目的本實(shí)驗(yàn)通過(guò)體內(nèi)及體外模型共同探究α-黑素細(xì)胞刺激素（α-MSH）對(duì)Ⅱ型糖尿病所導(dǎo)致的視網(wǎng)膜血管滲漏、血-視網(wǎng)膜屏障（BRB）破壞的拮抗作用及其分子機(jī)制。方法將8周齡II型糖尿病模型小鼠（BKS db/db）隨機(jī)分為糖尿病組（db/db）,糖尿病+α-MSH組（db/db+α-MSH）;同時(shí)以野生型小鼠（BKS+/+）作為正常對(duì)照組,每組10只動(dòng)物。連續(xù)4周監(jiān)測(cè)各組小鼠的代謝指標(biāo)。在小鼠10、12周齡時(shí),db/db+α-MSH組小鼠經(jīng)右眼玻璃體腔注射α-MSH（1?l,3.3?g/?l）,db/db組及野生型BKS+/+小鼠組注射等體積的無(wú)菌生理鹽水。3周后,各組小鼠進(jìn)行視網(wǎng)膜電圖（ERG）檢測(cè)、蘇木精-伊紅（H&E）染色、視網(wǎng)膜血管外白蛋白染色、膠質(zhì)纖維酸性蛋白（GFAP）染色、二氫溴化乙錠（DHE）染色及末端脫氧核苷酸轉(zhuǎn)移酶介導(dǎo)的dUTP缺口末端標(biāo)記（TUNEL）染色,檢測(cè)α-MSH對(duì)II型糖尿病視網(wǎng)膜損傷的拮抗作用。體外實(shí)驗(yàn)中,將經(jīng)高糖高脂聯(lián)合刺激的恒河猴視網(wǎng)膜血管內(nèi)皮細(xì)胞（RF/6A）進(jìn)行CM-H₂DCFDA染色,檢測(cè)0.1μM、0.5μM、1μ... 

【文章來(lái)源】：天津醫(yī)科大學(xué)天津市 211工程院校

【文章頁(yè)數(shù)】：74 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

II型糖尿病db/db小鼠的各項(xiàng)生理指標(biāo)在實(shí)驗(yàn)期間，db/db小鼠與相同遺傳背景的正常對(duì)照BKS+/+小鼠相比，體重（A）、進(jìn)食量（B）和飲水量（C）均顯著增加

12圖 2 小鼠在 0.01 cd*s/m2、30.0 cd*s/m2閃光刺激下的視網(wǎng)膜電生理分析暗適應(yīng)下光強(qiáng)刺激為 0.01 cd*s/m2時(shí)，玻璃體腔注射 α-MSH 顯著縮短了 db/d小鼠 a 波（A）及 b（C）波的潛時(shí)，對(duì) a 波振幅無(wú)顯著影響（B），顯著提高 波振幅（D）。當(dāng)閃光刺激為 30.0 cd*s/m2時(shí)，玻璃體腔注射 α-MSH 顯著提高波振幅（E），對(duì) b 波振幅無(wú)顯著影響（F）。* P < 0.05, ** P < 0.01

圖 3 玻璃體腔注射 α-MSH 可顯著改善 db/db 小鼠視網(wǎng)膜形態(tài)在 10 和 12 周齡時(shí)，db/db 小鼠經(jīng)玻璃體腔注射 α-MSH，并以同齡 BKS+/+小鼠作為正常對(duì)照組。各組小鼠 15 周齡時(shí)，眼球行石蠟切片 H&E 染色后，（A-C）分別為正常對(duì)照組、db/db 小鼠、經(jīng) α-MSH 干預(yù)的 db/db 小鼠的視網(wǎng)膜代表性圖片。（D）為視網(wǎng)膜各核層厚度的定量分析。可見(jiàn) db/db 小鼠視網(wǎng)膜整體、光感受器外層、外叢狀層、內(nèi)核層及內(nèi)叢狀層的厚度與正常對(duì)照組相比顯著降低，α-MSH 的干預(yù)使其恢復(fù)正常厚度。標(biāo)尺代表 20 μm。光感受器外層（OS），外核層（ONL），外叢狀層（OPL），內(nèi)核層（INL），內(nèi)叢狀層（IPL），視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞層（RGC），全層厚度（total layer，TL）。* P < 0.05, ** P < 0.011.3.4 α-MSH 正�；暰W(wǎng)膜血管滲漏血管滲漏是糖尿病視網(wǎng)膜病變的重要病理特征，可導(dǎo)致視網(wǎng)膜水腫、視網(wǎng)膜脫離等，影響視力甚至致盲[48]。本實(shí)驗(yàn)取各組 15 周齡小鼠視網(wǎng)膜冰凍切片后經(jīng) Isolectin B4 和抗白蛋白抗體免疫熒光雙染，以分別定位視網(wǎng)膜血管結(jié)構(gòu)及觀察視網(wǎng)膜血管外的白蛋白滲漏程度。結(jié)果顯示，db/db 小鼠生理鹽水注射組的視

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]A hypothesis for treating inflammation and oxidative stress with hydrogen sulfide during age-related macular degeneration[J]. Akash K George,Mahavir Singh,Rubens Petit Homme,Avisek Majumder,Harpal S SANDhu,Suresh C Tyagi.  International Journal of Ophthalmology. 2018(05)
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本文編號(hào)：3304265