發(fā)布時(shí)間：2022-10-20 15:09

　　目的:通過建立硫醇轉(zhuǎn)移酶（TTase）基因敲除小鼠模型,觀察其晶狀體形態(tài)和生化方面隨年齡的改變,探討TTase在晶狀體氧化還原系統(tǒng)中的重要作用及參與年齡相關(guān)性白內(nèi)障形成的機(jī)制。方法:建立TTase基因敲除小鼠模型并進(jìn)行基因型鑒定。裂隙燈觀察TTase基因敲除型和野生型小鼠白內(nèi)障隨年齡的發(fā)生情況。檢測小鼠晶狀體中谷胱甘肽（GSH）含量。Western blot檢測晶狀體中氧化產(chǎn)物蛋白質(zhì)二硫化物（PSSG）的變化。免疫共沉淀法鑒定形成PSSG的蛋白質(zhì)。觀察純化的重組人晶狀體TTase（RHLT）對PSSG的脫硫醇作用。結(jié)果:TTase基因敲除型小鼠和野生型小鼠白內(nèi)障的發(fā)生均隨年齡而增加,且主要表現(xiàn)為核性白內(nèi)障。在TTase基因敲除型小鼠中,白內(nèi)障最早從4月齡開始發(fā)生,9月齡時(shí)最為顯著;野生型小鼠白內(nèi)障最早從9月齡開始發(fā)生,12月齡時(shí)最為顯著。兩種基因型小鼠晶狀體中GSH含量均隨年齡增加而下降,9月齡TTase基因敲除型小鼠晶狀體中GSH下降更為顯著,且PSSG的表達(dá)明顯高于野生型,主要表現(xiàn)為高分子聚合物。免疫共沉淀反應(yīng)證實(shí)形成PSSG的蛋白質(zhì)包含肌動(dòng)蛋白（actin）和三磷酸甘油醛脫氫酶（... 

【文章頁數(shù)】：6 頁

【文章目錄】：
0引言
1材料和方法
    1.1材料
    1.2方法
        1.2.1建立TTase基因敲除小鼠模型
        1.2.2小鼠基因型鑒定
        1.2.3裂隙燈觀察小鼠晶狀體混濁情況
        1.2.4小鼠晶狀體可溶性蛋白質(zhì)的提取與定量
        1.2.5小鼠晶狀體GSH含量的測定
        1.2.6 Western blot檢測小鼠晶狀體PSSG蛋白質(zhì)的表達(dá)
        1.2.7免疫共沉淀法檢測形成PSSG的蛋白質(zhì)
        1.2.8重組人晶狀體TTase的分離純化及脫硫醇作用檢測
2結(jié)果
    2.1小鼠基因型鑒定及生長情況
    2.2不同基因型小鼠白內(nèi)障發(fā)生情況
    2.3不同基因型小鼠晶狀體GSH含量變化
    2.4不同基因型小鼠晶狀體PSSG蛋白質(zhì)的表達(dá)
    2.5免疫共沉淀法鑒定形成PSSG的蛋白質(zhì)
    2.6重組人晶狀體TTase的脫硫醇作用
3討論


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]硫醇轉(zhuǎn)移酶（TTase）對紫外線誘導(dǎo)氧化損傷的人晶狀體上皮細(xì)胞的保護(hù)作用[J]. 鄭曉亮,張婕,嚴(yán)宏.  眼科新進(jìn)展. 2017(07)



本文編號：3694767