本文關(guān)鍵詞：HDAC2對(duì)豚鼠急性聽(tīng)力損失治療中糖皮質(zhì)激素抵抗影響的研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：實(shí)驗(yàn)?zāi)康模禾瞧べ|(zhì)激素(Glucocorticoid, GC)在內(nèi)耳中的應(yīng)用有60多年的歷史,廣泛應(yīng)用于突發(fā)性聾、自身免疫性內(nèi)耳疾病、梅尼埃病等內(nèi)耳疾病中。GC也應(yīng)用于一些其他的內(nèi)耳炎癥性疾病如細(xì)菌性中耳炎、腦膜炎、敗血癥等造成感音神經(jīng)性聾中。大量的臨床研究表明GC治療耳聾及前庭疾病療效顯著,但也有研究表明GC治療效果不明顯,存在GC不敏感及GC抵抗。最近的研究發(fā)現(xiàn),組蛋白的乙酰化水平升高,組蛋白去乙�；�2(histone deacetylase 2,HDAC2)表達(dá)及活性下降是GC抵抗的主要機(jī)理。我們前期研究發(fā)現(xiàn)突聾患者中GC療效跟HDAC2活性呈正相關(guān)。近來(lái)有研究表明氧化應(yīng)激、炎癥可導(dǎo)致HDAC2的下降,從而降低靶細(xì)胞對(duì)GC的敏感性。本研究通過(guò)向豚鼠鼓階注射脂多糖(lipopolysaccharide, LPS),造成實(shí)驗(yàn)動(dòng)物急性內(nèi)耳炎癥,同時(shí)給予HDAC2的激活劑氨茶堿(aminophylline,AMI)改變HDAC2的活性／含量,觀察GC的療效。研究方法：選擇50只健康白色豚鼠,隨機(jī)分成5組,每組10只：對(duì)照／人工外淋巴液(artificial perilymph, AP)組：行鼓階微量注射術(shù),雙耳鼓階均注射AP,其他無(wú)特殊處理。其他四組均鼓階注射5mg/ml的LPS：模型(LPS)組：無(wú)其他特殊處理；地塞米松(LPS+DEX)組：術(shù)前及術(shù)后24小時(shí)腹腔注射1mg/kg地塞米松；氨茶堿(LPS+AMI)組：術(shù)前及術(shù)后24小時(shí)腹腔注射20mg/kg氨茶堿；地塞米松+氨茶堿(LPS+DEX+AMI)組：術(shù)前及術(shù)后24小時(shí)腹腔注射1mg/kg地塞米松和20mg/kg氨茶堿。所有動(dòng)物給藥前檢測(cè)聽(tīng)性腦干反應(yīng)(auditory brainstem response, ABR),選擇聽(tīng)力正常的動(dòng)物作為實(shí)驗(yàn)對(duì)象。術(shù)后48小時(shí)檢測(cè)豚鼠ABR,觀察豚鼠聽(tīng)力的變化。HE染色觀察內(nèi)耳結(jié)構(gòu)改變,采用免疫熒光結(jié)合熒光顯微鏡的方法,觀察豚鼠基底膜鋪片及耳蝸組織冰凍切片中HDAC2的分布及空間定位。用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)法測(cè)定耳蝸組織中HDAC2的含量。結(jié)果：ABR檢測(cè)顯示,LPS造成全頻率聽(tīng)力損失,其中高頻區(qū)聽(tīng)力損失最嚴(yán)重,平均閾移在60dB左右；與AP組相比,LPS組各個(gè)頻率均有顯著的聽(tīng)力損失(p0.01)。LPS+DEX組及LPS+AMI組聽(tīng)力較LPS組在頻率16k、32k處聽(tīng)力改善明顯(p0.05)。LPS+DEX+AMI組療效最好,在各個(gè)頻率均優(yōu)于單獨(dú)使用地塞米松治療(p0.05),以頻率在16k處最顯著(p0.01)。HE染色見(jiàn)LPS組內(nèi)耳結(jié)構(gòu)嚴(yán)重破壞,血管紋變薄,螺旋韌帶與耳蝸外側(cè)壁分離,螺旋神經(jīng)細(xì)胞核皺縮,單獨(dú)使用DEX及AMI,內(nèi)耳結(jié)構(gòu)較LPS組破壞減輕,聯(lián)合DEX及AMI僅有輕度損傷。基底膜鋪片及切片結(jié)果表明HDAC2廣泛分布于耳蝸中,包括內(nèi)外毛細(xì)胞、支持細(xì)胞、血管紋、螺旋神經(jīng)元等區(qū)域,和4',6-二脒基-2-苯基吲哚(4',6-diamidino-2-phenylindole, DAPI)位置一致,提示HDAC2在耳蝸中廣泛表達(dá),且存在于胞核內(nèi)。