目的:研究沉默膠質(zhì)纖維酸性蛋白（GFAP）基因?qū)Ω咛钦T導(dǎo)的人視網(wǎng)膜微血管內(nèi)皮細(xì)胞（hRMECs）增殖和凋亡的影響及其機(jī)制。方法:采用qRT-PCR法檢測高糖（30mmol/mL）和低糖（5mmol/mL）處理的hRMECs中GFAP的表達(dá)。通過慢病毒介導(dǎo)法建立GFAP基因穩(wěn)定沉默的高糖誘導(dǎo)的hRMECs細(xì)胞模型,用SRI-011381（TGF-β信號通路特異性激活劑）、二甲基亞砜（DMSO）處理該細(xì)胞模型,采用Western blot法檢測細(xì)胞中GFAP、轉(zhuǎn)化生長因子-β1（TGF-β1）、轉(zhuǎn)錄激活因子2（Smad2）、Smad3蛋白的表達(dá),并分別采用CCK-8法和流式細(xì)胞術(shù)檢測細(xì)胞增殖和凋亡。結(jié)果:高糖處理的hRMECs中GFAP表達(dá)水平顯著升高。通過慢病毒介導(dǎo)法可成功構(gòu)建GFAP基因沉默的高糖誘導(dǎo)的hRMECs細(xì)胞模型,且沉默GFAP后,細(xì)胞的增殖能力明顯提高,凋亡率明顯抑制,TGF-β信號通路關(guān)鍵基因TGF-β1、Smad2、Smad3的蛋白表達(dá)均明顯抑制,而激活TGF-β信號通路可逆轉(zhuǎn)沉默GFAP對高糖誘導(dǎo)的hRMECs細(xì)胞的增殖促進(jìn)和凋亡抑制作用。結(jié)論:沉默GFAP基因可促進(jìn)... 

【文章頁數(shù)】：5 頁

【文章目錄】：
0引言
1材料和方法
    1.1材料
    1.2方法
        1.2.1細(xì)胞培養(yǎng)
        1.2.2細(xì)胞處理與分組
        1.2.3 qRT-PCR法檢測細(xì)胞中GFAP mRNA的表達(dá)
        1.2.4 Western blot檢測細(xì)胞中相關(guān)蛋白的表達(dá)
        1.2.5 CCK-8法檢測細(xì)胞增殖能力
        1.2.6 Annexin V-FITC/PI雙染法檢測細(xì)胞凋亡
2結(jié)果
    2.1 GFAP在高糖誘導(dǎo)的hRMECs中的表達(dá)
    2.2沉默GFAP的高糖誘導(dǎo)的細(xì)胞模型建立
    2.3沉默GFAP對高糖誘導(dǎo)的hRMECs增殖和凋亡的影響
    2.4沉默GFAP對高糖誘導(dǎo)的hRMECs中TGF-β信號通路的影響
    2.5激活TGF-β信號通路逆轉(zhuǎn)沉默GFAP對高糖誘導(dǎo)的細(xì)胞增殖和凋亡的調(diào)控作用
3討論


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]早期糖尿病視網(wǎng)膜病變中eEF2K活性變化的實(shí)驗(yàn)觀察[J]. 廖懌,何卉,張兆強(qiáng),孟菊峰,葉立軍,張?jiān)饺A.  臨床眼科雜志. 2019(01)
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本文編號：3729367