目的:探討Notch1基因對鼻咽癌細胞放療敏感性的影響及其分子機制。方法:使用CRISPR/Cas9技術構建敲除Notch1基因的CNE-2細胞(人鼻咽癌細胞株),通過RT-PCR以及Western blot法檢測Notch1基因的表達。經(jīng)不同劑量射線照射處理后,通過計算各組存活分數(shù)(SF),使用Linear-quadratic模型計算擬合劑量生存曲線,計算放射增敏比(SER)。以6 Gy為照射劑量,將實驗分為4個組:Notch1(+)組、Notch1(-)組、IR+Notch1(+)組和IR+Notch1(-)組。CCK-8法檢測各組細胞增殖情況,Annexin V-FITC/PI雙染法檢測各組細胞凋亡變化,Western blot檢測各組細胞γH2AX、CyclinD1、Bax、Bcl-2和GAPDH蛋白的表達差異。結果:敲除Notch1基因的CNE-2細胞系構建成功。CCK-8實驗顯示,敲除Notch1可提高鼻咽癌放療敏感性:與IR+Notch1(+)組細胞相比,IR+Notch1(-)組細胞增殖和細胞存活率顯著降低(P<0.05)。Annexin V-FITC/PI雙染法...

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【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 細胞系及主要試劑和儀器
    1.2 細胞培養(yǎng)
    1.3 照射條件
    1.4 細胞克隆形成實驗
    1.5 CCK-8檢測細胞增殖及活力
    1.6 Annexin V-FITC/PI雙染法
    1.7 Western blot檢測
    1.8 統(tǒng)計學處理
2 結果
    2.1 運用CRISPR/Cas9技術成功敲除CNE-2細胞的Notch1基因
    2.2 敲除Notch1的鼻咽癌細胞放療后細胞存活分數(shù)下降且放療敏感性增高
    2.3 CCK-8實驗結果
    2.4 流式檢測細胞凋亡
    2.5 Western blot檢測結果
3 討論



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