目的:探討雙向調(diào)控時(shí)鐘基因Bmal1(brain and muscle arnt-like1)對(duì)鼻咽癌CNE1裸鼠移植瘤生長(zhǎng)的影響及與放療敏感性的關(guān)系。方法:采用慢病毒感染方法,構(gòu)建Bmal1基因CNE1OE(過(guò)表達(dá)組)、CNE1OENC(過(guò)表達(dá)對(duì)照組)、CNE1sh3(低表達(dá)組)、CNE1shNC(低表達(dá)對(duì)照組)4株細(xì)胞,Western blot驗(yàn)證各組細(xì)胞Bmal1蛋白表達(dá)情況;4株細(xì)胞分別皮下注射相應(yīng)的4組裸鼠,移植瘤生長(zhǎng)后測(cè)量其體積;給予6-MeV電子線15 Gy照射裸鼠移植瘤,觀察放療后各組移植瘤體積變化情況。剝離移植瘤,RTPCR及Western blot分別檢測(cè)Bmal1、P53、P21 mRNA及蛋白表達(dá)情況。結(jié)果:Western blot結(jié)果提示,與各自對(duì)照組對(duì)比,CNE1OE組Bmal1蛋白過(guò)表達(dá),CNE1sh3組Bmal1蛋白低表達(dá),表明細(xì)胞轉(zhuǎn)染成功。成功構(gòu)建裸鼠移植瘤模型,CNE1OE組裸鼠移植瘤體積明顯小于CNE1OENC組,CNE1sh3組體積明顯大于CNE1shNC組(P<0.05)。放療后,CNE1OE、CNE1OENC、CNE1shNC組裸鼠移植...

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【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 材料
        1.1.1 細(xì)胞系
        1.1.2 主要試劑
        1.1.3 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
    1.2 方法
        1.2.1 Bmal1基因過(guò)表達(dá)慢病毒載體的構(gòu)建
        1.2.2基因慢病毒干擾載體的構(gòu)建
        1.2.3 慢病毒的包裝和病毒滴度的測(cè)定
        1.2.4 慢病毒感染目的細(xì)胞
        1.2.5 Western blot驗(yàn)證穩(wěn)轉(zhuǎn)CNE1細(xì)胞中Bmal1蛋白的表達(dá)
        1.2.6 裸鼠飼養(yǎng)及接種
        1.2.7腫瘤體積測(cè)量與計(jì)算
        1.2.8 裸鼠移植瘤放療
        1.2.9 RT-PCR檢測(cè)裸鼠移植瘤Bmal1、P53、P21 m RNA表達(dá)水平
        1.2.1 0 Western blot檢測(cè)裸鼠移植瘤Bmal1、P53、P21蛋白表達(dá)
    1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
2 結(jié)果
    2.1 Western blot驗(yàn)證CNE1細(xì)胞Bmal1基因過(guò)表達(dá)及干擾效果
    2.2 構(gòu)建移植瘤模型后腫瘤生長(zhǎng)情況
    2.3 放療后裸鼠移植瘤生長(zhǎng)情況
    2.4 RT-PCR檢測(cè)Bmal1、P53、P21 m RNA的相對(duì)表達(dá)
    2.5 Western blot檢測(cè)移植瘤Bmal1、P53、P21蛋白的相對(duì)表達(dá)
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