發(fā)布時間：2021-08-08 07:54

　　目的探討miR-34c對慢性鼻-鼻竇炎伴鼻息肉（chronic rhinosinusitis with nasal polyps,CRSwNP）鼻上皮纖毛細胞分化的影響及其調(diào)控機制。方法獲取正常對照及CRSwNP患者的鼻上皮細胞,real-time PCR檢測miR-34c的表達,免疫細胞化學檢測纖毛細胞數(shù)量。建立鼻上皮細胞氣液界面培養(yǎng)體系,敲低表達miR-34c后免疫熒光檢測纖毛標記物β-tubulin Ⅳ的表達。采用IL-13刺激鼻上皮細胞,real-time PCR檢測miR-34c和纖毛發(fā)生轉(zhuǎn)錄因子FOXJ1的表達。結(jié)果與正常對照鼻上皮細胞相比,CRSwNP鼻上皮中miR-34c表達量降低（正常對照13.43±10.31 vs CRSwNP 5.53±2.56,P<0.05）,纖毛細胞百分比也有明顯下調(diào)（正常對照18.20%±2.52% vs CRSwNP 12.58%±2.06%,P<0.05）。在鼻上皮細胞中敲低表達miR-34c后,纖毛細胞數(shù)量明顯降低。IL-13刺激可以明顯降低miR-34c（刺激前5.85±4.54 vs 刺激后0.43±0.40,P<... 

【文章來源】：中國耳鼻咽喉頭頸外科. 2020,27(01)CSCD

【文章頁數(shù)】：4 頁

【部分圖文】：

敲低表達miR-34c對鼻上皮細胞纖毛細胞數(shù)量的影響。免疫熒光染色顯示纖毛細胞標記物β-tubulin Ⅳ和上皮細胞緊密連接蛋白ZO-1的表達。A 陰性對照空載體組,B miR-34c抑制物轉(zhuǎn)染組。紅色、綠色、藍色熒光分別表示ZO-1、β-tubulin Ⅳ和細胞核。n=3,Bar=20 μm

2.1 正常對照和鼻息肉上皮細胞中miR-34c表達及纖毛細胞數(shù)量比較。real-time PCR技術(shù)檢測miR-34c在正常對照和鼻息肉上皮細胞中的表達,結(jié)果顯示,與正常對照鼻上皮細胞相比,鼻息肉來源的上皮細胞中miR-34c的相對表達量明顯降低(正常對照13.43±10.31 vs CRSwNP 5.53±2.56),差異具有統(tǒng)計學意義(圖1A)。同時采用細胞涂片結(jié)合免疫細胞化學技術(shù)檢測鼻上皮細胞中纖毛細胞數(shù)量,發(fā)現(xiàn)正常對照鼻上皮細胞中纖毛細胞比例為(18.20±2.52)%,而鼻息肉上皮中纖毛細胞比例為(12.58±2.06)%,較正常對照組明顯降低(圖1B)。2.2 敲低表達miR-34c對鼻上皮細胞纖毛細胞數(shù)量的影響。為探討miR-34c對鼻上皮纖毛細胞分化的直接影響,我們利用化學合成的miR-34c抑制劑轉(zhuǎn)染細胞,敲低miR-34c表達,然后采用氣液界面培養(yǎng)體系繼續(xù)培養(yǎng)至上皮細胞分化完全后檢測纖毛細胞比例。其中綠色熒光代表纖毛標記物β-tubulin Ⅳ著色,與陰性對照空載體組相比(圖2A),miR-34c抑制物轉(zhuǎn)染組,上皮細胞中纖毛細胞比例有明顯下調(diào)(圖2B)。紅色熒光代表經(jīng)ZO-1抗體染色后相鄰上皮細胞間的緊密連接,其勾勒出細胞邊界,顯示兩組細胞融合良好。

2.3 IL-13對miR-34c和FOXJ1表達的調(diào)控。為進一步探討miR-34c表達的上游調(diào)控機制,我們應用Th2細胞因子IL-13刺激氣液界面培養(yǎng)的鼻上皮細胞,檢測其對miR-34c以及纖毛發(fā)生關鍵轉(zhuǎn)錄因子FOXJ1表達的影響。結(jié)果顯示,IL-13 10 ng/ml刺激上皮細胞21天后,miR-34c(刺激前5.85±4.54 vs 刺激后0.43±0.40)及FOXJ1(刺激前1.41±1.09 vs 刺激后0.15±0.19)的表達均較刺激前有明顯下調(diào),差異有統(tǒng)計學意義(圖3)。呼吸道上皮黏液纖毛清除系統(tǒng)功能障礙與多種呼吸道炎性疾病發(fā)生相關,包括哮喘、慢性阻塞性肺病、囊性纖維化等[2]。我們前期的研究發(fā)現(xiàn),與正常對照鼻上皮相比,CRSwNP患者鼻上皮中纖毛細胞數(shù)量明顯減少,纖毛運動功能減弱,同時伴有杯狀細胞數(shù)量增加及黏液過度分泌[5],證實黏液纖毛功能障礙與CRSwNP發(fā)病密切相關。然而,關于CRSwNP患者鼻腔黏液纖毛清除系統(tǒng)功能障礙的發(fā)生機制目前尚不是很清楚。在本研究中,我們發(fā)現(xiàn)CRSwNP患者鼻上皮中miR-34c表達較健康對照鼻上皮明顯降低,并且在體外培養(yǎng)的鼻上皮細胞中敲低表達miR-34c后,纖毛細胞數(shù)量有明顯減少,提示miR-34c參與調(diào)控鼻息肉發(fā)病過程中的纖毛功能障礙。并且,我們進一步探索了miR-34c的上游調(diào)控機制,發(fā)現(xiàn)炎性因子IL-13刺激可以下調(diào)miR-34c和纖毛發(fā)生關鍵轉(zhuǎn)錄因子FOXJ1的表達,提示IL-13可以通過下調(diào)miR-34c表達進而抑制纖毛發(fā)生,參與調(diào)控CRSwNP黏液纖毛功能障礙。

【參考文獻】：
期刊論文
[1]小鼠腦皮質(zhì)神經(jīng)干細胞體外培養(yǎng)及miRNAs影響其分化能力[J]. 趙祥宇,舒鵬程,張靖,陰彬,彭小忠.  基礎醫(yī)學與臨床. 2011(06)



本文編號：3329551