本文關鍵詞：Rap1抑制脈絡膜新生血管的實驗研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的:脈絡膜新生血管是多種眼底疾病共有的基本病理改變,因其累及黃斑區(qū)視網(wǎng)膜,常引起反復出血、滲出和后極部視網(wǎng)膜脈絡膜瘢痕化而嚴重影響患者的中心視力。視網(wǎng)膜色素上皮-Bruch膜-脈絡膜毛細血管復合體的完整性與CNV的發(fā)生發(fā)展密切相關。在CNV相關疾病中,RPE屏障完整性的喪失發(fā)生在遷移、炎癥等病理過程之前。研究發(fā)現(xiàn),屬于Ras超家族一員的小分子G蛋白Rap1,對于細胞運動和連接形成具有重要調(diào)節(jié)作用,可參與調(diào)節(jié)上皮細胞間和內(nèi)皮細胞間緊密連接與粘附連接形成,從而影響屏障功能的完整性。我們前期研究已經(jīng)證實,Rap1的活化形式GTP-Rap1在實驗性CNV中表達較正常組織中減少,表明了Rap1與CNV形成的相關性,提示我們增強Rap1的活性或許可以通過加強RPE屏障完整性進而抑制CNV形成,但并未通過體內(nèi)激活Rap1觀察其對CNV的具體作用以及對RPE屏障完整性的影響,因此不能直接確定Rap1在CNV的發(fā)生發(fā)展中所扮演的角色。本次研究采用激光光凝誘導BN大鼠CNV模型,通過玻璃體腔注射8cpt-c AMP激活Rap1,觀察CNV的發(fā)生發(fā)展情況以及CNV組織中相關因子的表達水平,探討Rap1對CNV以及RPE屏障功能的具體作用。方法:1 8-10周健康雄性棕色挪威(Brown Norway,BN)大鼠70只,經(jīng)裂隙燈及眼底鏡檢查,雙眼前節(jié)及眼底均正常,隨機分為實驗組和實驗對照組2組,每組35只大鼠,70只眼。采用氪激光(激光參數(shù):波長647nm,光斑直徑200μm,功率260m W,曝光時間0.05s)距離視盤邊緣2-3個視盤直徑,圍繞視盤在視網(wǎng)膜大血管之間均勻光凝9-10個點,以見到光凝處有氣泡產(chǎn)生提示Bruch膜被擊穿為標志,建立大鼠CNV模型。2激光造模后立即給予玻璃體腔注射,實驗對照組和實驗組分別行玻璃體腔注射生理鹽水和8cpt-c AMP,注射劑量為1μl,觀察時間:激光后3天、7天、14天、21天、28天。3激光后14天,兩組分別隨機選取5只大鼠,腹腔麻醉后,頸動脈注射1ml異硫氰酸熒光素—葡聚糖,摘除大鼠眼球,行脈絡膜血管鋪片,激光掃描共聚焦顯微鏡觀察CNV形成情況,并測定CNV的區(qū)域面積,比較兩組CNV生成的量。4兩組分別隨機選取15只大鼠,分別于激光后3天、7天、14天、21天、28天(每個觀察時間點3只大鼠,6只眼),腹腔麻醉后,摘除大鼠眼球,行Real-Time PCR方法檢測CNV組織中GTP-Rap1、ZO-1、VEGF基因m RNA轉錄水平,觀察上述指標變化趨勢,并且兩組進行比較。5兩組分別選取15只大鼠,分別于激光后3天、7天、14天、21天、28天(每個觀察時間點3只大鼠,6只眼),腹腔麻醉后,摘除大鼠眼球,行Western blot方法檢測CNV組織中GTP-Rap1、ZO-1、VEGF蛋白表達水平,觀察上述指標變化趨勢,并且兩組進行比較。6采用SPSS22.0軟件包對實驗數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計分析。結果:1脈絡膜血管平鋪:激光后14天,光凝部位CNV呈形態(tài)不規(guī)則的高熒光微血管網(wǎng),實驗組較實驗對照組CNV形成明顯減少,且具有統(tǒng)計學意義(P0.001)。2 Real-Time PCR:實驗組GTP-Rap1、ZO-1基因相對表達量隨觀察時間點的延長均呈逐漸增多的趨勢,VEGF基因相對表達量呈逐漸減少的趨勢。實驗對照組GTP-Rap1基因相對表達量隨觀察時間點的延長呈逐漸減少的趨勢,VEGF基因相對表達量呈逐漸增多的趨勢。激光后各觀察時間點,實驗組GTP-Rap1基因相對表達量較實驗對照組增多,從第7天開始兩組差異具有統(tǒng)計學意義(P0.001)。VEGF基因相對表達量較實驗對照組降低,從激光后第7天開始,差異具有統(tǒng)計學意義(P0.001)。激光后第14天,實驗組ZO-1基因相對表達量較實驗對照組增多,差異具有統(tǒng)計學意義(P0.001)。3 Western blot:實驗組GTP-Rap1、ZO-1蛋白表達水平隨觀察時間點的延長均呈逐漸增多的趨勢,VEGF蛋白水平呈逐漸減少的趨勢。實驗對照組GTP-Rap1蛋白表達水平隨觀察時間點的延長呈逐漸減少的趨勢,VEGF蛋白表達水平呈逐漸增多的趨勢。激光后各觀察時間點,實驗組GTP-Rap1蛋白表達水平較實驗對照組增多,從第7天開始兩組差異具有統(tǒng)計學意義(P0.001)。VEGF蛋白水平較實驗對照組降低,從第7天開始差異具有統(tǒng)計學意義(P0.001)。激光后第14天,實驗組ZO-1表達水平較對照組增多,差異具有統(tǒng)計學意義(P0.001)。結論:1激活Rap1可有效加強細胞間緊密連接,增強RPE屏障完整性。2活化的Rap1可通過加強RPE屏障的完整性以及降低VEGF的表達水平顯著減少實驗性CNV的形成。3本實驗為CNV的治療方案提供了新思路——激活Rap1可能是治療CNV比較有前景的有效新途徑。這將為以后的實驗研究提供可靠的理論依據(jù)。
【關鍵詞】：脈絡膜新生血管 Rap1 RPE-Bruch膜-脈絡膜毛細血管復合體 GTP-Rap1 VEGF ZO-1 抑制效應
【學位授予單位】：河北醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R773
【目錄】：

• 摘要4-7
• ABSTRACT7-11
• 英文縮寫11-13
• 前言13-15
• 材料與方法15-22
• 結果22-23
• 附圖23-29
• 附表29-30
• 討論30-34
• 結論34-35
• 參考文獻35-40
• 綜述40-55
• 參考文獻47-55
• 致謝55-56
• 個人簡歷56

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前7條

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中國碩士學位論文全文數(shù)據(jù)庫 前1條

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  本文關鍵詞：Rap1抑制脈絡膜新生血管的實驗研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：335039