目的：利用電生理學(xué)、分子生物學(xué)以及形態(tài)學(xué)等技術(shù),連續(xù)動(dòng)態(tài)觀察增齡性耳聾發(fā)生過程中,耳蝸的功能、形態(tài)、結(jié)構(gòu)等特征變化。觀察A/J小鼠耳蝸內(nèi)細(xì)胞凋亡相關(guān)基因的轉(zhuǎn)錄和表達(dá)水平,并通過下調(diào)HEI-OC1細(xì)胞內(nèi)Cdh23和Cs基因的水平,驗(yàn)證在體實(shí)驗(yàn)中細(xì)胞內(nèi)分子變化,分析增齡性聾發(fā)生的相關(guān)機(jī)制。給予抗凋亡藥物治療后,觀察其療效。方法：本實(shí)驗(yàn)共應(yīng)用137只B6小鼠和157只A/J小鼠。①分別在3周、4周、10周、12周、28周和42周時(shí)從兩組小鼠中各隨機(jī)抽取5-10只小鼠進(jìn)行聽覺誘發(fā)腦干電位（ABR）和畸變產(chǎn)物耳聲發(fā)射（DPOAE）檢測。②分別取2周、4周、10周和46周的A/J小鼠和B6小鼠,分離耳蝸、石蠟包埋、切片并行HE染色和caspase-3的熒光免疫組化檢測。③在3周、10周、16周和28周齡時(shí),取兩組小鼠各4只,行基底膜鋪片觀察耳蝸毛細(xì)胞丟失情況。④取2周和8周齡的A/J小鼠和B6小鼠各5只,取內(nèi)耳,通過提取總RNA和實(shí)時(shí)定量PCR技術(shù)檢測兩種小鼠耳蝸內(nèi)細(xì)胞凋亡相關(guān)基因轉(zhuǎn)錄水平的差異。⑤對內(nèi)耳細(xì)胞株HEI-OC1細(xì)胞進(jìn)行shRNA轉(zhuǎn)染,分別下調(diào)Cs、Cdh23基因或共同Cs和Cdh23... 

【文章來源】：濱州醫(yī)學(xué)院山東省

【文章頁數(shù)】：53 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖１?Ａ／Ｊ小鼠表型特征的動(dòng)態(tài)觀察（ａ）基于Ｃｓ基因突變的Ａ／Ｊ小鼠基因分型??方法的建立：Ｃｓ基因ＰＣＲ產(chǎn)物經(jīng)Ｎｌａ?ＩＩＩ限制性內(nèi)切酶剪切后的２．?５％瓊脂糖凝膠??

