視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤（RB）是兒童中最常見的原發(fā)性眼內(nèi)惡性腫瘤。越來越多的證據(jù)表明在RB中微小RNA（miRNA）通過作用于致癌基因或腫瘤抑制基因來調(diào)節(jié)信號分子。因此,在我們的研究中,我們旨在通過靶向PAX6來研究miR-129-5p在RB細(xì)胞中PI3K/AKT信號傳導(dǎo)途徑的功能。在我們的研究中選擇了兩種RB細(xì)胞系Y79和WERI-Rb-1,然后通過轉(zhuǎn)染miR-129-5p抑制劑或si-PAX6來探索miR-129-5p在RB細(xì)胞增殖,侵襲和遷移的調(diào)節(jié)作用。雙熒光素酶測定分析用于檢測miR-129-5p和PAX6之間的靶向關(guān)系。此外,Western印跡分析用于檢測細(xì)胞周期相關(guān)因子（CDK2和細(xì)胞周期蛋白E）和PI3K/AKT信號通路相關(guān)因子（p-AKT和AKT）的表達(dá)。裸鼠腫瘤發(fā)生實驗用于評估m(xù)iR-129a-5p對體內(nèi)RB生長的影響。miR-129-5p在RB細(xì)胞系中下調(diào)。miR-129-5p直接靶向PAX6的3’-非翻譯區(qū)。人工下調(diào)miR-129-5p促進(jìn)RB細(xì)胞系Y79和WERI-Rb-1的細(xì)胞增殖、遷移和侵襲,并通過PI3K/AKT信號通路促進(jìn)體內(nèi)RB生長,可通過轉(zhuǎn)染沉默的PAX6進(jìn)... 

