本文關(guān)鍵詞：鈣結(jié)合蛋白S100A8和S100A9對(duì)鼻咽癌侵襲和遷移的影響，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：本文包括兩個(gè)部分：(一)外源性S100A8和S100A9蛋白質(zhì)對(duì)鼻咽癌細(xì)胞侵襲和遷移的影響； (二)S100A8和S100A9真核雙表達(dá)質(zhì)粒的構(gòu)建和表達(dá)。第一部分外源性S100A8和S100A9蛋白質(zhì)對(duì)鼻咽癌細(xì)胞侵襲和遷移的影響目的：探討外源性S100A8和S100A9蛋白對(duì)鼻咽癌細(xì)胞增殖、遷移和侵襲能力的影響以及在此過程中MMPs基因的表達(dá)變化,為S100A8、S 100A9蛋白在鼻咽癌細(xì)胞侵襲轉(zhuǎn)移相關(guān)機(jī)制研究提供理論基礎(chǔ)。方法：①CCK8法檢測不同濃度的S100A8、S100A9蛋白對(duì)CNE1、CNE2細(xì)胞增殖能力的影響；②以含1μg/ml的S100A8、S100A9蛋白復(fù)合物的培養(yǎng)基為實(shí)驗(yàn)組,不加S100A8、S100A9蛋白復(fù)合物的培養(yǎng)基為對(duì)照組,分別進(jìn)行Transwell小室遷移和侵襲實(shí)驗(yàn)檢測鼻咽癌細(xì)胞的侵襲遷移情況；③在培養(yǎng)基中添加1μg/ml的S100A8、S100A9蛋白復(fù)合物的培養(yǎng)細(xì)胞為實(shí)驗(yàn)組,不加S100A8、S100A9蛋白復(fù)合物的培養(yǎng)細(xì)胞為對(duì)照組進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng),real time-PCR檢測侵襲遷移標(biāo)志物基質(zhì)金屬蛋白酶MMPs基因的表達(dá)。結(jié)果：①CCK8實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,0-10ng/ml的S100A8/A9蛋白能夠促進(jìn)CNE1、CNE2細(xì)胞增殖,當(dāng)濃度大于30μg/ml時(shí),則表現(xiàn)出抑制作用；②Transwell細(xì)胞遷移實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組比較,穿越聚碳酸酯膜的細(xì)胞數(shù)量多,遷移能力強(qiáng),差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)；③Transwell細(xì)胞侵襲實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組比較,穿越聚碳酸酯膜的細(xì)胞數(shù)量多,侵襲能力強(qiáng),差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)；④real time-PCR檢測基質(zhì)金屬蛋白酶MMPs基因結(jié)果顯示,實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組相比,CNE1細(xì)胞有MMP2、MMP7基因表達(dá)上調(diào),差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),MNP9、MMP12基因表達(dá)下調(diào),差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)；CNE2細(xì)胞有MMP1、MMP8、MMP9、MMP12基因表達(dá)下調(diào),差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。結(jié)論：低濃度(10ng/ml、S100A8/A9蛋白能夠促進(jìn)CNE1、CNE2細(xì)胞增殖,超過30gg/ml則呈現(xiàn)抑制細(xì)胞生長。1μg/ml的S100A8/A9蛋白濃度能夠促進(jìn)CNE1、CNE2細(xì)胞侵襲和遷移。測基質(zhì)金屬蛋白酶MMPs基因結(jié)果顯示,實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組相比,CNE1細(xì)胞有MMP2、MMP7基因表達(dá)上調(diào),差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),MNP9、MMP12基因表達(dá)下調(diào),差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)；CNE2細(xì)胞有MMP1、MMP8、MMP9、MMP12基因表達(dá)下調(diào),差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。結(jié)論：低濃度(10ng/ml、S100A8/A9蛋白能夠促進(jìn)CNE1、CNE2細(xì)胞增殖,超過30gg/ml則呈現(xiàn)抑制細(xì)胞生長。1μg/ml的S100A8/A9蛋白濃度能夠促進(jìn)CNE1、CNE2細(xì)胞侵襲和遷移。第二部分S100A8和S100A9真核雙表達(dá)質(zhì)粒的構(gòu)建和表達(dá)目的：在鼻咽癌細(xì)胞中克隆S100A8和S100A9基因并構(gòu)建表達(dá)質(zhì)粒和在鼻咽癌細(xì)胞中表達(dá),為內(nèi)源性S100A8和S100A9蛋白質(zhì)與鼻咽癌發(fā)生發(fā)展的關(guān)系研究奠定基礎(chǔ)。方法：PCR擴(kuò)增目的基因S100A8和S100A9片段,將其插入載體pBudCE4.1構(gòu)建S100A8-S100A9-pBudCE4.1表達(dá)質(zhì)粒,經(jīng)雙酶切、PCR及測序鑒定后轉(zhuǎn)染至人鼻咽癌細(xì)胞系(CNE1)進(jìn)行表達(dá)并用real time-PCR 及 Western Blot進(jìn)行檢測。結(jié)果：PCR、雙酶切和測序結(jié)果顯示,S100A8和S100A9氨基酸序列無變異(S100A8有1個(gè)堿基突變),表達(dá)質(zhì)粒S100A8-S100A9-pBudCE4.1構(gòu)建正確。Real time-PCR和Western Blot結(jié)果顯示,S 100A8和S100A9基因在CNE1中正確轉(zhuǎn)錄與表達(dá)。結(jié)論：成功克隆S100A8和S100A9基因并構(gòu)建S100A8-S100A9-pBudCE4.1表達(dá)質(zhì)粒且可在鼻咽癌細(xì)胞中穩(wěn)定表達(dá)。
【關(guān)鍵詞】：鼻咽癌細(xì)胞系 S100A8/A9 細(xì)胞遷移 細(xì)胞侵襲 MMPs 鼻咽癌 質(zhì)粒pBudCE4.1 鼻咽癌細(xì)胞系 S100A8 S100A9
【學(xué)位授予單位】：廣西醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R739.63
【目錄】：

• 個(gè)人簡歷3-6
• 英漢縮略對(duì)照表6-8
• 摘要8-10
• ABSTRACT10-14
• 前言14-16
• 第一部分 外源性S100A8和S100A9蛋白質(zhì)對(duì)鼻咽癌細(xì)胞侵襲和遷移的影響16-38
• 1 材料16-18
• 2 方法18-25
• 3 結(jié)果25-32
• 4 討論32-37
• 5 小結(jié)37-38
• 第二部分 S100A8和S100A9真核雙表達(dá)質(zhì)粒的構(gòu)建和表達(dá)38-68
• 1 材料38-41
• 2 方法41-55
• 3 結(jié)果55-65
• 4 討論65-67
• 5 小結(jié)67-68
• 參考文獻(xiàn)68-73
• 綜述73-86
• 參考文獻(xiàn)81-86
• 致謝86-87
• 攻讀碩士期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文87

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

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  本文關(guān)鍵詞：鈣結(jié)合蛋白S100A8和S100A9對(duì)鼻咽癌侵襲和遷移的影響，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號(hào)：328983