毛細(xì)胞的損傷主要表現(xiàn)為毛細(xì)胞的丟失和細(xì)胞形態(tài)異常。Ｂ６小鼠在３周齡、??１０周齡和１６周齡都表現(xiàn)出正常的毛細(xì)胞形態(tài)和規(guī)律的靜纖毛束排列，當(dāng)?shù)剑玻钢??齡時(shí)，低回毛細(xì)胞出現(xiàn)丟失和排列異常（圖２?（ａ））。然而，與同齡的Ｂ６小鼠相比，??Ａ／Ｊ小鼠耳蝸低回的外毛細(xì)胞丟失、內(nèi)毛細(xì)胞形態(tài)與排列異常在３周齡時(shí)已非常明??顯。圖２?（ｂ）顯示了我們對Ａ／Ｊ小鼠和Ｂ６小鼠的低、中、頂回耳蝸外毛細(xì)胞的觀??察結(jié)果。總體來說，從３周齡到２８周齡，從耳蝸低回到頂回Ａ／Ｊ小鼠的外毛細(xì)胞??丟失都比同齡的Ｂ６小鼠更為嚴(yán)重。??ａ?ｂ???目６?ｉＰａｓａｌ?ｔｕｒｎｓ）?Ａ／Ｊ?ｉｂａｓａｌ?ｔｕｒｎｓ）?巧?ｉ??＾ＩＩ’?．Ｉ．?ＩＩ’ｌｏ］?■■?４??靈；施：：：：‘：：＾＾３?：１＾Ｊ－?Ｐ?：Ｌ?Ｊ１??ｊＪＨＢＢＳＥＳｇｓａ＾＾３?＊ｐ？?知?ＭＷ．??ｉｈｌ－?Ｉ?＾：ｒ；?Ｉ?Ｉ??２８Ｗ?圓顯?ｐ?ｐ；山１４??圖２．?Ｂ６小鼠和小鼠耳蝸中外毛細(xì)胞的丟失（ａ）顯示了對ＶＪ和Ｂ６兩??種小鼠耳蝸底回毛細(xì)胞丟失的動(dòng)態(tài)觀察：所顯示的困片為耳蝸底回的組織通過鬼??筆環(huán)膚染色所得。在（ａ）中，與左側(cè)的Ｂ６小鼠相比，右側(cè)的Ａ／Ｊ小鼠在３周齡??即表現(xiàn)出外毛細(xì)胞丟失和內(nèi)毛細(xì)胞巧態(tài)、排列異常。在小鼠１０周Ｗ及更大年??齡時(shí)均表現(xiàn)出更嚴(yán)重的內(nèi)外毛細(xì)胞損害。Ｂ６小鼠，尤其是２８周齡的Ｂ６小鼠也表??現(xiàn)出了毛細(xì)胞的丟失和非正常排列。比例尺為５０叫１�；⿲砉P環(huán)膚染色后的組??織中的外毛細(xì)胞進(jìn)行計(jì)數(shù)處理�？偟膩碚f，兩種小鼠外毛細(xì)胞的丟失均是從底回??逐漸發(fā)展到頂回的。兩者相比

周齡（９７９?＋?３６７?ＶＳ．?１２６８?＋?３３１?巧日?４６?周齡（５６１?±２２８?ＶＳ．５７３＋２３１）時(shí)兩者沒有統(tǒng)計(jì)??學(xué)差異（ｐ＞０．０５）。通過對標(biāo)本進(jìn)行肥染色，我們也看到了?Ａ／Ｊ小鼠早期耳蝸內(nèi)??漸進(jìn)性毛細(xì)胞丟失（圖３?（ｂ））。而且，Ａ／Ｊ小鼠的血管紋相對狹窄（圖３?（Ｃ））。??在２周齡、４周齡、１０周齡和４６周齡，Ａ／Ｊ小鼠耳蝸低回血管紋的平均厚度（Ｐｍ）??分別是１６．２±２，１８．３＋２．５，?２１．５±?１．１，和１３．８?＋?２，而相應(yīng)年齡的Ｂ６小鼠低回血??管紋平均厚度（ｕｍ）則分別為２０?＋?２，?２１．６＋２．８，２４．５?＋?１．５，和１６．６＋２．２。通??過統(tǒng)計(jì)，兩者僅在２周齡時(shí)有明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。＜０．０５）。而在每個(gè)時(shí)間點(diǎn)，這兩??種小鼠的耳蝸中回的螺旋神經(jīng)節(jié)細(xì)胞密度和血管紋厚度并沒有明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異??（數(shù)據(jù)未顯示）。??ａ?２Ｗ?４Ｗ?１０Ｗ?４６Ｗ??化靜圓??Ｗ嗎哪｜？擊纖瀑??＞隊(duì)碼》｜麵一肺緝??？Ｊ?Ｃ?２Ｗ?４Ｗ?１０Ｗ?４６Ｗ??Ｉｆｆ??圖３．?小鼠和Ｂ６小鼠耳蝸組織肥染包后的動(dòng)態(tài)病理觀察（ａ）為螺旋神??經(jīng)節(jié)細(xì)胞（ＳＧＮｓ）的病理學(xué)變化。直到４６周齡Ｂ６小鼠都表現(xiàn)出正常的細(xì)胞密度，??但是，如困中畫圈區(qū)域所示，Ａ／Ｊ小鼠的螺旋神經(jīng)節(jié)細(xì)胞（ＳＧＮｓ）從４周齡即表現(xiàn)??２５??


本文編號：3371874