第一部分PinX1基因調(diào)控端粒酶活性對(duì)鼻咽癌細(xì)胞自噬效應(yīng)的影響目的:探究PinX1靶向端粒酶對(duì)鼻咽癌細(xì)胞自噬效應(yīng)及增殖的影響。方法:通過(guò)qPCR和Western blot監(jiān)測(cè)CNE2、6-10B細(xì)胞系中PinX1的表達(dá)。低表達(dá)細(xì)胞系轉(zhuǎn)染PinX1過(guò)表達(dá)質(zhì)粒及空載質(zhì)粒并分組,RT-PCR監(jiān)測(cè)各組hTERT mRNA表達(dá),Western blot和免疫熒光監(jiān)測(cè)自噬。CCK-8、transwell小室監(jiān)測(cè)細(xì)胞增殖、遷移和侵襲能力,流式細(xì)胞術(shù)分析細(xì)胞周期和細(xì)胞凋亡。結(jié)果:1.PinX1在CNE2細(xì)胞中低表達(dá),在6-10B細(xì)胞中高表達(dá)。2.CNE2細(xì)胞中導(dǎo)入PinX1過(guò)表達(dá)質(zhì)粒后,hTERT表達(dá)降低。3.CNE2細(xì)胞中LC3Ⅰ、P62表達(dá)較高,LC3Ⅱ、Beclin1表達(dá)較低,自噬流形成較弱,自噬水平較低。細(xì)胞的增殖、侵襲遷徙能力較強(qiáng)。4.CNE2細(xì)胞中PinX1過(guò)表達(dá)后LC3Ⅰ、P62表達(dá)降低,LC3Ⅱ、Beclin1表達(dá)升高,自噬流形成增強(qiáng),自噬水平增高。細(xì)胞的增殖、侵襲和遷徙能力均降低,細(xì)胞周期阻滯在G0/G1期,凋亡指數(shù)增加。結(jié)論:CNE2鼻咽癌細(xì)胞自噬表達(dá)較低,加入PinX1靶向端粒酶... 

【文章來(lái)源】：南方醫(yī)科大學(xué)廣東省

【文章頁(yè)數(shù)】：86 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

圖１－３?Ａ．?ＰｉｎＸｌ基因ＰＣＲ產(chǎn)物電泳圖Ｂ．?ＰＩＮＸ丨基因雙酶切電泳圖??

?第一部分?ＰｉｎＸｌ基因調(diào)控端粒酶活性對(duì)鼻咽癌細(xì)胞自噬效應(yīng)的影響???３．３?ｑＰＣＲ、Ｗｅｓｔｅｒｎ?ｂｌｏｔ監(jiān)測(cè)ＰｉｎＸｌ在各組ＣＮＥ２鼻咽癌細(xì)胞株的表達(dá)情況??對(duì)各組ＣＮＥ２鼻咽癌細(xì)胞傳代培養(yǎng)后，使用ｑＰＣＲ檢測(cè)各組鼻咽癌細(xì)胞??ＰｉｎＸｌ?ｍＲＮＡ的表達(dá)量。如圖１－４所示，發(fā)現(xiàn)Ｃ組（Ｏｖｅｒ－ＰｉｎＸ?１組）的ＰｉｎＸｌ??表達(dá)量顯著高于其他兩組（Ｆ＝１２５．８，?／Ｍ）．０００１）。其中，Ｃ組（Ｏｖｅｒ－ＰｉｎＸｌ??組）中ＰｉｎＸｌ的表達(dá)量是Ａ組（Ｂｌａｎｋ組）的２．６９０±?０．０．１２６倍，差異具有??統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（尸＝〇．〇〇〇３?＜０．００１）?；?Ｃ組（Ｏｖｅｒ－ＰｉｎＸ?１組）中ＰｉｎＸｌ的表達(dá)??量是Ｂ組（Ｖｅｃｔｏｒ組）的２．７７９±０．１４０倍，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（Ｐ＝０．０００３??＜０．００１）。通過(guò)Ｗｅｓｔｅｒｎ?ｂｌｏｔ進(jìn)一步驗(yàn)證Ａ、Ｂ、Ｃ組中ＰｉｎＸｌ的表達(dá)情況。??如圖１－４所示，轉(zhuǎn)染ＰｉｎＸｌ過(guò)表達(dá)質(zhì)粒后，Ｃ組中ＰｉｎＸｌ的表達(dá)量明顯高于??Ａ組和Ｂ組。??４，?木？?＋??Ｉ?Ｉ?Ｂ３?Ａ：Ｂｌａｎｋ??￣?本＋木??Ｉ?３－?１?ＩＬ?＝?Ｂ：Ｖｅｃｔｏｒ??￡?ｒ?ｋｓＵｍ?ｎ?Ｃ?０ｖｅｒ－ＰｉｎＸ１??Ｉ？?２－?國(guó)??１：１＿?＿?＿??Ａ：Ｂｌａｎｋ?Ｂ：Ｖｅｃｔｏｒ?Ｃ：０ｖｅｒ－ＰｉｎＸ１??圖１－４?ｑＰＣＲ法監(jiān)測(cè)ＰｉｎＸｌ在各組ＣＮＥ２鼻咽癌細(xì)胞株的表達(dá)（ｎ＝３，＊＊＊Ｐ＜０．００１）??Ｆｉｇｕｒｅ?１－４?ｔｈｅ?ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ?ｏｆ?ＰｉｎＸｌ?ｉｎ?ＣＮＥ２?ｎａｓｏｐｈａｒｙｎｇｅａｌ?ｃａｒｃｉｎｏｍａ?ｃｅｌｌ?

