目的:觀察Mecom基因在小鼠內(nèi)耳發(fā)育過程中不同階段的動態(tài)表達特征及規(guī)律,并進一步研究Mecom基因?qū)π∈蠖佒С旨毎鲋臣胺只挠绊�。方�?1.內(nèi)耳發(fā)育過程中Mecom蛋白的表達特征:選用胚胎第9.5天（E9.5）到胚胎期18.5天（E18.5）的C57BL/6胎鼠,利用冰凍切片及免疫熒光組織化學(xué)染色技術(shù)觀察在內(nèi)耳發(fā)育階段Mecom的表達特征規(guī)律;2、腺病毒轉(zhuǎn)染基底膜過表達Mecom蛋白:利用腺病毒轉(zhuǎn)染技術(shù)轉(zhuǎn)染基底膜,通過免疫熒光染色觀察腺病毒轉(zhuǎn)染率,同時利用蛋白免疫印跡實驗及實時熒光定量PCR實驗進一步檢測Mecom在基因及蛋白水平的表達變化;3、過表達Mecom基因?qū)Χ佒С旨毎脑鲋臣稗D(zhuǎn)分化的影響:利用新生鼠耳蝸毛細胞損傷模型,過表達Mecom基因后,利用免疫熒光染色及qPCR實驗觀察上調(diào)Mecom基因?qū)?nèi)耳支持細胞的影響。結(jié)果:1.內(nèi)耳發(fā)育過程中Mecom蛋白的表達特征:在E9.5天時,未在聽泡及其周圍組織觀察到Mecom蛋白的明顯表達,當(dāng)胚胎發(fā)育到E10.5天時,Mecom蛋白開始在感覺上皮周圍弱表達,其局限表達于聽泡周圍的間充質(zhì);E11.5時期Mecom的表達增強但也局限... 

【文章來源】：皖南醫(yī)學(xué)院安徽省

【文章頁數(shù)】：70 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

內(nèi)耳發(fā)育各階段中Mecom蛋白的表達A1：沿橫線所示進行連續(xù)冰凍切片；A2:紅色標(biāo)記Sox2的表達；A3：E11時期，以PBS代替Evi-1抗小鼠單克隆抗體作為陰性對照，免疫組化無陽性顯色

15.5及E18.5時期，Evi-1及Sox2的表達

圖 3 腺病毒載體的構(gòu)建（A）：pHBAD-EF1-MCS-3flag-CMV-GFP 載體圖譜； （B）：合成酶切驗證結(jié)果；Lane 1：Plasmid ；Lane 2: Plasmid Digested with BamHI KpnI； La DNA Marker；（C）：Ad-Mecom-EGFP 腺病毒載體轉(zhuǎn)染基底膜（Ad-Mecom-EGFP：綠色）；

【參考文獻】：
期刊論文
[1]胚胎小鼠耳蝸感覺上皮的形態(tài)發(fā)生[J]. 劉少鋒,周梁,李華偉,沈云珍.  中國耳鼻咽喉頭頸外科. 2005(07)

博士論文
[1]小鼠聽覺上皮發(fā)育及其相關(guān)分子機制[D]. 劉少峰.復(fù)旦大學(xué) 2010



本文編號：3356329