目的建立人鼻咽癌多藥耐藥細胞株CNE2/ADM,并研究其生物學特性。方法以人鼻咽癌細胞株CNE2為親本細胞,采用阿霉素（ADM）濃度梯度遞增法誘導建立多藥耐藥細胞株CNE2/ADM。通過觀察細胞形態(tài)學變化,藥物敏感性試驗,測定生長曲線、群體倍增時間、細胞周期及P-糖蛋白（P-gp）功能和表達情況,評價CNE2/ADM的生物學特性。結果與CNE2細胞相比,CNE2/ADM耐藥細胞異形明顯,并對ADM在內的4種化療藥物產(chǎn)生了耐藥性,增殖速度減慢,群體倍增時間延長（P<0.05）,G0/G1期細胞增多,S期、G2/M期細胞減少（P<0.05）,P-gp的藥物泵出功能增強、表達水平升高。結論成功建立了人鼻咽癌多藥耐藥細胞株CNE2/ADM,其具有典型的多藥耐藥表型,可作為進一步研究鼻咽癌多藥耐藥機制及篩選逆轉劑較為理想的細胞模型。 

【文章來源】：成都醫(yī)學院學報. 2016,11(02)

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【部分圖文】：

圖１ＣＮＥ２和ＣＮＥ２／ＡＤＭ在光鏡下的細胞形態(tài)（×２００）注：Ａ：ＣＮＥ２；Ｂ：ＣＮＥ２／ＡＤＭ

２１１３５．６３±６．４２ａ１２．９８順鉑９．４７±０．３３４５．８２±３．５７ｂ４．８４長春新堿１７４．５９±６．２５９６６．７６±１０．４２ｃ５．５４５－氟尿嘧啶１９０．１４±６．２８３８５．６０±１２．６５ｄ２．０３注：與ＣＮＥ２相比，ａＰ＝０．００２，ｂＰ＝０．００５，ｃＰ＝０．００３，ｄＰ＝０．００６圖１ＣＮＥ２和ＣＮＥ２／ＡＤＭ在光鏡下的細胞形態(tài)（×２００）注：Ａ：ＣＮＥ２；Ｂ：ＣＮＥ２／ＡＤＭ圖２ＣＮＥ２和ＣＮＥ２／ＡＤＭ的生長曲線２．３細胞周期分析細胞周期分析結果顯示，耐藥細胞較親代細胞的細胞周期發(fā)生改變，表現(xiàn)為ＣＮＥ２／ＡＤＭ細胞的Ｇ０／Ｇ１期分布增多，Ｓ期、Ｇ２／Ｍ期分布減少，差異有統(tǒng)計學意義（Ｐ＜０．０５）（圖３、表２）。表２ＣＮＥ２和ＣＮＥ２／ＡＤＭ的細胞周期分布（ｎ＝３，珔ｘ±ｓ，％）分類Ｇ０／Ｇ１ＳＧ２／ＭＣＮＥ２５４．７３±１．５０２１．２３±０．８５２２．２７±０．８５ＣＮＥ２／ＡＤＭ６９．６０±０．８９ａ１６．７３±０．７２ｂ１２．５７±１．９８ｃ注：與ＣＮＥ２相比，ａＰ＝０．００１，ｂＰ＝０．００７，ｃＰ＝０．００４２．４Ｐ－ｇｐ轉運功能檢測結果Ｒｈｏ１２３外排實驗結果顯示，ＣＮＥ２／ＡＤＭ和ＣＮＥ２細胞內Ｒｈｏ１２３熒光強度分別為（１０．６８±２．４２）×１０５和（５２．３４±２．６９）×１０５，ＣＮＥ２／ＡＤＭ細胞外排Ｒｈｏ１２３增多，差異有統(tǒng)計

圖３ＣＮＥ２和ＣＮＥ２／ＡＤＭ的細胞周期分布注：Ａ：ＣＮＥ２；Ｂ：ＣＮＥ２／ＡＤＭ圖４ＣＮＥ２和ＣＮＥ２／ＡＤＭ中Ｐ－ｇｐ表達情況３討論ＭＤＲ是指腫瘤細胞一旦對一種化療藥物產(chǎn)生耐藥性，對其他多種結構和作用機制不同的化療藥物也產(chǎn)生交叉耐藥，致使藥物療效逐漸下降的現(xiàn)象［７］，其本質上是腫瘤細胞在生存壓力下逐步建立起的一種適應過程［８－９］。體外建立穩(wěn)定的多藥耐藥細胞株是研究ＭＤＲ產(chǎn)生和逆轉的基礎和前提。藥物濃度梯度遞增法是目前構建腫瘤多藥耐藥細胞株較為常用的的方法，雖然其操作費時、繁瑣，但容易把握、成功率較高，且所構建的細胞模型耐藥性穩(wěn)定，在撤藥后仍能保持較高的耐藥性［１０］。多藥耐藥細胞模型構建后的評價方法一般包括：耐藥指數(shù)的檢測、細胞生物指標的檢測及耐藥標志物的檢測［１１］。因此，本研究采用阿霉素濃度梯度遞增法誘導建立人鼻咽癌多藥耐藥細胞株ＣＮＥ２／ＡＤＭ，并從上述３個方面對其生物學特性進行評價。藥物敏感性檢測結果顯示，ＣＮＥ２／ＡＤＭ不僅對阿霉素產(chǎn)生了耐藥，而且對順鉑，長春新堿和５－氟尿嘧啶這３種結構和作用機制不同的鼻咽癌化療藥物也產(chǎn)生了不同程度的交叉耐藥性，耐藥指數(shù)分別為１２．９８、４．８４、５．５４和２．０３。Ｓｎｏｗ等［１２］的分度標準認為，耐藥指數(shù)＜５屬低度耐藥，５～１５之間屬中度耐藥，＞１５屬高度耐藥。依此標準劃分，ＣＮＥ２／ＡＤＭ細胞對阿霉素和長春新堿均為中度耐藥，而對順鉑和５－氟尿嘧啶則均為低度耐藥。ＣＮＥ２／ＡＤＭ在不含阿霉素的培養(yǎng)基中反復傳代２

【參考文獻】：
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本文編號：3320200