發(fā)布時(shí)間：2024-04-03 06:02

　　目的:脈絡(luò)膜黑色素瘤(choroid melanoma,CM)是成人最常見的原發(fā)性眼內(nèi)惡性腫瘤,其發(fā)生發(fā)展存在多種機(jī)制。其中P16-cyclinD-CDK4/6-RB通路是與細(xì)胞周期相關(guān)的通路,眾多研究表明其激活會(huì)促進(jìn)脈絡(luò)膜黑色素瘤細(xì)胞的增殖。近些年,隨著microRNA的研究逐漸增多,已有多種microRNAs被證實(shí)參與了脈絡(luò)膜黑色素瘤的發(fā)生發(fā)展。根據(jù)microRNA的經(jīng)典作用機(jī)制,通過生物信息學(xué)網(wǎng)站預(yù)測,發(fā)現(xiàn)miR-15b-5p與CDK4的3’UTR區(qū)域存在序列互補(bǔ)。因此,本研究將探討miR-15b-5p通過靶向抑制細(xì)胞周期素依賴性激酶4(CDK4)的表達(dá)進(jìn)而發(fā)揮負(fù)向調(diào)節(jié)脈絡(luò)膜黑色素瘤細(xì)胞增殖的作用。方法:1、采用CCK8檢測CDK4特異性抑制劑Fascaplysiny對人眼侵襲性脈絡(luò)膜黑色素瘤細(xì)胞系(MUM-2B,MUM-2C)細(xì)胞增殖的作用。2、采用雙熒光素酶報(bào)告分析檢測miR-15b-5p與CDK4 mRNA的3’UTR區(qū)域結(jié)合情況。3、使用脂質(zhì)體分別轉(zhuǎn)染negative control RNA、miR-15b-5p mimics、inhibitor N.C RNA和miR-...

【文章頁數(shù)】：51 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
英文縮略語
1 前言
2 材料與方法
    2.1 主要試劑和儀器
        2.1.1 主要試劑
        2.1.2 主要儀器
    2.2 研究對象和分組
    2.3 實(shí)驗(yàn)方法
        2.3.1 細(xì)胞培養(yǎng)
        2.3.2 CCK-8 檢測細(xì)胞的增殖能力
        2.3.3 雙熒光素酶分析檢測miR-15b-5p與 CDK4 的結(jié)合情況
        2.3.4 細(xì)胞轉(zhuǎn)染
        2.3.5 實(shí)時(shí)熒光定量PCR
        2.3.6 Western Blot
        2.3.7 細(xì)胞周期檢測
        2.3.8 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
3 結(jié)果
    3.1 CDK4 特異性抑制劑對脈絡(luò)膜黑色素瘤細(xì)胞增殖的影響
    3.2 miR-15b-5p對 CDK4 的靶向調(diào)控作用
        3.2.1 雙熒光素酶報(bào)告實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證miR-15b-5p與 CDK4 的結(jié)合情況
        3.2.2 實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測microRNA的轉(zhuǎn)染效率
        3.2.3 Western blot檢測CDK4 的蛋白表達(dá)量
    3.3 miR-15b-5p對脈絡(luò)膜黑色素瘤細(xì)胞增殖的影響
        3.3.1 CCK-8 檢測miR-15b-5p對脈絡(luò)膜黑色素瘤細(xì)胞增殖的影響
        3.3.2 流式細(xì)胞術(shù)檢測miR-15b-5p對脈絡(luò)膜黑色素瘤細(xì)胞周期的影響
4 討論
5 結(jié)論
本論文創(chuàng)新性的自我評價(jià)
參考文獻(xiàn)
綜述
    參考文獻(xiàn)
攻讀學(xué)位期間取得的研究成果
致謝
個(gè)人簡歷



本文編號：3946829