目的:研究衣康酸二甲酯（Dimethyl itaconate,DI）在煙曲霉菌（Aspergillus fumigatus,A.fumigatus）感染角膜炎中發(fā)揮的保護作用及其具體的作用機制。方法:1、煙曲霉菌感染C57BL/6小鼠角膜,給予小鼠角膜2m M DI或PBS處理,觀察小鼠角膜感染后臨床評分;菌落計數(shù)法檢測感染小鼠角膜中真菌負荷;采用免疫熒光法、MPO法及流式細胞術(shù)檢測PBS處理感染角膜、DI處理感染角膜中中性粒細胞數(shù)量的變化;采用PCR法和Western blot法檢測各組小鼠角膜中IL-1β、CXCL1、核因子E2相關(guān)因子2（NF-E2-related factor-2,Nrf2）及血紅素加氧酶1（Heme oxygenase-1,HO-1）m RNA和蛋白的表達。2、0.25m M DI或PBS預(yù)處理人角膜上皮細胞2小時,菌絲刺激細胞8小時或24小時,采用PCR法和ELISA法檢測各組細胞中IL-1β、IL-8及IL-6m RNA和蛋白的表達;采用細胞免疫熒光法檢測人角膜上皮細胞中Nrf2的表達及定位。3、給予Nrf2抑制劑Brusatol（BT）或HO-1抑制劑Z... 

【文章來源】：青島大學(xué)山東省

【文章頁數(shù)】：49 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
abstract
引言
材料與方法
    1 實驗材料
        1.1 實驗對象
        1.2 實驗所需耗材及試劑
        1.3 實驗主要設(shè)備
    2 實驗方法
        2.1 煙曲霉菌培養(yǎng)、菌液的制備
        2.2 小鼠真菌性角膜炎模型的建立
        2.3 小鼠角膜DI預(yù)處理
        2.4 人角膜上皮細胞的培養(yǎng)和煙曲霉菌菌絲刺激實驗
        2.5 人角膜上皮細胞預(yù)處理實驗
        2.6 檢測小鼠角膜MPO
        2.7 小鼠角膜菌落計數(shù)實驗
        2.8 免疫熒光染色實驗方法
        2.9 流式細胞術(shù)檢測
        2.10 RT-PCR實驗方法
        2.11 Western blot實驗方法
        2.12 ELISA實驗步驟
        2.13 真菌生長分析
    3 統(tǒng)計學(xué)處理
結(jié)果
    1 DI對感染煙曲霉菌的C57BL/6小鼠角膜炎癥程度的影響
    2 DI對煙曲霉菌誘導(dǎo)的炎癥因子表達的影響
    3 DI通過激活Nrf2/HO-1 信號通路發(fā)揮抗炎作用
    4 DI抑制煙曲霉菌的生長
討論
結(jié)論
參考文獻
綜述
    綜述參考文獻
攻讀學(xué)位期間的研究成果
附錄
致謝



本文編號：3460353