【文章來源】：吉林大學(xué)吉林省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：124 頁

【學(xué)位級別】：博士

【文章目錄】：
中文摘要
abstract
中英文縮略表
前言
第1章 視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤綜述
    1.1 流行病學(xué)研究
    1.2 生物學(xué)概述
    1.3 預(yù)防、早期檢測和遺傳
    1.4 臨床表現(xiàn)、患者評估和分期
    1.5 治療原則及治療方法
        1.5.1 手術(shù)
        1.5.2 焦點療法
        1.5.3 化療
        1.5.4 放射治療
        1.5.5 眼內(nèi)視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤的治療
        1.5.6 玻璃體內(nèi)和動脈內(nèi)化療
        1.5.7 眼外視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤治療
        1.5.8 視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤的長期療效及治療
    1.6 miR-129-5p基因
    1.7 UHRF1 基因
    1.8 PAX6 基因
        1.8.1 PAX6 基因功能
        1.8.2 物種分布
        1.8.3 PAX6 亞型
        1.8.4 臨床意義
        1.8.5 突變
    1.9 PI3K/AKT信號通路
        1.9.1 AKT信號傳導(dǎo)的簡史
        1.9.2 PI3K/AKT途徑的組成
        1.9.3 PI3K/AKT信號傳導(dǎo)的調(diào)節(jié)
        1.9.4 PI3K/AKT信號傳導(dǎo)的下游
        1.9.5 與腫瘤發(fā)生的關(guān)系
第2章 MicroRNA-129-5p通過靶向PAX6的PI3K/AKT信號通路抑制視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤細(xì)胞的增殖、遷移和侵襲
    2.1 研究背景
    2.2 試劑及設(shè)備
        2.2.1 主要試劑
        2.2.2 自配試劑
        2.2.3 主要儀器設(shè)備
    2.3 材料和方法
        2.3.1 細(xì)胞培養(yǎng)和分組
        2.3.2 穩(wěn)定細(xì)胞株的構(gòu)建
        2.3.3 RNA分離和定量
        2.3.4 蛋白質(zhì)印跡分析
        2.3.5 3 -（4,5-二甲基噻唑-2-基）-2,5-二苯基四氮唑溴化（MTT）分析
        2.3.6 5 -溴-2'-脫氧尿苷（BrdU）摻入測定
        2.3.7 流式細(xì)胞儀術(shù)分析細(xì)胞周期
        2.3.8 Transwell測定
        2.3.9 雙熒光素酶報告基因測定
        2.3.10 動物成瘤實驗
        2.3.11 免疫組化染色
        2.3.12 統(tǒng)計分析
    2.4 結(jié)果
        2.4.1 miR-129-5p在 RB細(xì)胞中低表達(dá)
        2.4.2 PAX6是miR-129-5p的靶基因之一
        2.4.3 miR-129-5p通過抑制PAX6 的表達(dá)抑制RB細(xì)胞的增殖
        2.4.4 miR-129-5p通過PAX6 影響RB細(xì)胞周期
        2.4.5 下調(diào)miR-129-5p通過PAX6 促進(jìn)RB細(xì)胞的侵襲和遷移
        2.4.6 miR-129-5p通過PAX6 調(diào)節(jié)PI3K/AKT信號通路來控制RB細(xì)胞增殖、遷移和侵襲
        2.4.7 下調(diào)的miR-129-5p促進(jìn)體內(nèi)RB腫瘤生長
    2.5 討論
第3章 沉默UHRF1 通過PI3K/Akt信號通路抑制視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤細(xì)胞增殖并促進(jìn)細(xì)胞凋亡
    3.1 研究背景
    3.2 材料和方法
        3.2.1 重組慢病毒載體質(zhì)粒的轉(zhuǎn)染和篩選
            3.2.1.1 質(zhì)粒的轉(zhuǎn)化
            3.2.1.2 質(zhì)粒的提取
            3.2.1.3 乙醇沉淀法提純質(zhì)粒
        3.2.2 細(xì)胞轉(zhuǎn)染和分組
        3.2.3 RNA提取和逆轉(zhuǎn)錄定量聚合酶鏈反應(yīng)（RT-qPCR）
        3.2.4 3 - [4,5-二甲基噻唑-2-YI] -2,5-二苯基四唑溴化物（MTT）測定
        3.2.5 5 -乙炔基-2'-脫氧尿苷（EdU）摻入測定
        3.2.6 流式細(xì)胞術(shù)
        3.2.7 蛋白質(zhì)印跡分析
        3.2.8 腫瘤異種移植實驗
        3.2.9 統(tǒng)計分析
    3.3 結(jié)果
        3.3.1 慢病毒感染效率的測定
        3.3.2 UHRF1-shRNA感染對含有UHRF1的mRNA和蛋白表達(dá)的影響
        3.3.3 沉默UHRF1 抑制WERI-Rb-1 細(xì)胞的增殖
        3.3.4 沉默UHRF1 促進(jìn)WERI-Rb-1 細(xì)胞凋亡
        3.3.5 沉默UHRF1 抑制WERI-Rb-1 細(xì)胞中PI3K/Akt信號通路的表達(dá)
    3.4 討論
結(jié)論
參考文獻(xiàn)
導(dǎo)師簡介
作者簡介
攻讀博士期間所發(fā)論文
致謝


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]Suppressive effect of microRNA-143 in retinoblastoma[J]. Li-Lun Wang,Hai-Feng Hu,Yan-Qin Feng.  International Journal of Ophthalmology. 2016(11)
[2]miR-129在乳腺癌中表達(dá)下調(diào)及其對乳腺癌細(xì)胞遷移運動的影響[J]. 王球玉,唐珺,周佽想,趙倩.  生理學(xué)報. 2012(04)
[3]Epidemiology and Rb 1 gene of retinoblastoma[J]. Jun Yun 1,Yang Li 2,Chang-Tai Xu 3,Bo-Rong Pan 4 1 Department of General Surgery,Xijing Hospital,Fourth Military Medical University,Xi’an 710032,Shaanxi Province,China 2 Department of Anesthesiology,Xijing Hospital,Fourth Military Medical University,Xi’an 710032,Shaanxi Province,China 3 Department of Anatomy and Editorial Office of Chinese Journal of Neuroanatomy,Fourth Military Medical University,Xi’an 710032,Shaanxi Province,China 4 Outpatient Department of Oncology,Institute of Tumour,Fourth Military Medical University,Xi’an 710032,Shaanxi Province,China.  International Journal of Ophthalmology（English Edition）. 2011(01)



本文編號：3147690