本文關(guān)鍵詞：東莨菪堿誘導(dǎo)的兔干眼模型的制作及機(jī)制研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的:探索如何用東莨菪堿成功誘導(dǎo)兔干眼模型并研究其可能機(jī)制。方法:選取2.0-2.5kg的新西蘭大白兔20只,隨機(jī)分成2個(gè)組,即實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組,每組各10只,實(shí)驗(yàn)組連續(xù)皮下注射東莨宕堿0.8ml(配制的SCOP濃度為5mg/ml),每天四次,分別為8點(diǎn)、12點(diǎn)、16點(diǎn)、20點(diǎn),干預(yù)14天,對(duì)照組同時(shí)注射等體積無(wú)菌生理鹽水。分別在干預(yù)前、干預(yù)第3天、干預(yù)第7天、干預(yù)第10天、干預(yù)第14天測(cè)定實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的淚液分泌量,并用1%熒光素鈉滴于兔子眼表,瞬目,5S后在裂隙燈下觀察,評(píng)估角膜上皮缺損情況并拍照記錄。干預(yù)完成后,所有實(shí)驗(yàn)動(dòng)物行安樂死,各組動(dòng)物7只分別取角膜、結(jié)膜和淚腺組織,其中一半角膜、上方的球結(jié)膜和淚腺用于提取總RNA,分析炎癥因子IL-1β、TNF-α在角膜、結(jié)膜和淚腺m RNA的表達(dá),另一半角膜和下方球結(jié)膜用于western-blot實(shí)驗(yàn)分析TNF-α蛋白水平;三只兔子全角膜、下方球結(jié)膜、淚腺和哈氏腺用石蠟包埋行HE染色,其上方球結(jié)膜用OCT包埋,冰凍切片行免疫熒光檢測(cè)結(jié)膜杯狀細(xì)胞MUC5AC的表達(dá)情況。結(jié)果:皮下連續(xù)注射東莨宕堿14天后,淚液分泌量明顯下降(干預(yù)前16.58±2.22,干預(yù)后3.57±1.08,P0.00),同時(shí)角膜熒光素鈉染色評(píng)分明顯增多(干預(yù)前0.33±0.52,干預(yù)后8.5±1.05,P0.00),對(duì)照組在干預(yù)前后無(wú)明顯差異(淚液干預(yù)前16.8±1.29,干預(yù)后17.0±0.89,P0.05;評(píng)分干預(yù)前0.67±0.52,干預(yù)后0.670±0.83,P0.050)。干預(yù)14天后取材,Real-time PCR的結(jié)果顯示角膜、結(jié)膜和淚腺組織中IL-1β、Tnf-αm RNA水平均顯著上調(diào),且差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.00);western-blot結(jié)果顯示在角膜和結(jié)膜組織中,Tnf-α蛋白水平相比對(duì)照組上調(diào),且有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;結(jié)膜免疫熒光結(jié)果顯示實(shí)驗(yàn)組MUC5AC表達(dá)明顯低于對(duì)照組的表達(dá);組織石蠟切片HE染色結(jié)果顯示,相比于對(duì)照組,實(shí)驗(yàn)組角膜和結(jié)膜組織上皮細(xì)胞層次排列紊亂、伴有更多的炎癥細(xì)胞浸潤(rùn);實(shí)驗(yàn)組淚腺明顯萎縮,間質(zhì)見炎癥細(xì)胞浸潤(rùn),對(duì)照組淚腺結(jié)構(gòu)形態(tài)基本正常;實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組哈氏腺相比,形態(tài)、結(jié)構(gòu)均基本正常,未見炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)。結(jié)論:運(yùn)用皮下連續(xù)注射東莨菪堿,4mg/次,一天四次,能夠成功誘導(dǎo)兔干眼模型,且與臨床干眼病人的眼表進(jìn)程相吻合,為今后進(jìn)行干眼發(fā)病機(jī)制及藥物研究開辟新的道路。
【關(guān)鍵詞】：東莨菪堿 干眼模型 干眼 IL-1β Tnf-α
【學(xué)位授予單位】：南昌大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R777.34;R-332
【目錄】：

• 摘要3-5
• ABSTRACT5-9
• 第1章 前言9-12
• 第2章 實(shí)驗(yàn)材料12-15
• 2.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物12
• 2.2 主要實(shí)驗(yàn)試劑和耗材12-13
• 2.3 實(shí)驗(yàn)儀器和設(shè)備13-15
• 第3章 實(shí)驗(yàn)方法15-26
• 3.1 主要試劑配制15-17
• 3.2 具體實(shí)驗(yàn)內(nèi)容17-26
• 3.2.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的準(zhǔn)備、分組及模型的制作方法17
• 3.2.2 淚液分泌量的檢測(cè)17-18
• 3.2.3 角膜染色評(píng)分18-19
• 3.2.4 Real-time PCR檢測(cè)m RNA的水平19-22
• 3.2.5 檢測(cè)TNF-α炎癥因子在角膜、結(jié)膜組織中的蛋白表達(dá)量22-25
• 3.2.6 MUC5AC蛋白在結(jié)膜的表達(dá)25
• 3.2.7 病理組織學(xué)觀察25
• 3.2.8 據(jù)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析25-26
• 第4章 實(shí)驗(yàn)結(jié)果26-33
• 4.1 SCOP注射組淚液分泌量明顯下降、角膜熒光染色評(píng)分增加26-28
• 4.2 利用SCOP造模成功后，角膜、結(jié)膜、淚腺組織炎癥因子（IL-1β、TNF-α）表達(dá)明顯上調(diào)28-30
• 4.3 利用SCOP注射造模成功后，MUC5AC的表達(dá)明顯下降30
• 4.4 SCOP連續(xù)皮下注射14天后，兔眼角膜和結(jié)膜炎癥因子TNF-α蛋白水平均明顯上調(diào)30-31
• 4.5 SCOP連續(xù)皮下注射14天后，實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組角膜、結(jié)膜、淚腺、哈氏腺行石蠟切片HE染色31-33
• 第5章 討論33-35
• 第6章 問題與展望35-36
• 致謝36-37
• 參考文獻(xiàn)37-39
• 綜述39-48
• 參考文獻(xiàn)45-48

【相似文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：367454