本文關鍵詞：不同濃度氯化鋅對紫外線損傷的人晶狀體上皮細胞的影響及作用機制研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的:研究不同濃度氯化鋅(ZnCl2)對紫外線B(UVB)照射后人晶狀體上皮細胞系B-3(human lens epithelial cell B-3,HLE B-3)細胞的細胞內鈣離子(calcium ion,Ca2+)水平、鈣ATP酶(Ca2+-ATP酶)相關基因及蛋白表達的調節(jié),從而探討適宜濃度ZnCl2對UVB誘發(fā)HLE B-3細胞凋亡的可能保護作用及相關機制。方法:HLE B-3細胞進行培養(yǎng)及傳代,不同濃度ZnCl2對細胞進行預處理2 h,40 mJ/cm2劑量的UVB照射細胞。實時細胞電子分析法檢測HLE B-3細胞生長的影響;JC-1染色法檢測細胞線粒體膜電位(Mitochondrial membrane potential,ΔΨm)的變化;DCFH-DA染色法檢測細胞內活性氧(Reactive oxygen species,ROS)的變化;Annexin V-FITC/PI染色法檢測細胞凋亡的變化;Fluo-3/AM染色法檢測細胞內Ca2+濃度的變化;實時熒光定量PCR檢測ZnCl2及UVB對細胞質膜鈣ATP酶1(Plasma membrane calcium ATPase 1,PMCA1),細胞質膜鈣ATP酶4(Plasma membrane calcium ATPase 4,PMCA4),人肌質/內質網鈣ATP酶2(Sarcoplasmic endoplasmic reticulum Ca2+-ATPase 2b,SERCA2b)及人肌質/內質網鈣ATP酶3(Sarcoplasmic endoplasmic reticulum Ca2+-ATPase 3,SERCA3)在mRNA水平表達的影響;酶聯(lián)免疫吸附試驗檢測PMCA1、PMCA4、SERCA2b及SERCA3在蛋白質水平表達的變化。結果:適宜濃度的ZnCl2預處理,可以減輕UVB對HLE B-3細胞增殖的抑制作用;適宜濃度ZnCl2預處理可以抑制UVB導致的HLE B-3細胞ΔΨm降低,減少ROS產生,促進細胞鈣穩(wěn)態(tài)恢復,減少HLE B-3細胞壞死和凋亡。適宜濃度ZnCl2預處理可以抑制UVB照射誘導的SERCA2b和SERCA3上調表達,同時明顯上調PMCA1和PMCA4的表達。結論:適宜濃度ZnCl2預處理能抑制UVB導致的HLE B-3細胞Ca2+濃度增高、ΔΨm下降、ROS增加,進而減少細胞凋亡和壞死。PMCA和SERCA在適宜濃度ZnCl2對UVB損傷的HLE B-3細胞的保護作用中可能起重要作用。
【關鍵詞】：紫外線B 鈣穩(wěn)態(tài) 氯化鋅 質膜鈣ATP酶 肌質/內質網鈣ATP酶
【學位授予單位】：山東中醫(yī)藥大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R776.1
【目錄】：

• 提要3-4
• Abstract4-8
• 引言8-11
• 1. 材料與方法11-28
• 1.1 實驗材料11-15
• 1.1.1 培養(yǎng)細胞11
• 1.1.2 細胞培養(yǎng)相關試劑及配制11-12
• 1.1.3 實時熒光定量PCR相關試劑12-13
• 1.1.4 其他實驗相關試劑13-14
• 1.1.5 主要儀器與設備14-15
• 1.2 ZnCl_2對UVB損傷的保護作用研究的實驗步驟和方法15-23
• 1.2.1 晶狀體上皮細胞培養(yǎng)、傳代、凍存及復蘇15-16
• 1.2.2 紫外線照射16
• 1.2.3 實時細胞電子分析16-17
• 1.2.4 流式細胞儀檢測線粒體膜電位的變化17-18
• 1.2.5 細胞內活性氧水平的檢測18-19
• 1.2.6 Annexin V-FITC/PI染色法細胞凋亡的檢測19-20
• 1.2.7 細胞內Ca~(2+)水平的檢測20
• 1.2.8 實時熒光定量PCR20-21
• 1.2.9 ELISA檢測PMCA1、PMCA4、SERCA2b及SERCA3蛋白表達的變化21-22
• 1.2.10 統(tǒng)計學分析22-23
• 1.3 高濃度ZnCl_2對晶狀體上皮細胞的損傷機制研究的實驗步驟和方法23-28
• 1.3.1 晶狀體上皮細胞培養(yǎng)、傳代、凍存及復蘇23
• 1.3.2 ZnCl_2溶液的配制23
• 1.3.3 高濃度ZnCl_2對晶狀體上皮細胞生存的影響23-24
• 1.3.4 線粒體膜電位的變化24-25
• 1.3.5 細胞周期的檢測25
• 1.3.6 細胞凋亡的檢測25-26
• 1.3.7 實時熒光定量PCR26
• 1.3.8 ELISA檢測相關蛋白表達的變化26-27
• 1.3.9 統(tǒng)計學分析27-28
• 2. 結果28-45
• 2.1 ZnCl_2對UVB損傷的保護作用研究28-35
• 2.1.1 實時細胞電子分析28-29
• 2.1.2 流式細胞儀檢測 ΔΨm變化29-30
• 2.1.3 流式細胞儀檢測細胞內ROS變化30-31
• 2.1.4 Annexin V/PI染色法檢測細胞凋亡31-32
• 2.1.5 細胞內Ca~(2+)水平的檢測32-33
• 2.1.6 PMCA1, PMCA4, SERCA2b和SERCA3基因和蛋白表達水平的檢測33-35
• 2.2 高濃度ZnCl_2對晶狀體上皮細胞的損傷機制研究35-45
• 2.2.1 細胞形態(tài)的觀察35
• 2.2.2 MTT法檢測35-36
• 2.2.3 RT-CES分析36-38
• 2.2.4 ΔΨm變化38
• 2.2.5 細胞周期檢測38-39
• 2.2.6 細胞凋亡的檢測39-42
• 2.2.7 細胞內TGF-β1，Caspase-12，，Caspase-9 和TNF-α 基因及蛋白水平檢測42-45
• 3. 討論45-51
• 3.1 ZnCl_2對HLE B-3 細胞生長的影響45
• 3.2 ZnCl_2對UVB損傷的保護作用研究45-48
• 3.3 高濃度ZnCl_2對晶狀體上皮細胞的損傷機制研究48-51
• 4. 結語51-52
• 參考文獻52-59
• 中英文對照59-61
• 附錄61-63
• 致謝63-64
• 論文著作64-66
• 詳細摘要66-70

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