中性粒細(xì)胞在發(fā)生網(wǎng)捕死亡后,可釋放出一種中性粒細(xì)胞特有的網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)——中性粒細(xì)胞胞外陷阱（NETs）,在免疫反應(yīng)中發(fā)揮作用,捕獲多種病原體及無(wú)菌性晶體。研究表明,NETs可參與多種疾病的發(fā)生,其中包括糖尿�。―iabetes Mellites,DM）及其眼部并發(fā)癥糖尿病性視網(wǎng)膜病變（Diabetic Retinopathy,DR）,然而,NETs與DR之間的具體關(guān)系尚不清楚。我們的研究發(fā)現(xiàn),NETs在糖尿病患者的血清中顯著升高,尤其在增殖期糖尿病性視網(wǎng)膜病變患者（Proliferation Diabetic Retinopathy,PDR）中升高最為顯著。體外細(xì)胞實(shí)驗(yàn)表明,隨著時(shí)間的延長(zhǎng),高糖刺激下NETs的產(chǎn)生逐漸增多,并主要通過(guò)NADPH氧化酶依賴的途徑產(chǎn)生。我們進(jìn)一步在高糖高脂飼料聯(lián)合低劑量鏈脲佐菌素（Streptozocin,STZ）誘導(dǎo)的2型糖尿病大鼠模型中證實(shí)了中性粒細(xì)胞在眼部的存在,并發(fā)現(xiàn)當(dāng)DR發(fā)生時(shí),血-視網(wǎng)膜屏障破壞,中性粒細(xì)胞從外周血中越過(guò)血視網(wǎng)膜屏障,與視網(wǎng)膜血管內(nèi)皮細(xì)胞相粘附,進(jìn)一步加劇了DR的炎癥反應(yīng),加速疾病的進(jìn)展。此外,在糖尿病個(gè)體的玻璃體腔及視網(wǎng)膜中也發(fā)現(xiàn)... 

【文章來(lái)源】：重慶醫(yī)科大學(xué)重慶市

【文章頁(yè)數(shù)】：53 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

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高糖高脂飲食聯(lián)合小劑量STZ誘導(dǎo)2型糖尿病大鼠造模成功Figure1.Highfatdietandlowdosestreptozotocin(STZ)-induceddiabeticrats

重慶醫(yī)科大學(xué)碩士研究生學(xué)位論文對(duì)照以排除年齡性別的干擾。由于 NETs是由 DNA 骨架和附著在其上的多種蛋白共同組成，因此，我們選擇胞外游離 DNA/NETs 及其中一種酶 NE 作為代表，抽取并分離受試者血清后檢測(cè)以上兩種成分。我們利用 pico-green 檢測(cè)胞外游離 DNA，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，游離 DNA/NETs 的水平在所有 2 型糖尿病患者的血清中均較正常對(duì)照有所升高（圖 2A）。由于長(zhǎng)期高血糖狀態(tài)會(huì)導(dǎo)致糖尿病微血管并發(fā)癥，為了探討長(zhǎng)期高血糖下是否會(huì)有更多 NETs形成，我們對(duì)所有 2型糖尿病患者進(jìn)行細(xì)分，進(jìn)一步探討了其在 DWR、NPDR 及PDR 三種亞型中的 NETs 水平。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，與正常對(duì)照相比，胞外 DNA/NETs 的含量在 DWR、NPDR 及 PDR 患者血清中均有所升高，NPDR、PDR 患者外周血血清中游離 DNA/NETs較 DWR患者無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（圖 2B）。

圖 3. 受試者血清中 NE 的表達(dá)水平Figure 3. NE expression in the serum of all human subjectsA. NE 在 HC 和 T2DM 患者血清中的表達(dá)水平（nHC=27；nT2DM=90。****P < 0.0001）；B.NE 在 HC、DWR、NPDR、PDR 患者血清中的表達(dá)水平（采用非配對(duì) t 檢驗(yàn)分析各組于健康對(duì)照之間的差異；nHC = 27; nDWR = 30; nNPDR = 29; nPDR =31。****P < 0.0001）。如圖 4 所示，pico-green 實(shí)驗(yàn)結(jié)果表示 2 型糖尿病大鼠血清中游離 DNA/NETs水平較正常對(duì)照鼠顯著增多。動(dòng)物模型研究結(jié)果與人血清結(jié)果相一致，充分說(shuō)明了 NETs 相關(guān)標(biāo)志物在糖尿病及糖尿病視網(wǎng)膜病變個(gè)體的外周血中顯著增加，為下一步體外實(shí)驗(yàn)研究高糖是否能誘導(dǎo)中性粒細(xì)胞產(chǎn)生 NETs提供一定的理論基礎(chǔ)。


本文編號(hào)：3297597