1, SPLUNC1)在鼻咽癌(nasopharyngeal carcinoma, NPC)組織及細(xì)胞系中表達(dá)下調(diào),是一個(gè)潛在的鼻咽癌抑瘤基因,初步研究發(fā)現(xiàn)SPLUNC1能促使感染EBV的細(xì)胞裂解,啟動(dòng)補(bǔ)體途徑和抗體依賴(lài)細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞毒(antibody-dependent cell-mediatedcytotoxicity, ADCC)作用對(duì)EBV進(jìn)行清除,并能通過(guò)抑制EBV關(guān)鍵基因潛伏膜蛋白1(Latent membrane protein1, LMP1)的表達(dá)降低EBV的致瘤能力。miRNA芯片篩查發(fā)現(xiàn)miR-141能受到SPLUNC1的調(diào)...

【文章頁(yè)數(shù)】：128 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
目錄
英文縮略詞表
第一章 前言
    技術(shù)路線(xiàn)
第二章 材料與方法
    2.1 材料
        2.1.1 細(xì)胞系
        2.1.2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
        2.1.3 菌株和質(zhì)粒載體
        2.1.4 試劑
        2.1.5 引物
        2.1.6 主要儀器
    2.2 方法
        2.2.1 構(gòu)建穩(wěn)定轉(zhuǎn)染SPLUNC1的HNE2細(xì)胞系
        2.2.2 HNE2/SPLUNC1和HNE2/GFP細(xì)胞感染EBV
        2.2.3 構(gòu)建瞬時(shí)轉(zhuǎn)染SPLUNC1的NP69細(xì)胞系
        2.2.4 siRNA干擾SPLUNC1細(xì)胞的構(gòu)建
        2.2.5 miRNA產(chǎn)品轉(zhuǎn)染目的細(xì)胞
        2.2.6 ATRA處理細(xì)胞
        2.2.7 鼻咽癌標(biāo)本及鼻咽慢性炎癥對(duì)照標(biāo)本采集
        2.2.8 組織細(xì)胞通過(guò)顯微切割進(jìn)行純化
        2.2.9 RT-PCR鑒定培養(yǎng)細(xì)胞目的基因mRNA的表達(dá)
        2.2.10 miRNA RealTime RT-PCR分析
        2.2.11 采用Western-blot對(duì)培養(yǎng)細(xì)胞進(jìn)行目的蛋白質(zhì)鑒定
        2.2.12 methyl thiazolyl tetrazolium(MTT)
        2.2.13 流式細(xì)胞儀分析細(xì)胞周期與細(xì)胞凋亡率
        2.2.14 免疫熒光試驗(yàn)
        2.2.15 免疫組化試驗(yàn)
        2.2.16 裸鼠成瘤試驗(yàn)
        2.2.17 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
第三章 結(jié)果
    第一部分 SPLUNC1抑制整合入細(xì)胞內(nèi)EBV關(guān)鍵基因表達(dá)的同時(shí)SPLUNC1自身表達(dá)受損
        3.1.1 細(xì)胞系SPLUNC1表達(dá)的篩選
        3.1.2 SPLUNC1穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞系的構(gòu)建
        3.1.3 SPLUNC1抑制整合入細(xì)胞內(nèi)EBV關(guān)鍵基因的表達(dá)
        3.1.4 EBV感染細(xì)胞導(dǎo)致SPLUNC1的表達(dá)降低
    第二部分 SPLUNC1通過(guò)miR-141調(diào)控PTEN-Akt通路影響NPC細(xì)胞的增殖和凋亡
        3.2.1 SPLUNC1影響NP69細(xì)胞和NPC細(xì)胞miR-141的表達(dá)
        3.2.2 miR-141調(diào)控NP69細(xì)胞和NPC細(xì)胞PTEN的表達(dá)
        3.2.3 SPLUNC1通過(guò)miR-141調(diào)控PTEN的表達(dá)
        3.2.4 SPLUNC1通過(guò)PTEN影響Akt信號(hào)通路
        3.2.5 SPLUNC1通過(guò)PTEN-Akt通路影響NPC細(xì)胞的增殖和凋亡
        3.2.6 裸鼠實(shí)驗(yàn)證實(shí)SPLUNC1影響PTEN-Akt信號(hào)通路
    第三部分 EBV與SPLUNC1相互影響共同調(diào)控miR-141-PTEN-Akt信號(hào)通路
        3.3.1 LMP1通過(guò)抑制SPLUNC1影響miR-141-PTEN-Akt信號(hào)通路
        3.3.2 NP69-LMP1中恢復(fù)SPLUNC1的表達(dá)能重新失活A(yù)kt通路
第四章 討論
    第一部分 SPLUNC1抑制整合入細(xì)胞內(nèi)EBV關(guān)鍵基因表達(dá)的同時(shí)SPLUNC1自身表達(dá)受損
    第二部分 SPLUNC1通過(guò)miR-141調(diào)控PTEN-Akt信號(hào)通路影響NPC細(xì)胞增殖和凋亡
    第三部分 EBV與SPLUNC1相互影響共同調(diào)控miR-141-PTEN-Akt信號(hào)通路
    第四部分 尚需繼續(xù)研究的課題
結(jié)論
參考文獻(xiàn)
綜述一
    參考文獻(xiàn)
綜述二
    參考文獻(xiàn)
致謝
攻讀博士學(xué)位期間主要的研究成果



本文編號(hào)：3954946