目的:觀察Mecom基因在小鼠內(nèi)耳發(fā)育過程中不同階段的動態(tài)表達(dá)特征及規(guī)律,并進(jìn)一步研究Mecom基因?qū)π∈蠖佒С旨?xì)胞增殖及分化的影響。方法:1.內(nèi)耳發(fā)育過程中Mecom蛋白的表達(dá)特征:選用胚胎第9.5天（E9.5）到胚胎期18.5天（E18.5）的C57BL/6胎鼠,利用冰凍切片及免疫熒光組織化學(xué)染色技術(shù)觀察在內(nèi)耳發(fā)育階段Mecom的表達(dá)特征規(guī)律;2、腺病毒轉(zhuǎn)染基底膜過表達(dá)Mecom蛋白:利用腺病毒轉(zhuǎn)染技術(shù)轉(zhuǎn)染基底膜,通過免疫熒光染色觀察腺病毒轉(zhuǎn)染率,同時(shí)利用蛋白免疫印跡實(shí)驗(yàn)及實(shí)時(shí)熒光定量PCR實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步檢測Mecom在基因及蛋白水平的表達(dá)變化;3、過表達(dá)Mecom基因?qū)Χ佒С旨?xì)胞的增殖及轉(zhuǎn)分化的影響:利用新生鼠耳蝸毛細(xì)胞損傷模型,過表達(dá)Mecom基因后,利用免疫熒光染色及qPCR實(shí)驗(yàn)觀察上調(diào)Mecom基因?qū)?nèi)耳支持細(xì)胞的影響。結(jié)果:1.內(nèi)耳發(fā)育過程中Mecom蛋白的表達(dá)特征:在E9.5天時(shí),未在聽泡及其周圍組織觀察到Mecom蛋白的明顯表達(dá),當(dāng)胚胎發(fā)育到E10.5天時(shí),Mecom蛋白開始在感覺上皮周圍弱表達(dá),其局限表達(dá)于聽泡周圍的間充質(zhì);E11.5時(shí)期Mecom的表達(dá)增強(qiáng)但也局限... 

【文章來源】：皖南醫(yī)學(xué)院安徽省

【文章頁數(shù)】：70 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

內(nèi)耳發(fā)育各階段中Mecom蛋白的表達(dá)A1：沿橫線所示進(jìn)行連續(xù)冰凍切片；A2:紅色標(biāo)記Sox2的表達(dá)；A3：E11時(shí)期，以PBS代替Evi-1抗小鼠單克隆抗體作為陰性對照，免疫組化無陽性顯色

15.5及E18.5時(shí)期，Evi-1及Sox2的表達(dá)

圖 3 腺病毒載體的構(gòu)建（A）：pHBAD-EF1-MCS-3flag-CMV-GFP 載體圖譜； （B）：合成酶切驗(yàn)證結(jié)果；Lane 1：Plasmid ；Lane 2: Plasmid Digested with BamHI KpnI； La DNA Marker；（C）：Ad-Mecom-EGFP 腺病毒載體轉(zhuǎn)染基底膜（Ad-Mecom-EGFP：綠色）；

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]胚胎小鼠耳蝸感覺上皮的形態(tài)發(fā)生[J]. 劉少鋒,周梁,李華偉,沈云珍.  中國耳鼻咽喉頭頸外科. 2005(07)

博士論文
[1]小鼠聽覺上皮發(fā)育及其相關(guān)分子機(jī)制[D]. 劉少峰.復(fù)旦大學(xué) 2010



本文編號：3356329