前言:喉癌是頭頸部最常見的惡性腫瘤之一,占全世界癌癥相關(guān)死亡的1%。其中,鱗狀細(xì)胞癌約占喉癌病例的90%,中晚期階段常伴有局部浸潤(rùn)和遠(yuǎn)處淋巴結(jié)的轉(zhuǎn)移,是喉癌患者主要死因之一。雖然治療手段不斷進(jìn)步,但是喉癌患者五年生存率仍不樂觀,因此,深入研究喉癌轉(zhuǎn)移的分子機(jī)制,尋找新的分子靶點(diǎn)對(duì)于喉癌的診斷、治療和預(yù)后評(píng)估具有重要意義。前期,通過電子雜交等技術(shù)我們發(fā)現(xiàn)并克隆了MYCT1基因。研究表明,MYCT1抑制腫瘤細(xì)胞增殖、克隆形成和遷移并促進(jìn)腫瘤細(xì)胞凋亡,在喉癌等腫瘤發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮重要抑癌基因作用。此外,經(jīng)二代測(cè)序我們?cè)谶^表達(dá)MYCT1喉癌細(xì)胞中發(fā)現(xiàn)miR-362-3p等基因表達(dá)水平存在顯著差異,提示miR-362-3p是MYCT1的下游調(diào)控基因。miR-362參與妊娠糖尿病、表皮細(xì)胞衰老、動(dòng)脈粥樣硬化及腫瘤等人類多種疾病的發(fā)生發(fā)展。研究表明,miR-362-3p在腎細(xì)胞癌和胃癌細(xì)胞的遷移中發(fā)揮重要作用。然而,miR-362-3p在喉癌中的作用和分子機(jī)制相關(guān)研究未見報(bào)道。通過TargetScan和Starbase等軟件預(yù)測(cè),我們發(fā)現(xiàn)醛縮酶A（ALDOA）是miR-362-3p的潛在靶基因之一。研... 

【文章來(lái)源】：中國(guó)醫(yī)科大學(xué)遼寧省

【文章頁(yè)數(shù)】：48 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

miR-362-3p在喉癌中的表達(dá)水平檢測(cè)結(jié)果

miR-362-3p inhibitor 轉(zhuǎn)染組遷移細(xì)胞數(shù)較對(duì)照組 nc 顯著減少（圖2D、2E，P<0.05），提示 miR-362-3p 促進(jìn)喉癌 Hep2 細(xì)胞遷移。圖 2，miR-362-3p 對(duì)喉癌 Hep2 細(xì)胞遷移的影響A：qRT-PCR 檢測(cè) miR-362-3p 轉(zhuǎn)染效率。B：細(xì)胞劃痕愈合實(shí)驗(yàn)檢測(cè) miR-362-3p 對(duì)喉癌 Hep2 細(xì)胞遷移的影響。C：細(xì)胞劃痕愈合實(shí)驗(yàn)遷移距離統(tǒng)計(jì)分析結(jié)果。D：Transwell 小室法檢測(cè) miR-362-3p 對(duì)喉癌 Hep2 細(xì)胞遷移的影響。E：Transwell 小室法遷移細(xì)胞數(shù)統(tǒng)計(jì)分析結(jié)果。mi：轉(zhuǎn)染 miR-362-3p 模擬物組；in：轉(zhuǎn)染 miR-362-3p 抑制物組；nc：轉(zhuǎn)染 miR-362-3p 陰性對(duì)照物組；con：只加轉(zhuǎn)染試劑組；empty：不做任何處理組。*P<0.053.4 miR-362-3p 靶基因的預(yù)測(cè)和鑒定經(jīng) Targetscan、Starbase 軟件預(yù)測(cè)發(fā)現(xiàn) ALDOA 的 3' UTR 區(qū)域與 miR-362-3p

中國(guó)醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文存在結(jié)合位點(diǎn)（圖 3A）。并且，ALDOA mRNA 水平在喉癌 Hep2 細(xì)胞，咽鱗癌細(xì)胞 FADU 細(xì)胞以及喉癌細(xì)胞 TU212 中均顯著低于 HEK293 細(xì)胞（圖 3B，P<0.05）。我們應(yīng)用 qRT-PCR 和 Westernblot 驗(yàn)證了 miR-362-3p 對(duì) ALDOAmRNA和蛋白水平的影響。qRT-PCR 結(jié)果顯示 miR-362-3p mimic 轉(zhuǎn)染組中 ALDOAmRNA 水平較對(duì)照組 nc 顯著降低，miR-362-3pinhibitor 轉(zhuǎn)染組中 ALDOAmRNA水平較對(duì)照組 nc 顯著增加（圖 3C，P<0.05）。Westernblot 結(jié)果顯示 miR-362-3pmimic 轉(zhuǎn)染組中 ALDOA 蛋白水平較對(duì)照組 nc 顯著下調(diào)，miR-362-3pinhibitor 轉(zhuǎn)染組中 ALDOA 蛋白水平較對(duì)照組 nc 顯著上調(diào)（圖 3D、3E，P<0.05）。這些結(jié)果提示 ALDOA 可能是 miR-362-3p 的靶基因。

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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本文編號(hào)：3507580