目的:探討高鈣狀態(tài)下衰老標(biāo)記蛋白30(SMP30)低表達(dá)對人晶狀體上皮細(xì)胞(LECs)系SRA01/04增殖、氧化應(yīng)激的影響。方法:設(shè)計(jì)3條干擾SMP30靶向基因RGN表達(dá)的RNAi序列(KD1～3),以空載序列為陰性對照組(NCKD),構(gòu)建慢病毒載體并感染SRA01/04細(xì)胞,同時(shí)以未感染的SRA01/04細(xì)胞作空白對照組(CON)。RT-PCR篩選干擾效率最高的慢病毒載體用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。采用含15mmol/L CaCl₂的完全培養(yǎng)基處理細(xì)胞24h模擬發(fā)生白內(nèi)障時(shí)人LECs的病理狀態(tài),通過BrdU-Elisa法檢測細(xì)胞增殖活力,并檢測細(xì)胞超氧化物歧化酶(SOD)活性及氧化型谷胱甘肽/總谷胱甘肽(GSSG/T-GSH)水平以評估細(xì)胞氧化應(yīng)激水平。結(jié)果:成功構(gòu)建KD1～3及NCKD慢病毒載體,感染SRA01/04細(xì)胞效率約80%。三種慢病毒載體(KD1～3)敲減效率分別為93%、60%、74%,故選擇KD1慢病毒載體進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)。高鈣狀態(tài)下,KD1組細(xì)胞相對增殖活力和SOD活力[(2.42±0.08)和(11.69±0.52U/mg)]均低于NCKD組[(2.95±0...

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