目的:檢測人成熟角膜上皮細(xì)胞在體外向干細(xì)胞逆向分化的可行性及關(guān)鍵因素。方法:選取同濟(jì)醫(yī)院眼庫中捐獻(xiàn)者的正常角膜,人體組織的使用符合赫爾辛基宣言并經(jīng)同濟(jì)醫(yī)院倫理委員會批準(zhǔn)。用Dispase Ⅱ酶消化得到成熟角膜上皮(MCEC);應(yīng)用石蠟包埋切片或0.25%trypsin/1 m M EDTA(T/E)消化-甩片以及免疫熒光染色法,檢測CK12和p63α在MCEC中的表達(dá)情況,以角膜緣上皮做對照。采用膠原酶A消化法自角膜緣體外分離、培養(yǎng)角膜緣微環(huán)境細(xì)胞(LNC)。實驗組(3D-MCEC+LNC組)將傳代培養(yǎng)的第4-6代LNC與MCEC按1:4混合,在50%基質(zhì)膠(Matrigel)構(gòu)建的三維(3D)環(huán)境下共培養(yǎng);對照組(3D-MCEC組)將MCEC單獨3D培養(yǎng)。培養(yǎng)10天后,用細(xì)胞甩片、免疫熒光染色雙標(biāo)法,檢測CK12、p63α、PCK、Vimentin的表達(dá)情況。表達(dá)強度采用Image J、Graphpad Prism 7.0軟件進(jìn)行圖像分析、數(shù)據(jù)處理,細(xì)胞均數(shù)以(?)表示,采用Student’s t-檢驗比較組間差異,P<0.05具有統(tǒng)計學(xué)意義。結(jié)果:在石蠟切片免疫熒光染色中,M...

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【學(xué)位級別】：碩士

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中文摘要
Abstract
前言
材料和方法
結(jié)果
討論
感謝
參考文獻(xiàn)
附圖
綜述
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