本文關(guān)鍵詞：高糖環(huán)境下OREBP在晶狀體上皮細(xì)胞中的表達(dá)及調(diào)控機(jī)制，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的:探討滲透壓反應(yīng)元件結(jié)合蛋白(smotic response element binding protein,OREBP)在人晶狀體上皮細(xì)胞(HLEC)中的表達(dá)及在高糖環(huán)境下的表達(dá)變化及調(diào)控機(jī)制,明確其在晶狀體上皮細(xì)胞中的作用。方法:(1)體外培養(yǎng)人的晶狀體上皮細(xì)胞系SRA01/04,分為兩組:正常對照組,葡萄糖濃度為25mmol/L,高糖培養(yǎng)組,葡萄糖濃度為300mmol/L,用Real-time RT-PCR和western blot檢測高糖刺激后細(xì)胞內(nèi)OREBP的表達(dá)變化。然后用ERK、P38抑制劑預(yù)處理HLEC 45分鐘后再培養(yǎng)于300mmol/L葡萄糖培養(yǎng)液中,用Real-time RT-PCR,western blot檢測細(xì)胞內(nèi)OREBP的表達(dá)變化。(2)收集2013年10月到2014年4月在青島大學(xué)附屬醫(yī)院眼科就診并行phaco+IOL植入手術(shù)的白內(nèi)障患者的晶狀體前囊膜,以103例(103眼)糖尿病患者前囊膜為病例組,154例(154眼)非糖尿病患者囊膜為對照組,以10例(10眼)無償捐獻(xiàn)的透明囊膜為空白對照。應(yīng)用Real-time PCR技術(shù)檢測各組前囊膜組織中OREBP m RNA的表達(dá),免疫熒光技術(shù)檢測OREBP蛋白水平的表達(dá)。(3)STZ誘導(dǎo)SD大鼠2型糖尿病模型,分別于2周、4周、8周、10周、12周斷頭法處死后取晶狀體前囊膜用Real-time RT-PCR檢測OREBP的表達(dá)變化。結(jié)果:(1)OREBP在人晶狀體上皮細(xì)胞表達(dá),高糖刺激后OREBP m RNA及蛋白表達(dá)明顯升高,與對照組比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(p0.05);ERK,P38抑制劑預(yù)處理后,高糖刺激晶狀體上皮細(xì)胞后OREBPm RNA及蛋白表達(dá)未發(fā)生明顯升高,前后差異有統(tǒng)計學(xué)意義(p0.05);(2)OREBP在糖尿病患者晶狀體前囊膜組織中表達(dá)高于健康白內(nèi)障患者,且二者均高于透明囊膜。(3)糖尿病大鼠晶狀體囊膜組織中OREBP m RNA表達(dá)于2周時升高最為顯著,后逐漸下降,但始終高于健康大鼠囊膜組織。結(jié)論:(1)OREBP在高糖培養(yǎng)的晶狀體上皮細(xì)胞中表達(dá)增高。(2)OREBP在糖尿病患者晶狀體前囊膜組織中表達(dá)高于健康白內(nèi)障患者,且二者均高于透明囊膜。(3)OREBP的改變受ERK,P38的調(diào)節(jié),提示OREBP在維持晶狀體上皮細(xì)胞滲透壓的平衡中發(fā)揮作用并受ERK,P38的調(diào)控。
【關(guān)鍵詞】：OREBP 晶狀體上皮細(xì)胞 高糖 MAPK
【學(xué)位授予單位】：青島大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R776.1
【目錄】：

• 摘要2-3
• Abstract3-6
• 引言6-8
• 第一章 材料和方法8-15
• 1.1 實驗材料8-10
• 1.1.1 實驗對象8
• 1.1.2 動物模型8
• 1.1.3 實驗細(xì)胞8
• 1.1.4 撕取大鼠晶狀體囊膜所需器材8-9
• 1.1.5實驗主要儀器與設(shè)備9
• 1.1.6實驗主要耗材和試劑9
• 1.1.7常用液體的配制及消毒9-10
• 1.2 實驗方法10-14
• 1.2.1 細(xì)胞培養(yǎng)10
• 1.2.2 細(xì)胞高糖刺激實驗10-11
• 1.2.3 抑制劑預(yù)處理實驗11
• 1.2.4 人及大鼠晶狀體囊膜RT-PCR實驗11
• 1.2.5 Real-time PCR實驗11-13
• 1.2.6 Western blot實驗13-14
• 1.2.7 免疫熒光試驗操作步驟14
• 1.3 結(jié)果觀察及統(tǒng)計學(xué)處理14-15
• 第二章 結(jié)果15-18
• 2.1 永生化人晶狀體上皮細(xì)胞（HLEC）的形態(tài)學(xué)觀察15
• 2.2 高濃度葡萄糖刺激HLEC細(xì)胞實驗結(jié)果15-16
• 2.2.1 Real-time PCR結(jié)果15
• 2.2.2 Western blot實驗結(jié)果15-16
• 2.3 OREBP晶狀體囊膜下上皮組織細(xì)胞中的表達(dá)16-17
• 2.3.1 Real-time PCR結(jié)果16
• 2.3.2 免疫熒光化學(xué)染色16-17
• 2.4 抑制劑預(yù)處理實驗結(jié)果17-18
• 2.4.1 Real-time PCR結(jié)果17
• 2.4.2 Western blot實驗結(jié)果17-18
• 第三章 討論18-21
• 第四章 結(jié)論21-22
• 參考文獻(xiàn)22-25
• 綜述25-39
• 綜述的參考文獻(xiàn)33-39
• 攻讀學(xué)位期間的研究成果39-40
• 附錄40-43
• 致謝43-44

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本文編號：389795