目的:應(yīng)用IL-33誘導(dǎo)的AR小鼠模型及C-maf干擾病毒,探究miR-155、C-maf和ILC2之間的調(diào)節(jié)關(guān)系。方法:1、小鼠AR模型的建立方法選取6-8周雌性Balb/c小鼠,分為實(shí)驗(yàn)組及對(duì)照組,實(shí)驗(yàn)組:經(jīng)鼻腔滴入重組小鼠IL-33(Recombinant mouse IL-33,rmIL-33)試劑,劑量為0.5ug/20ul/只,連續(xù)滴鼻3天。對(duì)照組經(jīng)鼻腔滴入相同體積無菌PBS,連續(xù)3天。在第4天處死小鼠,取其鼻黏膜組織進(jìn)行蘇木精-伊紅(hematoxylin and eosin,HE)染色,觀察鼻黏膜組織病理學(xué)改變。2、IL-33與miR-155模擬劑或抑制劑聯(lián)合應(yīng)用造模miR-155模擬劑(agomir)和miR-155抑制劑(antagomir)在運(yùn)用rmIL-33之前3h開始進(jìn)行滴鼻干預(yù),對(duì)照組小鼠經(jīng)鼻腔滴入無菌PBS。3、慢病毒的使用第1天每只老鼠滴鼻20ul,9×10⁸TU/ml的LMRi82714,第5天開始按方法1和2進(jìn)行后續(xù)造模。4、實(shí)時(shí)熒光定量PCR(quantitative reverse transcriptase polymer...

【文章頁數(shù)】：55 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
中英文縮略詞表
第1章 引言
第2章 材料
    2.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
    2.2 試劑和耗材
    2.3 試劑配制
        2.3.1 rmIL-33 溶液的配制
        2.3.2 膠原酶I的配制
        2.3.3 miR-155 agomir和 antagomir溶液的配制
    2.4 序列
        2.4.1 引物序列
        2.4.2 C-maf干擾序列
    2.5 主要的儀器設(shè)備
第3章 方法
    3.1 慢病毒C-maf-shRNA的獲取
    3.2 AR動(dòng)物模型建立及miR-155 和慢病毒的使用
    3.3 小鼠鼻黏膜HE染色
    3.4 小鼠鼻黏膜蛋白提取及濃度測定
        3.4.1 提取小鼠鼻黏膜蛋白
        3.4.2 BCA法測蛋白濃度
    3.5 ELISA檢測小鼠鼻黏膜中IL-5和IL-13 的表達(dá)水平
        3.5.1 檢測原理(以IL-5 為例)
        3.5.2 試劑配制
        3.5.3 操作步驟
    3.6 細(xì)胞表面流式細(xì)胞染色(Cell Surface Flow Cytometry Staining)檢測小鼠鼻黏膜和脾臟中ILC2 的比例
    3.7 qRT-PCR檢測C-maf、Il-5和Il-13的mRNA的水平
        3.7.1 Trizol法提取組織和細(xì)胞中的總RNA
        3.7.2 逆轉(zhuǎn)錄為c DNA
        3.7.3 熒光定量PCR
    3.8 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
第4章 結(jié)果
    4.1 小鼠鼻黏膜組織HE染色
    4.2 MiR-155 可促進(jìn)小鼠鼻黏膜中ILC2 的產(chǎn)生
    4.3 ELISA檢測小鼠鼻黏膜中IL-5和IL-13 的變化
    4.4 慢病毒抑制效率檢測及篩選
    4.5 干擾C-maf對(duì)小鼠鼻黏膜IL-5、IL-13 表達(dá)的影響
    4.6 MiR-155 調(diào)控鼻黏膜中IL-5和IL-13 的水平需要C-maf
第5章 討論
第6章 結(jié)論
致謝
參考文獻(xiàn)
綜述
    參考文獻(xiàn)



本文編號(hào)：3801326