本文關(guān)鍵詞：東莨菪堿誘導的兔干眼模型的制作及機制研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的:探索如何用東莨菪堿成功誘導兔干眼模型并研究其可能機制。方法:選取2.0-2.5kg的新西蘭大白兔20只,隨機分成2個組,即實驗組和對照組,每組各10只,實驗組連續(xù)皮下注射東莨宕堿0.8ml(配制的SCOP濃度為5mg/ml),每天四次,分別為8點、12點、16點、20點,干預14天,對照組同時注射等體積無菌生理鹽水。分別在干預前、干預第3天、干預第7天、干預第10天、干預第14天測定實驗動物的淚液分泌量,并用1%熒光素鈉滴于兔子眼表,瞬目,5S后在裂隙燈下觀察,評估角膜上皮缺損情況并拍照記錄。干預完成后,所有實驗動物行安樂死,各組動物7只分別取角膜、結(jié)膜和淚腺組織,其中一半角膜、上方的球結(jié)膜和淚腺用于提取總RNA,分析炎癥因子IL-1β、TNF-α在角膜、結(jié)膜和淚腺m RNA的表達,另一半角膜和下方球結(jié)膜用于western-blot實驗分析TNF-α蛋白水平;三只兔子全角膜、下方球結(jié)膜、淚腺和哈氏腺用石蠟包埋行HE染色,其上方球結(jié)膜用OCT包埋,冰凍切片行免疫熒光檢測結(jié)膜杯狀細胞MUC5AC的表達情況。結(jié)果:皮下連續(xù)注射東莨宕堿14天后,淚液分泌量明顯下降(干預前16.58±2.22,干預后3.57±1.08,P0.00),同時角膜熒光素鈉染色評分明顯增多(干預前0.33±0.52,干預后8.5±1.05,P0.00),對照組在干預前后無明顯差異(淚液干預前16.8±1.29,干預后17.0±0.89,P0.05;評分干預前0.67±0.52,干預后0.670±0.83,P0.050)。干預14天后取材,Real-time PCR的結(jié)果顯示角膜、結(jié)膜和淚腺組織中IL-1β、Tnf-αm RNA水平均顯著上調(diào),且差異具有統(tǒng)計學意義(P0.00);western-blot結(jié)果顯示在角膜和結(jié)膜組織中,Tnf-α蛋白水平相比對照組上調(diào),且有統(tǒng)計學意義;結(jié)膜免疫熒光結(jié)果顯示實驗組MUC5AC表達明顯低于對照組的表達;組織石蠟切片HE染色結(jié)果顯示,相比于對照組,實驗組角膜和結(jié)膜組織上皮細胞層次排列紊亂、伴有更多的炎癥細胞浸潤;實驗組淚腺明顯萎縮,間質(zhì)見炎癥細胞浸潤,對照組淚腺結(jié)構(gòu)形態(tài)基本正常;實驗組和對照組哈氏腺相比,形態(tài)、結(jié)構(gòu)均基本正常,未見炎癥細胞浸潤。結(jié)論:運用皮下連續(xù)注射東莨菪堿,4mg/次,一天四次,能夠成功誘導兔干眼模型,且與臨床干眼病人的眼表進程相吻合,為今后進行干眼發(fā)病機制及藥物研究開辟新的道路。
【關(guān)鍵詞】：東莨菪堿 干眼模型 干眼 IL-1β Tnf-α
【學位授予單位】：南昌大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R777.34;R-332
【目錄】：

• 摘要3-5
• ABSTRACT5-9
• 第1章 前言9-12
• 第2章 實驗材料12-15
• 2.1 實驗動物12
• 2.2 主要實驗試劑和耗材12-13
• 2.3 實驗儀器和設(shè)備13-15
• 第3章 實驗方法15-26
• 3.1 主要試劑配制15-17
• 3.2 具體實驗內(nèi)容17-26
• 3.2.1 實驗動物的準備、分組及模型的制作方法17
• 3.2.2 淚液分泌量的檢測17-18
• 3.2.3 角膜染色評分18-19
• 3.2.4 Real-time PCR檢測m RNA的水平19-22
• 3.2.5 檢測TNF-α炎癥因子在角膜、結(jié)膜組織中的蛋白表達量22-25
• 3.2.6 MUC5AC蛋白在結(jié)膜的表達25
• 3.2.7 病理組織學觀察25
• 3.2.8 據(jù)統(tǒng)計學分析25-26
• 第4章 實驗結(jié)果26-33
• 4.1 SCOP注射組淚液分泌量明顯下降、角膜熒光染色評分增加26-28
• 4.2 利用SCOP造模成功后，角膜、結(jié)膜、淚腺組織炎癥因子（IL-1β、TNF-α）表達明顯上調(diào)28-30
• 4.3 利用SCOP注射造模成功后，MUC5AC的表達明顯下降30
• 4.4 SCOP連續(xù)皮下注射14天后，兔眼角膜和結(jié)膜炎癥因子TNF-α蛋白水平均明顯上調(diào)30-31
• 4.5 SCOP連續(xù)皮下注射14天后，實驗組和對照組角膜、結(jié)膜、淚腺、哈氏腺行石蠟切片HE染色31-33
• 第5章 討論33-35
• 第6章 問題與展望35-36
• 致謝36-37
• 參考文獻37-39
• 綜述39-48
• 參考文獻45-48

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1 肖啟國,劉祖國;干眼模型的建立方法及評價[J];眼科研究;2004年04期

2 袁進;陳家祺;;加強和規(guī)范干眼的臨床研究[J];眼科;2010年03期

3 張海俠;李艷芳;胡東燕;;兒童干眼的臨床研究[J];中國傷殘醫(yī)學;2011年03期

4 趙晶晶;閆筠;李建平;鮑震;;天津市公安民警干眼患病率及相關(guān)因素分析[J];天津醫(yī)藥;2013年11期

5 李鵬;安曉;陳雪藝;馬金鳳;馬效工;;糖尿病患者干眼與眼表異常的相關(guān)分析[J];中國實用眼科雜志;2005年12期

6 陳海娥;趙邯英;趙玉霞;亢麗萍;;準分子激光原位角膜磨鑲術(shù)后干眼的調(diào)查研究[J];眼外傷職業(yè)眼病雜志.附眼科手術(shù);2006年04期

7 楊華;張娟娟;朱秀萍;;65歲以上人群干眼發(fā)病的調(diào)查分析[J];臨床眼科雜志;2006年03期

8 駱非;鄒留河;;兒童干眼的初步研究[J];眼科;2006年06期

9 張宏;陳雪藝;;烏魯木齊地區(qū)干眼危險因素的病例對照研究[J];新疆醫(yī)科大學學報;2007年09期

10 陳健聰;梁翠萍;黃燕然;;42例干眼誤診臨床分析[J];南華大學學報(醫(yī)學版);2007年06期

中國重要會議論文全文數(shù)據(jù)庫 前8條

1 謝立科;朱志容;;干眼儀在眼科臨床的應用[A];中華中醫(yī)藥學會第七次眼科學術(shù)交流會論文匯編[C];2008年

2 葉曉芳;洪佳旭;牟U

本文編號：367454