目的:實驗性視網(wǎng)膜脫離后,應(yīng)用caspase酶抑制劑z-VAD-FMK雖然可以抑制細胞凋亡,但增加RIP-1介導(dǎo)的壞死性凋亡。本實驗探討實驗性視網(wǎng)膜脫離后,雷帕霉素干預(yù)的自噬激活能否抑制壞死性凋亡以及雷帕霉素聯(lián)合z-VAD-FMK對視網(wǎng)膜是否具有保護作用。方法:健康雄性SD大鼠隨機分為無網(wǎng)脫組（Attached）、網(wǎng)脫組（Untreated）、zVAD-FMK組,z-VAD-FMK+雷帕霉素（RAPA）組。通過視網(wǎng)膜下注入透明質(zhì)酸鈉和DMSO構(gòu)建網(wǎng)脫模型。z-VAD-FMK及雷帕霉素在構(gòu)建網(wǎng)脫模型的同時于網(wǎng)膜下注射。利用蛋白質(zhì)免疫印跡法（western blot）測出RIP-1、beclin-1、LC3、AIF蛋白表達情況,通過D02 ROS探針的熒光強度檢測各組內(nèi)視網(wǎng)膜活性氧（ROS）表達情況,蘇木素—伊紅（HE）染色及電子顯微鏡觀察視網(wǎng)膜厚度及光感受器細胞死亡情況,改良水迷宮實驗測試干預(yù)后的大鼠行為學(xué)改變。結(jié)果:成功構(gòu)建視網(wǎng)膜脫離模型,z-VAD-FMK+RAPA組beclin-1、LC3表達增加,自噬激活。電子顯微鏡結(jié)果顯示z-VAD-FMK+RAPA組光感受器細胞的壞死較unt... 

【文章頁數(shù)】：62 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
前言
材料(資料、內(nèi)容)與方法
    1.材料與儀器
        1.1 動物
        1.2 大鼠飼料
        1.3 試劑和儀器
        1.4 主要試劑的配置
    2.實驗方法
        2.1 視網(wǎng)膜脫離模型的構(gòu)建及分組
        2.2 透射電鏡操作步驟
        2.3 蘇木精-伊紅染色(H&E)
        2.4 免疫印跡法檢測相關(guān)蛋白的表達
        2.5 ROS檢測
        2.6 水迷宮實驗
        2.7 統(tǒng)計學(xué)
結(jié)果
    1.雷帕霉素干預(yù)后自噬激活
    2.z-vad-fmk聯(lián)合雷帕霉素對視網(wǎng)膜組織結(jié)構(gòu)和形態(tài)有保護作用
    3.z-vad-fmk和雷帕霉素干預(yù)可以減少光感受器細胞的壞死
    4.雷帕霉素誘導(dǎo)的自噬激活通過抑制ROS及 AIF進而抑制壞死性凋亡
    5.自噬激活后對大鼠的視行為有明顯的改善24討論
討論
結(jié)論
參考文獻
綜述
    參考文獻
附錄
作者簡介及讀研期間主要科研成果
致謝


【參考文獻】：
期刊論文
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本文編號：3710411