ABR閾移在8k、16k、32k處與耳蝸內(nèi)HDAC2的表達(dá)呈負(fù)相關(guān)(p0.05)。結(jié)論：本實(shí)驗(yàn)中通過(guò)鼓階直接注射5ul 5mg/ml的LPS,造成實(shí)驗(yàn)動(dòng)物重度感音性聾,高頻區(qū)聽(tīng)力損失最嚴(yán)重。耳蝸?zhàn)⑸銵PS產(chǎn)生急性炎癥,與AP組相比,HDAC2含量降低,提示內(nèi)耳中炎癥可引起HDAC2的下降。給予DEX全身應(yīng)用療效不顯著,僅在頻率為16k、32k處有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05),提示存在GC不敏感及抵抗。而GC聯(lián)合AMI組治療效果最顯著。有研究表明低劑量的茶堿可以提高HDAC2的活性,從而通過(guò)磷脂酰肌醇3-激酶(Phosphatidyl Inositol 3-kinase, PI3K)途徑,抑制炎癥基因的表達(dá)。本實(shí)驗(yàn)中LPS+AMI+DEX組中,HDAC2表達(dá)又有所恢復(fù),GC療效提高,提示AMI可提高HDAC2的含量,改善GC抵抗?fàn)顟B(tài)。因此,本實(shí)驗(yàn)表明AMI可提高HDAC2的表達(dá),從而提高GC對(duì)LPS誘導(dǎo)的急性炎癥導(dǎo)致的感音性聾的療效。通過(guò)提高HDAC2的活性或(和)含量,改善GC抵抗的狀態(tài),為內(nèi)耳疾病GC抵抗患者的治療提供了新思路。
【關(guān)鍵詞】：組蛋白去乙�；�2 糖皮質(zhì)激素抵抗 聽(tīng)力損失 氨茶堿 豚鼠
【學(xué)位授予單位】：南京大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類(lèi)號(hào)】：R764
【目錄】：

• 摘要4-6
• Abstract6-9
• 本文主要的英文縮略詞對(duì)照表9-12
• 第一章 前言12-14
• 第二章 實(shí)驗(yàn)材料與方法14-23
• 2.1 實(shí)驗(yàn)對(duì)象14
• 2.2 實(shí)驗(yàn)試劑14-15
• 2.3 主要儀器設(shè)備15
• 2.4 動(dòng)物實(shí)驗(yàn)步驟15-23
• 2.4.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分組15
• 2.4.2 內(nèi)耳炎癥動(dòng)物模型構(gòu)建15-16
• 2.4.3 ABR檢測(cè)16
• 2.4.4 耳蝸HE染色16-18
• 2.4.5 耳蝸基底膜鋪片18
• 2.4.6 耳蝸冰凍切片制作及免疫熒光染色18-19
• 2.4.7 HDAC2表達(dá)檢測(cè)19-21
• 2.4.8 動(dòng)物實(shí)驗(yàn)技術(shù)路線圖21-22
• 2.4.9 統(tǒng)計(jì)分析22-23
• 第三章 實(shí)驗(yàn)結(jié)果23-30
• 3.1 ABR結(jié)果分析23-24
• 3.2 耳蝸形態(tài)結(jié)構(gòu)觀察24-26
• 3.3 HDAC2在內(nèi)耳中的表達(dá)及空間定位26-27
• 3.4 耳蝸組織HDAC2蛋白表達(dá)水平27-28
• 3.5 ABR閾移與耳蝸組織中HDAC2表達(dá)相關(guān)性分析28-30
• 第四章 討論30-35
• 4.1 內(nèi)耳疾病存在炎癥30
• 4.2 糖皮質(zhì)激素在內(nèi)耳疾病中的應(yīng)用30-32
• 4.3 HDAC2在糖皮質(zhì)激素抵抗中的作用32-33
• 4.4 氨茶堿的抗炎作用及與HDAC2關(guān)系的研究進(jìn)展33-35
• 第五章 結(jié)論35
• 參考文獻(xiàn)35-40
• 第六章 文獻(xiàn)綜述40-53
• 參考文獻(xiàn)46-53
• 攻讀碩士期間發(fā)表論文53-54
• 致謝54-56

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本文編號(hào)：374852