目的：經(jīng)過ROCK抑制劑Y-27632處理Hep-2細(xì)胞后，探討RhoC/ROCK信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑對(duì)Hep-2細(xì)胞的作用機(jī)制及生物學(xué)影響。方法：（1）使用免疫熒光染色， Western blot及RT-PCR方法，檢測經(jīng)過Y-27632處理前后RhoC、ROCK的蛋白及mRNA表達(dá)變化；（2）使用顯微鏡觀察Hep-2細(xì)胞形態(tài)，Transwell法檢測Hep-2細(xì)胞體外侵襲、遷移能力變化，MTT法檢測細(xì)胞體外增殖能力的變化，從宏觀水平研究Y-27632對(duì)喉癌細(xì)胞生物學(xué)行為影響。結(jié)果：Y-27632可有效下調(diào)hep-2細(xì)胞中RhoC、ROCK-1及ROCK-2蛋白及mRNA的表達(dá)。Y-27632能顯著抑制Hep-2細(xì)胞的侵襲、遷移。不同濃度的該抑制劑對(duì)Hep-2細(xì)胞的增殖能力有不同程度的影響。結(jié)論：RhoC/ROCK在Hep-2細(xì)胞的遷移和侵襲中起到了重要作用，Y-27632能顯著抑制Hep-2細(xì)胞的侵襲、遷移和增殖能力。 

【文章來源】：中國人民解放軍醫(yī)學(xué)院北京市

【文章頁數(shù)】：53 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

ROCK-1在hep-2細(xì)胞中的表達(dá)A：未加抑制劑hep-2中ROCK-1免疫熒光染色

1.2，1.3 所示，經(jīng)過 Y-27632 抑制后，hep-2 細(xì)胞的形態(tài)及數(shù)量發(fā)生了變化；未處理的細(xì)胞呈梭形，細(xì)胞鋪展良好，數(shù)量多；處理后的細(xì)胞變圓，鋪展性差，數(shù)量變少。圖 1.1 ROCK-1 在 hep-2 細(xì)胞中的表達(dá)A：未加抑制劑 hep-2 中 ROCK-1 免疫熒光染色B：加抑制劑 Y-27632 后 hep-2 中 ROCK-1 免疫熒光染色圖 1.1 中，ROCK-1 在 hep-2 細(xì)胞中表達(dá)表現(xiàn)為紅色熒光，藍(lán)色熒光為染色的細(xì)胞核，對(duì)比圖A和圖 B可以發(fā)現(xiàn)，紅色熒光在 B圖中明顯減少，由此可知 Y-27632可抑制 ROCK-1 在 hep-2 細(xì)胞中表達(dá)。

、RT-PCR 結(jié)果采 用 RT-PCR 法 檢 測 加 抑 制 劑 前 后 hep-2 細(xì) 胞 中 RhoC_mRNA CK-1_mRNA 及 ROCK-2_mRNA 表達(dá)的變化，結(jié)果表明經(jīng)過抑制劑 Y-27632 的藥物組與對(duì)照組相比，RhoC_mRNA、ROCK-1_mRNA 及 ROCK-2_mRNA 明顯降低，由此可知 Y-27632 可有效抑制 Hep-2 細(xì)胞中 RhoC_mRNACK-1_mRNA 及 ROCK-2_mRNA 表達(dá)。以下結(jié)果均經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 P<0.05。詳 1.4、1.5、1.6（注意圖中 1 為未經(jīng)處理的 hep-2，2 為加抑制劑后的 hep-2）。圖 1.3 RhoC 加抑制劑前后免疫熒光比較A：未加抑制劑中 RhoC 免疫熒光染色B：加抑制劑 Y-27632 后 RhoC 免疫熒光染

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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本文編號(hào)：3244985