目的:通過調控熱休克蛋白47（heat shock protein 47,HSP47）的基因表達,探索HSP47對鞏膜成纖維細胞（scleral fibroblasts,SF）的膠原合成、分泌和降解的影響。方法:正常的4周齡豚鼠,取后極部鞏膜組織培養(yǎng)SF并傳至3-5代進行實驗。分為4組:正常細胞作為正常對照組;空載體轉染細胞作為陰性對照（negative control,NC）組;分子克隆構建攜帶HSP47基因的真核載體轉染到鞏膜成纖維細胞中作為HSP47上調組;化學法合成HSP47siRNA轉染細胞并篩選出最佳抑制效果的序列及濃度作為HSP47下調組。實時定量聚合酶鏈式反應（quantitative real-time polymerase chain reaction,qRT-PCR）和蛋白免疫印跡（western blot,WB）檢測各組細胞的HSP47、I型膠原、III型膠原、V型膠原及α-平滑肌肌動蛋白（alpha-smooth muscle actin,α-SMA）的信使核糖核酸（messenger ribonucleic acid,mRNA）和蛋白表達。酶聯(lián)免疫吸附試驗（... 

【文章來源】：遵義醫(yī)科大學貴州省

【文章頁數】：49 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖1分子克隆HSP47A.基因裝置載體結果B.酶切鑒定：LaneM:DNAMarker，Lane1:PlasmiddigestedbyHindIIIandNheI，Lane

圖 2 RNA 電泳 Lane 1、2、3 分別為 NC 25 nM、50 nM、100 nM，Lane4、5、6 分別為第 1 條 HSP47siRNA（5’-ACAGGCCTCTACAACTACT -3’）25 nM、50 nM、100 nM，Lane7、8、9 分別為第 2 條 HSP47siRNA（5’-GACAAAGGAGCAGCTGAAA-3’）25 nM、 50 nM、100 nM，Lane10、11、12 分別為第 3 條 HSP47siRNA（5’-AGCTGTTCTATGCTGACCA-3’） 25nM、 50 nM、100 nM。T-PCR 檢測 HSP47、I 型、III 型、V 型膠原和α-SMA 的 mRP47 mRNA 的相對表達量（見表 1），與正常對照組相比，陰性對照=0.913），HSP47 上調組增多 2213.7%（P=0.013），HSP47 下調組減少3）；與陰性對照組相比，HSP47 上調組增多 2022.0%（P=0.012），明顯變化（P=0.088）。 型膠原 mRNA 的相對表達量（見表 1），與正常對照組相比，陰性對

醫(yī)科大學碩士學位論文 郭慶P47 下調組無明顯變化（P=0.646，0.669），HSP47 上調組增多 81.0%（P=0,0陰性對照組相比，HSP47 上調組和下調組均無明顯變化（P=0.229，P=0.165）表 1 qRT-PCR 檢測 mRNA 的相對表達量（ ±s）分組 HSP47 I 型膠原 III 型膠原 V 型膠原 α正常對照 1.00±0.06 1.00±0.15 1.00±0.07 1.00±0.13 1.0陰性對照 1.08±0.25 1.05±0.17 1.01±0.18 1.03±0.17 1.3SP47 上調 23.02±2.74▲◆1.59±0.18▲◆1.35±0.17 1.15±0.15 1.8SP47 下調 0.36±0.02▲0.62±0.19 0.65±0.05▲◆0.43±0.09▲◆0.7▲與正常對照組比較 P＜0.05，◆與陰性對照組比較 P＜0.05。

【參考文獻】：
期刊論文
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