本文關(guān)鍵詞：EB病毒BARF1及其變異型基因改變鼻咽癌細(xì)胞生物學(xué)行為機(jī)制的初步研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：背景和目的:EB病毒(Epstein-Barr virus,EBV)編碼早期基因BARF1具有轉(zhuǎn)化作用,在多數(shù)鼻咽癌(nasopharyngeal carcinoma,NPC)組織中表達(dá),可能在NPC發(fā)生中發(fā)揮重要作用。我們前期研究發(fā)現(xiàn)BARF1及其變異型基因過(guò)表達(dá)均提高了EBV陰性細(xì)胞系CNE的增殖和抗凋亡能力。本研究旨在進(jìn)一步探討B(tài)ARF1基因及其變異型對(duì)NPC細(xì)胞系HONE1生物學(xué)行為的影響及機(jī)制,為最終闡明BARF1參與NPC的致癌機(jī)制提供依據(jù)。方法:以B95-8型和V29A變異型BARF1基因穩(wěn)定轉(zhuǎn)染HONE1細(xì)胞及對(duì)照細(xì)胞為研究對(duì)象,進(jìn)行MTT實(shí)驗(yàn)、平板克隆形成實(shí)驗(yàn)、凋亡誘導(dǎo)實(shí)驗(yàn)、細(xì)胞遷移侵襲實(shí)驗(yàn)和裸鼠致瘤實(shí)驗(yàn),檢測(cè)BARF1原型和變異型基因?qū)ONE1細(xì)胞生物學(xué)行為的影響;并采用表達(dá)譜芯片檢測(cè)和篩選BARF1基因轉(zhuǎn)染前后差異表達(dá)基因,對(duì)差異表達(dá)基因進(jìn)行功能注釋和生物反應(yīng)通路分析,繪制差異基因相互作用蛋白網(wǎng)絡(luò)圖,找出差異倍數(shù)大的關(guān)鍵節(jié)點(diǎn)基因,選擇與細(xì)胞增殖、凋亡和遷移相關(guān)通路,在BARF1轉(zhuǎn)染細(xì)胞及裸鼠瘤組織中用real-time PCR進(jìn)行表達(dá)驗(yàn)證。結(jié)果:(1)細(xì)胞生物學(xué)實(shí)驗(yàn):與對(duì)照細(xì)胞比較,BARF1原型和變異型基因轉(zhuǎn)染細(xì)胞MTT吸光度值和平板克隆形成率增高(P均小于0.05);順鉑誘導(dǎo)凋亡后細(xì)胞存活率提高,而細(xì)胞凋亡率降低(P均小于0.05);細(xì)胞遷移和侵襲能力提高(P均小于0.05)。BARF1原型和變異型基因轉(zhuǎn)染細(xì)胞之間細(xì)胞增殖、凋亡、遷移和侵襲均無(wú)顯著性差異。(2)裸鼠致瘤實(shí)驗(yàn):與對(duì)照細(xì)胞比較,BARF1變異型基因轉(zhuǎn)染細(xì)胞裸鼠致瘤能力無(wú)明顯提高。(3)基因芯片分析:聚類(lèi)分析顯示B95-8型和V29A變異型細(xì)胞聚類(lèi)在同一簇中,與對(duì)照細(xì)胞比較,共同差異基因317條,其中上調(diào)94條,下調(diào)223條。功能注釋和KEGG分析發(fā)現(xiàn)多條差異基因與細(xì)胞粘附、細(xì)胞增殖、細(xì)胞凋亡和細(xì)胞遷移侵襲等生物學(xué)過(guò)程有關(guān),參與細(xì)胞因子受體相互作用通路、細(xì)胞粘附分子通路、Erb B信號(hào)傳導(dǎo)途徑通路和癌癥通路等。(4)通路挑選及驗(yàn)證:Real-time PCR顯示,與對(duì)照細(xì)胞比較,BARF1基因轉(zhuǎn)染細(xì)胞中CDH1、TP63、MIR205HG、GJA1和S100A2表達(dá)下調(diào),ZEB2表達(dá)上調(diào),與芯片結(jié)果一致;BARF1基因轉(zhuǎn)染細(xì)胞形成裸鼠瘤組織中上述基因檢測(cè)結(jié)果與轉(zhuǎn)染細(xì)胞中一致。結(jié)論:(1)BARF1原型和V29A變異型基因均可促進(jìn)NPC細(xì)胞系HONE1增殖、提高其抗凋亡能力和遷移侵襲能力,從而增強(qiáng)HONE1細(xì)胞腫瘤原性,V29A變異不影響其致癌潛能。(2)BARF1基因過(guò)表達(dá)可調(diào)控多種與細(xì)胞增生、凋亡、遷移和侵襲等腫瘤相關(guān)基因的表達(dá)。(3)BARF1基因可能通過(guò)下調(diào)CDH1、GJA1和S100A2基因,促進(jìn)細(xì)胞增殖和遷移,通過(guò)下調(diào)TP63、MIR205HG并上調(diào)ZEB2而抑制細(xì)胞凋亡,促進(jìn)細(xì)胞遷移和侵襲。
【關(guān)鍵詞】：EB病毒 BARF1 鼻咽癌 生物學(xué)行為 致癌機(jī)制
【學(xué)位授予單位】：青島大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類(lèi)號(hào)】：R739.63
【目錄】：

• 摘要2-3
• abstract3-6
• 引言6-8
• 第一章 材料與方法8-21
• 1.1 儀器、試劑和耗材8-9
• 1.2 慢病毒轉(zhuǎn)染目的細(xì)胞及穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞篩選9
• 1.3 穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞中BARF1基因表達(dá)檢測(cè)9-12
• 1.4 細(xì)胞生物學(xué)實(shí)驗(yàn)12-14
• 1.5 裸鼠成瘤實(shí)驗(yàn)14-15
• 1.6 基因芯片實(shí)驗(yàn)15-19
• 1.7 通路挑選及驗(yàn)證19-20
• 1.8 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析20-21
• 第二章 結(jié)果21-39
• 2.1 穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞BARF1基因表達(dá)21-22
• 2.2 BARF1原型和變異型基因?qū)?xì)胞增殖的影響22-23
• 2.3 BARF1原型和變異型基因?qū)?xì)胞凋亡的影響23-24
• 2.4 BARF1原型和變異型基因?qū)?xì)胞遷移和侵襲的影響24-25
• 2.5 裸鼠成瘤實(shí)驗(yàn)結(jié)果25-26
• 2.6 基因芯片結(jié)果26-37
• 2.7 通路挑選及驗(yàn)證37-39
• 第三章 討論39-43
• 研究結(jié)論43-44
• 參考文獻(xiàn)44-48
• 綜述48-63
• 參考文獻(xiàn)56-63
• 攻讀學(xué)位期間的研究成果63-64
• 致謝64-65

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前1條

1 司英健;Cx43基因修飾的白血病骨髓基質(zhì)細(xì)胞對(duì)Jurkat細(xì)胞體外調(diào)節(jié)作用的研究[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2007年

  本文關(guān)鍵詞：EB病毒BARF1及其變異型基因改變鼻咽癌細(xì)胞生物學(xué)行為機(jī)制的初步研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

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本文編號(hào)：327640