目的:真菌性角膜炎是角膜潰瘍的主要病因,可導(dǎo)致嚴(yán)重的視力損害和失明。蝦青素（Astaxanthin,ASX）是一種脂溶性酮類胡蘿卜素,已被證明能抑制多種疾病的免疫炎癥反應(yīng)。本研究旨在探討ASX對(duì)煙曲霉性角膜炎小鼠模型的作用及其具體作用機(jī)制。方法:為了探究ASX對(duì)于煙曲霉菌誘導(dǎo)的角膜炎的作用,進(jìn)行了體內(nèi)及體外實(shí)驗(yàn)。體內(nèi)實(shí)驗(yàn)部分,準(zhǔn)備8周C57BL/6小鼠,通過腹腔注射8%水合氯醛（0.4ml/kg）麻醉。在立體顯微鏡下,用角膜基質(zhì)注射針將煙曲霉菌孢子懸浮液注射于右眼角膜基質(zhì)中。將小鼠平均隨機(jī)分為ASX處理組以及DMSO處理組,并用對(duì)應(yīng)試劑溶液滴眼處理（3次/天）,在不同時(shí)間點(diǎn)麻醉小鼠后在裂隙燈下拍攝小鼠角膜照片并根據(jù)角膜的炎癥程度記錄臨床評(píng)分。在不同時(shí)間點(diǎn)麻醉小鼠后通過頸椎脫臼法處死小鼠,根據(jù)Real-Time RT-PCR法、Western Blot法和ELISA法檢測(cè)炎性細(xì)胞因子（TNF-α、IL-1β、HMGB1）以及模式識(shí)別受體TLR2、TLR4的表達(dá)水平,并用免疫熒光法檢測(cè)角膜中性粒細(xì)胞、巨噬細(xì)胞及TLR2、TLR4的表達(dá)。體外細(xì)胞系實(shí)驗(yàn)部分,根據(jù)處理?xiàng)l件分為6組,分別為正常組... 

【文章來源】：青島大學(xué)山東省

【文章頁數(shù)】：46 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

ASX減輕煙曲霉菌誘導(dǎo)的真菌性角膜炎小鼠模型的疾病表現(xiàn);A.小鼠真菌性角膜炎感染后第3天DMSO處理組與ASX處理組裂隙燈下拍攝角膜的臨床表現(xiàn)；B.小鼠真菌性角膜炎感染后第1、3、5天DMSO處理

青島大學(xué)碩士學(xué)位論文32附錄圖1ASX減輕煙曲霉菌誘導(dǎo)的真菌性角膜炎小鼠模型的疾病表現(xiàn);A.小鼠真菌性角膜炎感染后第3天DMSO處理組與ASX處理組裂隙燈下拍攝角膜的臨床表現(xiàn)；B.小鼠真菌性角膜炎感染后第1、3、5天DMSO處理組與ASX處理組的炎癥評(píng)分；C.小鼠真菌性角膜炎感染后第3天DMSO處理組與ASX處理組的MPO活性（ap<0.05；bp<0.01）。圖2ASX減少煙曲霉菌性角膜炎小鼠角膜中性粒細(xì)胞和巨噬細(xì)胞的募集A.中性粒細(xì)胞在正常小鼠角膜、感染后第3天以及感染后ASX處理第3天小鼠角膜中的免疫熒光染色圖像。中性粒細(xì)胞陽性染色為綠色；藍(lán)色為核染

附錄355天收集各分組小鼠角膜，通過WB法檢測(cè)其中TLR2及TLR4的蛋白表達(dá)；I.TLR2在正常小鼠角膜、感染3天以及感染后ASX處理3天小鼠角膜中的免疫熒光染色圖像。TLR4陽性染色為綠色；藍(lán)色為核染色(DAPI)；J.TLR4在正常小鼠角膜、感染3天以及感染后ASX處理3天小鼠角膜中的免疫熒光染色圖像。TLR4陽性染色為綠色；藍(lán)色為核染色(DAPI)。(bp<0.01)。圖5ASX抑制RAW264.7細(xì)胞實(shí)驗(yàn)中炎癥因子的產(chǎn)生，并抑制TLR2、TLR4的表達(dá)根據(jù)處理?xiàng)l件分為6組：正常組、DMSO組、ASX處理組、煙曲霉菌組、煙曲霉菌+DMSO組和煙曲霉菌+ASX組，對(duì)應(yīng)的分組中加入相同濃度的DMSO及ASX預(yù)處理2小時(shí)后，在對(duì)應(yīng)的分組中加入滅活的煙曲霉菌菌絲懸浮液，A-C.刺激細(xì)胞8小時(shí)后收細(xì)胞，通過Real-TimeRT-PCR法檢測(cè)細(xì)胞中IL-1β、TNF-α、HMGB-1的mRNA表達(dá)；D-E.刺激細(xì)胞8小時(shí)后收細(xì)胞，通過Real-TimeRT-PCR法檢測(cè)細(xì)胞中TLR2、TLR4的mRNA表達(dá)。(bp<0.01)。

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]Boxb mediate BALB/c mice corneal inflammation through a TLR4/MyD88-dependent signaling pathway in Aspergillus fumigatus keratitis[J]. Min Liu,Cui Li,Gui-Qiu Zhao,Jing Lin,Cheng-Ye Che,Qiang Xu,Qian Wang,Rui Xu,Ya-Wen Niu.  International Journal of Ophthalmology. 2018(04)
[2]Antioxidant dietary approach in treatment of fatty liver: New insights and updates[J]. Alessandra Ferramosca,Mariangela Di Giacomo,Vincenzo Zara.  World Journal of Gastroenterology. 2017(23)



本文編號(hào)：3575580