研究背景視網(wǎng)膜退行性疾病如年齡相關(guān)性黃斑變性（AMD）和視網(wǎng)膜色素變性（RP）可導(dǎo)致視力損害并最終不可逆性失明。視網(wǎng)膜缺血和光損傷被認(rèn)為是這類疾病的兩大主要原因。光感受器細(xì)胞死亡是視網(wǎng)膜退行性病變的基本病理特征。引起視網(wǎng)膜退行性疾病的機(jī)制可能是復(fù)雜的,涉及多種遺傳和環(huán)境因素。目前雖然已經(jīng)發(fā)現(xiàn)了數(shù)百種致病基因突變,但導(dǎo)致光感受器死亡的確切分子途徑尚不完全清楚。由于視網(wǎng)膜的高氧耗和光敏性,視網(wǎng)膜特別容易發(fā)生氧化應(yīng)激。線粒體對(duì)氧化應(yīng)激具有一定的調(diào)節(jié)能力,但是當(dāng)活性氧（ROS）超過細(xì)胞的抗氧化防御能力時(shí),會(huì)啟動(dòng)程序性細(xì)胞死亡,即凋亡。caspase依賴途徑是經(jīng)典的凋亡途徑,即活化一系列半胱氨酸蛋白水解酶,其可通過線粒體介導(dǎo)的內(nèi)源性途徑激活,也可通過受體介導(dǎo)的外源性途徑激活。除了經(jīng)典的caspase依賴途徑,Parthanatos是一種獨(dú)特的、高度編排的細(xì)胞死亡形式,它通過核酶PARP-1的過度激活而發(fā)生。Parthanatos不需要caspases來(lái)執(zhí)行,而是依賴于PARP-1介導(dǎo)的PAR的積累以及隨后凋亡誘導(dǎo)因子（AIF）的核易位,導(dǎo)致細(xì)胞死亡。白藜蘆醇（RSV）是一種多酚類化合物,在許多植... 

