本文關(guān)鍵詞：CD25siRNA納米粒抑制大鼠高危角膜移植免疫排斥的實(shí)驗(yàn)研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的探討EntransterTM-CD25siRNA納米粒抑制大鼠高危角膜移植術(shù)后免疫排斥反應(yīng)及延長(zhǎng)角膜植片存活時(shí)間的作用。本實(shí)驗(yàn)分為兩部分：實(shí)驗(yàn)一：探討非病毒載體EntransterTM-CD25siRNA、脂質(zhì)體-CD25siRNA對(duì)正常SD大鼠角膜轉(zhuǎn)染率和轉(zhuǎn)染毒性,篩選最佳轉(zhuǎn)染試劑實(shí)驗(yàn)二：通過(guò)納米載體介導(dǎo)CD25siRNA來(lái)干預(yù)高危角膜移植術(shù)后的大鼠角膜,探討CD25siRNA在角膜移植排斥中的作用方法實(shí)驗(yàn)一：制備EntransterTM-CD25siRNA復(fù)合物(EntransterTM組)、脂質(zhì)體-CD25siRNA復(fù)合物(脂質(zhì)體組)、CD25siRNA (siRNA組)和生理鹽水(對(duì)照組)。將80只正常成年SD大鼠隨機(jī)法分為四組,均選右眼為實(shí)驗(yàn)眼,在裂隙燈下刮除SD大鼠角膜上皮,分別將上述四種轉(zhuǎn)染試劑按照相同劑量點(diǎn)眼于所有模型大鼠眼表,于點(diǎn)眼后12h,24h,3d,7d在裂隙燈下觀察大鼠眼球情況,行熒光顯微鏡檢測(cè)四種轉(zhuǎn)染試劑的轉(zhuǎn)染率,行HE染色、TUNEL染色檢測(cè)轉(zhuǎn)染試劑對(duì)角膜的毒性,行CD11b抗體檢測(cè)角膜對(duì)轉(zhuǎn)染試劑的免疫應(yīng)答。實(shí)驗(yàn)二：以96只SD大鼠為受體,48只Wistar大鼠為供體。受體右眼堿燒傷后14天行穿透性角膜移植手術(shù)。術(shù)后將大鼠隨機(jī)分為4組：A組為陰性對(duì)照組；B組為EntransterTM-control CD25siRNA治療組；C組為EntransterTM-CD25siRNA治療組；D組為二次治療組,除了術(shù)后給予EntransterTM-CD25siRNA點(diǎn)眼外,術(shù)后第7天再次點(diǎn)眼。自術(shù)后第1d起每日在裂隙燈下觀察大鼠角膜情況并對(duì)其排斥情況進(jìn)行評(píng)分。行HE染色檢測(cè)角膜組織病理情況、透射電鏡觀察植片超微結(jié)構(gòu)、免疫組化和熒光定量PCR法檢測(cè)角膜CD25的表達(dá)。結(jié)果實(shí)驗(yàn)一：由熒光顯微鏡檢測(cè)結(jié)果顯示,對(duì)照組實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ蜔o(wú)陽(yáng)性結(jié)果,EntransterTM組熒光表達(dá)數(shù)量及強(qiáng)度高于脂質(zhì)體組,siRNA組熒光表達(dá)早但至24h已完全衰減。HE染色、TUNEL染色、CDllb抗體檢測(cè)結(jié)果顯示脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染試劑引起的角膜炎性反應(yīng)、角膜細(xì)胞凋亡和免疫應(yīng)答明顯強(qiáng)于其余三組。實(shí)驗(yàn)二：C、D兩組角膜植片存活時(shí)間相比A、B兩組明顯延長(zhǎng),差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05)。HE顯示A、B組角膜植片增厚、水腫,膠原纖維排列紊亂,大量炎性細(xì)胞浸潤(rùn)；C、D組植片排斥程度較A、B組明顯減輕。免疫組化顯示CD25分子在各組角膜上皮層、基質(zhì)層、內(nèi)皮層均有表達(dá),A、B組中的表達(dá)明顯多于C、D組。透射電鏡結(jié)果顯示實(shí)驗(yàn)組角膜植片基質(zhì)層成纖維細(xì)胞凋亡與壞死較對(duì)照組減輕,超微結(jié)構(gòu)改變具有明顯差異。A、B兩組角膜植片中CD25 mRNA的表達(dá)明顯高于C、D兩組,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)論1.選用非病毒納米EntransterTM作為載體,轉(zhuǎn)染CD25siRNA于正常SD大鼠角膜,具有轉(zhuǎn)染效率高、低毒性、不引起角膜免疫反應(yīng)的特點(diǎn),為角膜疾病基因治療選擇合適的載體提供了基礎(chǔ)。2. CD25siRNA納米�？蓽p輕角膜移植術(shù)后免疫排斥反應(yīng),有效延長(zhǎng)角膜植片存活時(shí)間。
【關(guān)鍵詞】：角膜移植 移植物排斥 納米結(jié)構(gòu) 白細(xì)胞介素2受體α亞單位
【學(xué)位授予單位】：重慶醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R779.65
【目錄】：

• 英漢縮略語(yǔ)名詞對(duì)照5-6
• 中文摘要6-9
• 英文摘要9-13
• 前言13-15
• 第一部分 Entranster~(TM)納米載體介導(dǎo)CD25siRNA對(duì)大鼠角膜的轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)研究15-23
• 1 材料與方法15-18
• 2 結(jié)果18-20
• 3 討論20-23
• 第二部分 CD25siRNA納米粒在大鼠高危角膜移植免疫排斥反應(yīng)中的研究23-31
• 1 材料與方法23-26
• 2 結(jié)果26-28
• 3 討論28-31
• 全文小結(jié)31-32
• 參考文獻(xiàn)32-35
• 附圖35-41
• 文獻(xiàn)綜述41-47
• 參考文獻(xiàn)44-47
• 致謝47-48
• 攻讀碩士學(xué)位期間發(fā)表的文章48

【相似文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 陳家祺,陳麗芳;治療性角膜移植的系列研究[J];中山醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào);2001年02期

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7 ;西安市_5，

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