本文關(guān)鍵詞：CD25siRNA納米粒抑制大鼠高危角膜移植免疫排斥的實驗研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的探討EntransterTM-CD25siRNA納米粒抑制大鼠高危角膜移植術(shù)后免疫排斥反應(yīng)及延長角膜植片存活時間的作用。本實驗分為兩部分：實驗一：探討非病毒載體EntransterTM-CD25siRNA、脂質(zhì)體-CD25siRNA對正常SD大鼠角膜轉(zhuǎn)染率和轉(zhuǎn)染毒性,篩選最佳轉(zhuǎn)染試劑實驗二：通過納米載體介導(dǎo)CD25siRNA來干預(yù)高危角膜移植術(shù)后的大鼠角膜,探討CD25siRNA在角膜移植排斥中的作用方法實驗一：制備EntransterTM-CD25siRNA復(fù)合物(EntransterTM組)、脂質(zhì)體-CD25siRNA復(fù)合物(脂質(zhì)體組)、CD25siRNA (siRNA組)和生理鹽水(對照組)。將80只正常成年SD大鼠隨機法分為四組,均選右眼為實驗眼,在裂隙燈下刮除SD大鼠角膜上皮,分別將上述四種轉(zhuǎn)染試劑按照相同劑量點眼于所有模型大鼠眼表,于點眼后12h,24h,3d,7d在裂隙燈下觀察大鼠眼球情況,行熒光顯微鏡檢測四種轉(zhuǎn)染試劑的轉(zhuǎn)染率,行HE染色、TUNEL染色檢測轉(zhuǎn)染試劑對角膜的毒性,行CD11b抗體檢測角膜對轉(zhuǎn)染試劑的免疫應(yīng)答。實驗二：以96只SD大鼠為受體,48只Wistar大鼠為供體。受體右眼堿燒傷后14天行穿透性角膜移植手術(shù)。術(shù)后將大鼠隨機分為4組：A組為陰性對照組；B組為EntransterTM-control CD25siRNA治療組；C組為EntransterTM-CD25siRNA治療組；D組為二次治療組,除了術(shù)后給予EntransterTM-CD25siRNA點眼外,術(shù)后第7天再次點眼。自術(shù)后第1d起每日在裂隙燈下觀察大鼠角膜情況并對其排斥情況進行評分。行HE染色檢測角膜組織病理情況、透射電鏡觀察植片超微結(jié)構(gòu)、免疫組化和熒光定量PCR法檢測角膜CD25的表達。結(jié)果實驗一：由熒光顯微鏡檢測結(jié)果顯示,對照組實驗?zāi)Ｐ蜔o陽性結(jié)果,EntransterTM組熒光表達數(shù)量及強度高于脂質(zhì)體組,siRNA組熒光表達早但至24h已完全衰減。HE染色、TUNEL染色、CDllb抗體檢測結(jié)果顯示脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染試劑引起的角膜炎性反應(yīng)、角膜細(xì)胞凋亡和免疫應(yīng)答明顯強于其余三組。實驗二：C、D兩組角膜植片存活時間相比A、B兩組明顯延長,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(p0.05)。HE顯示A、B組角膜植片增厚、水腫,膠原纖維排列紊亂,大量炎性細(xì)胞浸潤；C、D組植片排斥程度較A、B組明顯減輕。免疫組化顯示CD25分子在各組角膜上皮層、基質(zhì)層、內(nèi)皮層均有表達,A、B組中的表達明顯多于C、D組。透射電鏡結(jié)果顯示實驗組角膜植片基質(zhì)層成纖維細(xì)胞凋亡與壞死較對照組減輕,超微結(jié)構(gòu)改變具有明顯差異。A、B兩組角膜植片中CD25 mRNA的表達明顯高于C、D兩組,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。結(jié)論1.選用非病毒納米EntransterTM作為載體,轉(zhuǎn)染CD25siRNA于正常SD大鼠角膜,具有轉(zhuǎn)染效率高、低毒性、不引起角膜免疫反應(yīng)的特點,為角膜疾病基因治療選擇合適的載體提供了基礎(chǔ)。2. CD25siRNA納米粒可減輕角膜移植術(shù)后免疫排斥反應(yīng),有效延長角膜植片存活時間。
【關(guān)鍵詞】：角膜移植 移植物排斥 納米結(jié)構(gòu) 白細(xì)胞介素2受體α亞單位
【學(xué)位授予單位】：重慶醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R779.65
【目錄】：

• 英漢縮略語名詞對照5-6
• 中文摘要6-9
• 英文摘要9-13
• 前言13-15
• 第一部分 Entranster~(TM)納米載體介導(dǎo)CD25siRNA對大鼠角膜的轉(zhuǎn)染實驗研究15-23
• 1 材料與方法15-18
• 2 結(jié)果18-20
• 3 討論20-23
• 第二部分 CD25siRNA納米粒在大鼠高危角膜移植免疫排斥反應(yīng)中的研究23-31
• 1 材料與方法23-26
• 2 結(jié)果26-28
• 3 討論28-31
• 全文小結(jié)31-32
• 參考文獻32-35
• 附圖35-41
• 文獻綜述41-47
• 參考文獻44-47
• 致謝47-48
• 攻讀碩士學(xué)位期間發(fā)表的文章48

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中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 陳家祺,陳麗芳;治療性角膜移植的系列研究[J];中山醫(yī)科大學(xué)學(xué)報;2001年02期

2 閆啟昌;第三屆中日角膜捐獻角膜移植中心大會暨哈爾濱大會召開[J];日本醫(yī)學(xué)介紹;2001年10期

3 閆啟昌;第四屆中日角膜捐獻角膜移植中心大會暨大連大會召開[J];日本醫(yī)學(xué)介紹;2002年10期

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本文編號：318047