【文章來(lái)源】：吉林大學(xué)吉林省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

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【學(xué)位級(jí)別】：博士

【文章目錄】：
中文摘要
abstract
第1章 緒論
    1.1 視網(wǎng)膜退行性疾病
        1.1.1 概述
        1.1.2 治療方法
    1.2 白藜蘆醇
        1.2.1 概述
        1.2.2 藥理作用
        1.2.3 在眼科疾病中的作用
        1.2.4 目前的局限性和未來(lái)前景
第2章 白藜蘆醇在葡萄糖剝奪和光損傷條件下對(duì)視網(wǎng)膜感光細(xì)胞的影響
    2.1 實(shí)驗(yàn)材料
        2.1.1 視網(wǎng)膜感光細(xì)胞（661W）
        2.1.2 主要試劑
        2.1.3 主要儀器與耗材
        2.1.4 常用溶液配制
    2.2 實(shí)驗(yàn)方法與步驟
        2.2.1 661W的常規(guī)培養(yǎng)
        2.2.2 實(shí)驗(yàn)分組
        2.2.3 MTT檢測(cè)
        2.2.4 細(xì)胞阻抗檢測(cè)
        2.2.5 PI/Hoechst染色
        2.2.6 結(jié)果數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)
    2.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        2.3.1 RSV的計(jì)量-反應(yīng)曲線
        2.3.2 實(shí)時(shí)細(xì)胞阻抗監(jiān)測(cè)不同濃度RSV在兩種不同損傷條件下對(duì)661 W的細(xì)胞活性情況的影響
        2.3.3 RSV在兩種不同損傷條件下對(duì)細(xì)胞凋亡情況的影響
    2.4 討論
第3章 白藜蘆醇在葡萄糖剝奪和光損傷條件下對(duì)氧化應(yīng)激及線粒體的影響
    3.1 實(shí)驗(yàn)材料
        3.1.1 視網(wǎng)膜感光細(xì)胞（661W）
        3.1.2 主要試劑
        3.1.3 主要儀器與耗材
        3.1.4 常規(guī)溶液配制
    3.2 實(shí)驗(yàn)方法與步驟
        3.2.1 661W的常規(guī)培養(yǎng)
        3.2.2 實(shí)驗(yàn)分組
        3.2.3 活性氧（ROS）檢測(cè)
        3.2.4 還原型谷胱甘肽/氧化型谷胱甘肽（GSH/ GSSG）的測(cè)定
        3.2.5 Western blot法檢測(cè)661 W在葡萄糖剝奪和光照條件下RSV對(duì) HO-1 蛋白表達(dá)水平的影響
        3.2.6 線粒體綠色熒光染色
        3.2.7 線粒體膜電位檢測(cè)
        3.2.8 結(jié)果數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)
    3.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        3.3.1 RSV在兩種不同損傷條件下對(duì)細(xì)胞內(nèi)活性氧的影響
        3.3.2 RSV在兩種不同損傷條件下對(duì)還原型谷胱甘肽的影響
        3.3.3 Western blot法檢測(cè)RSV在兩種損傷條件下對(duì)HO-1 蛋白表達(dá)水平的影響
        3.3.4 RSV在兩種不同損傷條件下對(duì)線粒體形態(tài)的影響
        3.3.5 RSV在兩種不同損傷條件下對(duì)線粒體膜電位的影響
    3.4 討論
第4章 白藜蘆醇在葡萄糖剝奪和光損傷條件下對(duì)SIRT1 的影響
    4.1 實(shí)驗(yàn)材料
        4.1.1 視網(wǎng)膜感光細(xì)胞（661W）
        4.1.2 主要試劑
        4.1.3 主要儀器與耗材
        4.1.4 常規(guī)溶液配制
    4.2 實(shí)驗(yàn)方法與步驟
        4.2.1 661W的常規(guī)培養(yǎng)
        4.2.2 實(shí)驗(yàn)分組
        4.2.3 PI/Hoechst染色
        4.2.4 Western blot法檢測(cè)661 W在葡萄糖剝奪和光照條件下RSV對(duì) Sirt1 蛋白表達(dá)水平的影響
        4.2.5 SIRT活性檢測(cè)
        4.2.6 結(jié)果數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)
    4.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        4.3.1 SIRT1 抑制劑在兩種不同損傷條件下對(duì)細(xì)胞凋亡的影響
        4.3.2 Western blot法檢測(cè)RSV在兩種損傷條件下對(duì)SIRT1 蛋白表達(dá)水平的影響
        4.3.3 RSV在兩種損傷條件下對(duì)SIRT1 酶活性的影響
    4.4 討論
第5章 白藜蘆醇對(duì)葡萄糖剝奪和光損傷誘導(dǎo)的細(xì)胞死亡的保護(hù)機(jī)制..
    5.1 實(shí)驗(yàn)材料
        5.1.1 視網(wǎng)膜感光細(xì)胞（661W）
        5.1.2 293T細(xì)胞
        5.1.3 主要試劑
        5.1.4 主要儀器與耗材
        5.1.5 常用溶液配制
    5.2 實(shí)驗(yàn)方法與步驟
        5.2.1 shPARP-1 慢病毒質(zhì)粒的擴(kuò)增
        5.2.2 慢病毒載體包裝
        5.2.3 收集毒液
        5.2.4 慢病毒感染661 W
        5.2.5 PI/Hoechst染色
        5.2.6 Western blot法檢測(cè)661 W在葡萄糖剝奪或光照條件下RSV對(duì)caspase-3、caspase-9、AIF、PARP-1 蛋白表達(dá)水平的影響
        5.2.7 結(jié)果數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)
    5.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        5.3.1 caspase抑制劑在兩種損傷條件下對(duì)細(xì)胞凋亡的影響
        5.3.2 Western Blot法檢測(cè)RSV在兩種損傷條件下對(duì)caspase-3,caspase-9 蛋白表達(dá)水平的影響
        5.3.3 Western Blot法檢測(cè)sh-PARP慢病毒感染661 W后對(duì)PARP-1 蛋白表達(dá)水平的影響
        5.3.4 PARP-1 在兩種不同損傷條件下對(duì)細(xì)胞凋亡的影響
        5.3.5 Western Blot法檢測(cè)在兩種不同損傷條件下對(duì)AIF,PARP-1 蛋白表達(dá)水平的影響
    5.4 討論
第6章 白藜蘆醇在光損傷條件下對(duì)小鼠視網(wǎng)膜的影響
    6.1 實(shí)驗(yàn)材料
        6.1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
        6.1.2 主要試劑
        6.1.3 主要儀器與耗材
        6.1.4 常用溶液配制
    6.2 實(shí)驗(yàn)方法與步驟
        6.2.1 BALB/c57 小鼠的飼養(yǎng)
        6.2.2 實(shí)驗(yàn)分組
        6.2.3 ERG檢測(cè)
        6.2.4 小鼠視網(wǎng)膜組織的HE染色
        6.2.5 Western blot法檢測(cè)各組小鼠視網(wǎng)膜中AIF和 PARP-1的蛋白表達(dá)水平
        6.2.6 結(jié)果數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)
    6.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        6.3.1 RSV在光損傷條件下對(duì)視網(wǎng)膜功能的影響
        6.3.2 RSV在光損傷條件下對(duì)視網(wǎng)膜結(jié)構(gòu)的影響
        6.3.3 Western blot法檢測(cè)RSV在光損傷條件下對(duì)AIF和 PARP-1 蛋白表達(dá)水平的影響
    6.4 討論
第7章 結(jié)論
參考文獻(xiàn)
作者簡(jiǎn)介及在學(xué)期間所取得的科研成果
致謝



本文編號(hào)：3160639