目的本實驗通過體內及體外模型共同探究α-黑素細胞刺激素（α-MSH）對Ⅱ型糖尿病所導致的視網膜血管滲漏、血-視網膜屏障（BRB）破壞的拮抗作用及其分子機制。方法將8周齡II型糖尿病模型小鼠（BKS db/db）隨機分為糖尿病組（db/db）,糖尿病+α-MSH組（db/db+α-MSH）;同時以野生型小鼠（BKS+/+）作為正常對照組,每組10只動物。連續(xù)4周監(jiān)測各組小鼠的代謝指標。在小鼠10、12周齡時,db/db+α-MSH組小鼠經右眼玻璃體腔注射α-MSH（1?l,3.3?g/?l）,db/db組及野生型BKS+/+小鼠組注射等體積的無菌生理鹽水。3周后,各組小鼠進行視網膜電圖（ERG）檢測、蘇木精-伊紅（H&E）染色、視網膜血管外白蛋白染色、膠質纖維酸性蛋白（GFAP）染色、二氫溴化乙錠（DHE）染色及末端脫氧核苷酸轉移酶介導的dUTP缺口末端標記（TUNEL）染色,檢測α-MSH對II型糖尿病視網膜損傷的拮抗作用。體外實驗中,將經高糖高脂聯合刺激的恒河猴視網膜血管內皮細胞（RF/6A）進行CM-H₂DCFDA染色,檢測0.1μM、0.5μM、1μ... 

【文章來源】：天津醫(yī)科大學天津市 211工程院校

【文章頁數】：74 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

II型糖尿病db/db小鼠的各項生理指標在實驗期間，db/db小鼠與相同遺傳背景的正常對照BKS+/+小鼠相比，體重（A）、進食量（B）和飲水量（C）均顯著增加

12圖 2 小鼠在 0.01 cd*s/m2、30.0 cd*s/m2閃光刺激下的視網膜電生理分析暗適應下光強刺激為 0.01 cd*s/m2時，玻璃體腔注射 α-MSH 顯著縮短了 db/d小鼠 a 波（A）及 b（C）波的潛時，對 a 波振幅無顯著影響（B），顯著提高 波振幅（D）。當閃光刺激為 30.0 cd*s/m2時，玻璃體腔注射 α-MSH 顯著提高波振幅（E），對 b 波振幅無顯著影響（F）。* P < 0.05, ** P < 0.01

圖 3 玻璃體腔注射 α-MSH 可顯著改善 db/db 小鼠視網膜形態(tài)在 10 和 12 周齡時，db/db 小鼠經玻璃體腔注射 α-MSH，并以同齡 BKS+/+小鼠作為正常對照組。各組小鼠 15 周齡時，眼球行石蠟切片 H&E 染色后，（A-C）分別為正常對照組、db/db 小鼠、經 α-MSH 干預的 db/db 小鼠的視網膜代表性圖片。（D）為視網膜各核層厚度的定量分析�？梢� db/db 小鼠視網膜整體、光感受器外層、外叢狀層、內核層及內叢狀層的厚度與正常對照組相比顯著降低，α-MSH 的干預使其恢復正常厚度。標尺代表 20 μm。光感受器外層（OS），外核層（ONL），外叢狀層（OPL），內核層（INL），內叢狀層（IPL），視網膜神經節(jié)細胞層（RGC），全層厚度（total layer，TL）。* P < 0.05, ** P < 0.011.3.4 α-MSH 正常化視網膜血管滲漏血管滲漏是糖尿病視網膜病變的重要病理特征，可導致視網膜水腫、視網膜脫離等，影響視力甚至致盲[48]。本實驗取各組 15 周齡小鼠視網膜冰凍切片后經 Isolectin B4 和抗白蛋白抗體免疫熒光雙染，以分別定位視網膜血管結構及觀察視網膜血管外的白蛋白滲漏程度。結果顯示，db/db 小鼠生理鹽水注射組的視

【參考文獻】：
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本文編號：3304265