目的:通過提取初生SD大鼠視網(wǎng)膜建立視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細胞（RGCs）的原代培養(yǎng)模型并對其純度進行鑒定,檢測組蛋白去甲基化酶JARID1B在大鼠出生后RGCs發(fā)育過程中的表達,研究JARID1B在其發(fā)育過程中的變化;建立過表達JARID1B的RGCs細胞模型,初步探索其對體外培養(yǎng)RGCs存活的影響。為視功能恢復及視神經(jīng)相關疾病的基礎研究提供一種體外實驗體系,并為JARID1B在RGCS發(fā)育及再生中起重要作用提供依據(jù)。方法:1.首先通過培育OX-7雜交瘤細胞提取含Thy1.1抗體上清液用于陽性篩選RGCs;然后選取成年SD大鼠雌性12只,雄性6只,2:1交配,選取出生7d（P7）以內的乳鼠,選用木瓜蛋白酶對其視網(wǎng)膜組織進行消化,制備RGCs細胞懸液,以巨噬細胞多克隆抗體對所得細胞進行初步篩選,再以山羊抗兔IgG（H+L）、山羊抗鼠IgG（H+L）+含Thy-1.1抗體上清液依次進行陰性、陽性選擇,將所得RGCs懸浮后鋪板于24孔細胞培養(yǎng)板（提前用鼠層粘連蛋白和多聚-D-賴氨酸預處理）中進行培養(yǎng),培養(yǎng)72h后采用抗鼠Thy-1.1抗體通過免疫細胞化學方法鑒定其純度。2.用Western Blot... 

【文章頁數(shù)】：57 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
abstract
引言
第一部分 大鼠視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細胞的原代培養(yǎng)及鑒定
    材料與方法
        1 實驗材料與準備
        2 實驗方法
    結果
        1 OX-7雜交瘤細胞培育情況
        2 RGCs形態(tài)及生長情況觀察
        3 免疫熒光鑒定結果
    討論
        1 RGCs原代培養(yǎng)方法的選擇與改進
        2 原代培養(yǎng)鑒定方法及時機的選擇
        3 原代培養(yǎng)過程中經(jīng)驗與問題
第二部分 JARID1B在大鼠視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細胞發(fā)育中的表達
    材料與方法
        1 標本采集與保存
        2 主要試劑及耗材
        3 主要設備及儀器
        4 實驗方法
    結果
        1 WB檢測H3K4me3 蛋白在大鼠視網(wǎng)膜發(fā)育中的表達變化
        2 q RT-PCR檢測大鼠RGCs發(fā)育過程中JARID1B及相關分子的m RNA表達情況
        3 免疫熒光染色檢測大鼠RGCs發(fā)育過程中JARID1B蛋白表達結果
    討論
第三部分 JARID1B對體外RGCs存活影響的研究
    材料與方法
        1 實驗材料及試劑
        2 實驗方法
    結果
    討論
結論
參考文獻
綜述
    綜述參考文獻
攻讀學位期間的研究成果
縮略詞表
致謝


【參考文獻】：
期刊論文
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本文編號：3691758