?碩士學(xué)位論文???３．６?Ｗｅｓｔｅｒｎ?Ｂｌｏｔ及免疫焚光監(jiān)測(cè)自嗤表達(dá)情況??利用Ｗｅｓｔｅｒｎ?ｂｌｏｔ檢測(cè)Ａ、Ｂ、Ｃ三組細(xì)胞中自噬相關(guān)調(diào)控蛋白ＬＣ３Ｉ、ＬＣ３ＩＩ、??ｐ６２和Ｂｅｃｌｉｎ－１的表達(dá)情況，如圖１－８所示。發(fā)現(xiàn)在Ｃ組（Ｏｖｅｒ－ＰｉｎＸ］組）中，??自噬相關(guān)蛋白ＬＣ３Ｉ、Ｐ６２的表達(dá)量顯著降低，ＬＣ３ＩＩ、Ｂｅｄｉｎｌ的表達(dá)量顯著增高，??說(shuō)明ＰｉｎＸｌ過(guò)表達(dá)時(shí)，自噬效應(yīng)增強(qiáng)。并進(jìn)一步通過(guò)免疫熒光監(jiān)測(cè)自噬小體的??形成，如圖１－９所示，發(fā)現(xiàn)Ｃ組（Ｏｖｅｒ－ＰｉｎＸｌ組）鼻咽癌細(xì)胞熒光的強(qiáng)度和豐??度顯著高于其他兩組，自噬流形成增強(qiáng)，自噬效應(yīng)增強(qiáng)，結(jié)果與Ｗｅｓｔｅｒｎ?ｂｌｏｔ法??檢測(cè)結(jié)果相一致。??ＡＢＣ??ＬＣ３Ｉ?？■■■？??ＬＣ３ＩＩ?一、－?ｍａｒｎｒｎｍｍ＇??Ｐ６２??Ｂｅｅ??ｇａｐｄｈ?命??Ａ：Ｂｌａｎｋ?組，Ｂ：?Ｖｅｃｔｏｒ?組，Ｃ：Ｏｖｅｒ－ＰｉｎＸ?１?組??圖１－８?Ｗｅｓｔｅｒｎ?ｂｌｏｔ監(jiān)測(cè)自噬相關(guān)調(diào)控蛋白ＬＣ３Ｉ、ＬＣ３ＩＩ、ｐ６２和Ｂｅｃｌｉｎ－１在各組鼻咽??癌細(xì)胞株的表達(dá)??Ｆｉｇｕｒｅ?１－８?Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ?ｏｆ?ａｕｔｏｐｈａｇｙ－ｒｅｌａｔｅｄ?ｒｅｇｕｌａｔｏｒｙ?ｐｒｏｔｅｉｎｓ?ＬＣ３Ｉ，?ＬＣ３ＩＩ?＞?Ｐ６２?ａｎｄ?Ｂｅｃｌｉｎ－１?ｉｎ??ｅａｃｈ?ｇｒｏｕｐ?ｂｙ?ｗｅｓｔｅｒｎ?ｂｌｏｔ??３１??

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]端粒酶檢測(cè)新方法研究進(jìn)展[J]. 孫麗芳,楊海堂,衛(wèi)偉.  分析測(cè)試學(xué)報(bào). 2019(10)
[2]膀胱癌組織中PVRL4、NF-κB p65、E-cadherin的表達(dá)變化及意義[J]. 杜剛,黃瑛.  山東醫(yī)藥. 2019(28)
[3]PinX1對(duì)食管癌細(xì)胞放射敏感性及活性氧水平的影響研究[J]. 劉楊,蔣月,毛榮虎,盧令聰,楊原源.  中華放射醫(yī)學(xué)與防護(hù)雜志. 2019 (01)
[4]PI3K抑制劑抗腫瘤研究進(jìn)展[J]. 蔡田恬,趙敏,王建平.  浙江中西醫(yī)結(jié)合雜志. 2018(08)
[5]腫瘤發(fā)展過(guò)程中自噬與凋亡的相互作用[J]. 闞月一,王婭杰,李琦,李玉潔,楊慶,翁小剛,陳穎,蔡維艷,朱曉新.  中國(guó)比較醫(yī)學(xué)雜志. 2018(02)
[6]自噬與鼻咽癌放療研究進(jìn)展[J]. 楊熙宇,趙國(guó)旗.  輻射研究與輻射工藝學(xué)報(bào). 2017(05)
[7]細(xì)胞自噬與凋亡關(guān)系的分子機(jī)制研究進(jìn)展[J]. 韓姣,曾凡軍,陳世雄,龔正,龔亮,行妍妍,覃黎葵.  海南醫(yī)學(xué). 2016(04)
[8]沉默NF-κB p65基因可抑制鼻咽癌CNE-2干細(xì)胞的增殖和遷移并促進(jìn)凋亡[J]. 吳順龍,李亞軍,胡瑤瑤,張娜,劉雙,王穎,李少林.  腫瘤. 2016(02)
[9]自噬抑制劑3-甲基腺嘌呤增強(qiáng)鼻咽癌細(xì)胞對(duì)放射和化學(xué)治療的敏感性[J]. 宋樂(lè)樂(lè),馬琳艷,陳根德,黃瑩瑩,孫小錦,蔣琛琛,劉浩.  中南大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版). 2016(01)
[10]PinX1基因?qū)Ρ茄拾┘?xì)胞順鉑化療敏感性的影響及其機(jī)制[J]. 申聰香,劉艷慧,文忠,楊柯柯,李冠雪,張沈華,張?chǎng)斡?  中華醫(yī)學(xué)雜志. 2015 (24)



本文編號(hào)：3446695