發(fā)布時(shí)間：2021-04-10 18:47

　　目的:研究絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶4（mammalian Ste20-like kinase 4,MST4）在角膜上皮細(xì)胞抗煙曲霉菌免疫反應(yīng)中的作用和分子機(jī)制。方法:1、煙曲霉菌感染C57BL/6小鼠角膜,建立小鼠真菌性角膜炎動物模型,觀察感染不同時(shí)間點(diǎn)后小鼠角膜的臨床評分,采用Western blot法檢測正常小鼠角膜和感染12小時(shí)、1天、3天、5天的小鼠角膜中MST4蛋白的表達(dá)。煙曲霉菌菌絲刺激永生化人角膜上皮細(xì)胞,應(yīng)用Western blot法檢測正常和煙曲霉菌刺激12小時(shí)、24小時(shí)的人角膜上皮細(xì)胞中MST4蛋白的表達(dá)。采用免疫熒光染色檢測正常小鼠角膜和感染3天的小鼠角膜中MST4表達(dá)及定位。2、給予不同濃度外源性的MST4重組蛋白（2、5、10ng/ml）預(yù)處理人角膜上皮細(xì)胞2小時(shí)后,煙曲霉菌刺激人角膜上皮細(xì)胞12小時(shí)和24小時(shí),采用PCR法和ELISA法檢測各組人角膜上皮細(xì)胞中IL-1β、IL-6和IL-8 m RNA和蛋白的表達(dá)。3、給予Dectin-1配體凝膠多糖（Curdlan）或Dectin-1抑制劑昆布多糖（Laminarin）預(yù)處理人角膜上皮細(xì)胞10小時(shí)后,煙曲霉菌... 

【文章來源】：青島大學(xué)山東省

【文章頁數(shù)】：50 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

MST4抑制煙曲霉菌感染的角膜上皮細(xì)胞中促炎細(xì)胞因子的產(chǎn)生；不同濃度的MST4重組蛋白（2、5、10ng/mL）預(yù)處理人角膜上皮細(xì)胞2小時(shí)后，煙曲霉菌刺激細(xì)胞12小時(shí)或24小時(shí)

圖 3 煙曲霉菌通過 Dectin-1 誘導(dǎo)角膜上皮細(xì)胞產(chǎn)生 MST4；Laminarin（300μg/mL）或 Curdlan（200μg/mL）預(yù)處理人角膜上皮細(xì)胞 10 小時(shí)后，加入煙曲霉刺激細(xì)胞 24 小時(shí)。通過 Western blot 檢測細(xì)胞中 MST4 的蛋白表達(dá)（A，B）。（* p <0.05，** p <0.01，*** p <0.001）。

圖 4 MST4 抑制 Dectin-1 介導(dǎo)的促炎細(xì)胞因子產(chǎn)生；不同濃度的 MST4 重組蛋白（2、5、10ng/mL）預(yù)處理人角膜上皮細(xì)胞 2 小時(shí)后，Curdlan 刺激（200μg/mL）人角膜上皮細(xì)胞 12 小時(shí)或 24 小時(shí)。不同濃度的 MST4 重組蛋白（2、5ng/mL）預(yù)處理 RAW264.7 細(xì)胞 2 小時(shí)后，Curdlan（100μg/mL）刺激RAW264.7 細(xì)胞 8 小時(shí)。通過 RT-PCR（A，C，E）和 ELISA（B，D，F(xiàn)）檢測人角膜上皮細(xì)胞中 IL-1β、IL-6 和 IL-8 的 mRNA 和蛋白質(zhì)水平。通過 RT-PCR（G，H）檢測 RAW264.7 細(xì)胞中 IL-1β 和 IL-6 的 mRNA 水平。（* p <0.05，** p <0.01，*** p<0.001）。

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]固有免疫相關(guān)模式識別受體研究進(jìn)展[J]. 何邵平,賀建華,陳佳億,陳福,歐淑琦.  動物營養(yǎng)學(xué)報(bào). 2017(11)
[2]Hippo信號通路結(jié)構(gòu)生物學(xué)研究進(jìn)展[J]. 胡立橋,周兆才,田偉.  遺傳. 2017(07)
[3]腫瘤壞死因子受體相關(guān)因子6、絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶4在未足月胎膜早破合并絨毛膜羊膜炎發(fā)病中的機(jī)制[J]. 陳丹丹,盧丹.  中華臨床醫(yī)師雜志(電子版). 2016(21)
[4]Dectin-1 agonist curdlan modulates innate immunity to Aspergillus fumigatus in human corneal epithelial cells[J]. Cheng-Cheng Zhu,Gui-Qiu Zhao,Jing Lin,Li-Ting Hu,Qiang Xu,Xu-Dong Peng,Xue Wang,Sheng Qiu.  International Journal of Ophthalmology. 2015(04)
[5]Inhibitory Effects of Parthenolide on the Activity of NF-κB in Multiple Myeloma via Targeting TRAF6[J]. 孔繁聰,張靜瓊,曾辰,陳文蘭,任文翔,閆國鑫,王紅祥,李秋柏,陳智超.  Journal of Huazhong University of Science and Technology（Medical Sciences）. 2015(03)
[6]Dectin-1 expression at early period of Aspergillus fumigatus infection in rat’s corneal epithelium[J]. Cheng-Ye Che,Cui Li,Ang Gao,Jing Lin,Li-Li Zhang,Qiang Xu,Qian Wang,Gui-Qiu Zhao.  International Journal of Ophthalmology（English Edition）. 2013(01)
[7]真菌性角膜炎免疫機(jī)制研究進(jìn)展[J]. 李娜,趙桂秋.  中華眼科雜志. 2011 (04)



本文編號：3130152