目的:成熟的視網(wǎng)膜色素上皮（retinal pigment epithelial,RPE）細(xì)胞生理?xiàng)l件下處于靜息狀態(tài),細(xì)胞與細(xì)胞之間規(guī)則排列,組成單層上皮組織夾在神經(jīng)視網(wǎng)膜和脈絡(luò)膜之間維護(hù)神經(jīng)視網(wǎng)膜功能。其上皮的完整性依靠相鄰細(xì)胞間、細(xì)胞與基底膜間三種類型細(xì)胞連接（緊密、錨定和縫隙連接）的相互作用來維持。三種連接中標(biāo)志性的連接蛋白分別是zona occludens 1（ZO-1）,E-cadherin（E-Ca）和connexin 43（CX 43）。增生性玻璃體視網(wǎng)膜病變（Proliferative vitreoretinopathy,PVR）是視網(wǎng)膜脫離手術(shù)失敗的主要原因,且自始至終未找到肯定的臨床治療方法成為眼科研究領(lǐng)域的難題。PVR發(fā)病機(jī)制中一個(gè)重要機(jī)制是游離的視網(wǎng)膜色素上皮RPE細(xì)胞發(fā)生了向間充質(zhì)細(xì)胞轉(zhuǎn)換（Epithelial-Mesenchymal Transition,EMT）。然而,RPE細(xì)胞發(fā)生EMT之前首先是細(xì)胞失去接觸,即細(xì)胞間的連接蛋白發(fā)生破壞或表達(dá)異常,但是PVR微環(huán)境下,RPE細(xì)胞間連接蛋白的早期變化及其內(nèi)在的關(guān)聯(lián)和機(jī)制尚無深入研究。本研究將調(diào)查PVR微環(huán)境... 

【文章頁數(shù)】：53 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
中英文縮略詞對(duì)照表
第1章 引言
第2章 視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞ZO-1,E-Ca,和CX43 蛋白在增生性玻璃體視網(wǎng)膜病變?cè)缙谧兓?guī)律及其內(nèi)在聯(lián)動(dòng)關(guān)系及機(jī)制
    2.1 實(shí)驗(yàn)材料、試劑和儀器
        2.1.1 主要試劑和抗體
        2.1.2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
        2.1.3 主要儀器和耗材
        2.1.4 引物
        2.1.5 SiRNAs
        2.1.6 主要試劑的配制
    2.2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.2.1 人原代視網(wǎng)膜色素上皮(phRPE)細(xì)胞的提取:
        2.2.2 細(xì)胞培養(yǎng)與處理
        2.2.3 SiRNA與質(zhì)粒的轉(zhuǎn)染
        2.2.4 實(shí)時(shí)定量 PCR(qRT-PCR)
        2.2.5 蛋白質(zhì)印跡分析(western blot,WB)
        2.2.6 透射電子顯微鏡(transmission electron microscopy, TEM)
        2.2.7 RBCC 免疫熒光分析(immunofluorescence analysis,IF):
        2.2.8 免疫共沉淀(coimmunoprecipitation assay,co-IP)
        2.2.9 熒光黃染料遷移實(shí)驗(yàn)(Lucifer yellow dye transfer assay)
        2.2.10 滲透率測(cè)定(Permeability assays)
        2.2.11 統(tǒng)計(jì)分析
    2.3 結(jié)果
        2.3.1 TGF-β1降低了phRPE細(xì)胞中E-cadherin,connexin 43和ZO-1的表達(dá),其中E-cadherin最早受到影響。
        2.3.2 敲低E-cadherin導(dǎo)致connexin43和ZO-1 的表達(dá)減少。
        2.3.3 敲低connexin 43導(dǎo)致E-cadherin和ZO-1表達(dá)降低
        2.3.4 ZO-1的敲低導(dǎo)致E-cadherin和connexin43 的表達(dá)減少
        2.3.5 小鼠RPE單層細(xì)胞連接的超微結(jié)構(gòu)
        2.3.6 E-cadherin,connexin43和ZO-1共定位且彼此存在相互作用
        2.3.7 敲低ARPE-19 細(xì)胞中的E-cadherin,connexin43或ZO-1 后將抑制熒光黃通過縫隙連接的轉(zhuǎn)移
        2.3.8 敲低ARPE-19 細(xì)胞中的E-cadherin,connexin43或ZO-1 會(huì)增加上皮滲透性
    2.4 討論
    2.5 小結(jié)
第3章 結(jié)論與展望
    3.1 結(jié)論
    3.2 展望
致謝
參考文獻(xiàn)
攻讀學(xué)位期間的研究成果
綜述
    參考文獻(xiàn)



本文編號(hào)：3653454