目的X射線照射腫瘤細(xì)胞后能否引起其產(chǎn)生多藥耐藥性（multidrug resistance,MDR）,以及尋找相關(guān)的關(guān)鍵分子并探明其作用機(jī)制是國(guó)內(nèi)外研究的熱點(diǎn)和重點(diǎn)。我們前期實(shí)驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn)人類(lèi)血小板內(nèi)皮細(xì)胞黏附因子-1（platelet endothelial cell adhesion molecule-1, PEC AM-1）與X射線輻射誘導(dǎo)的人鼻咽鱗癌耐藥細(xì)胞CNE1/R中MDR的形成相關(guān)。我們通過(guò)穩(wěn)定干擾CNE1/R中PECAM-1的表達(dá),檢測(cè)干擾后MDR-1表達(dá)水平的變化,探討PECAM-1和MDR-1的關(guān)系。方法采用RNA干擾（RNA interference, RNAi）技術(shù),設(shè)計(jì)PEC AM-1的siRNA片段,克隆至質(zhì)粒pSilencer2.1中,構(gòu)建重組質(zhì)粒pSilencer2.1-PECAM-1;采用脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染法將空質(zhì)粒pSilencer2.1和重組質(zhì)粒pSilencer2.1-PECAM-1分別轉(zhuǎn)染入CNE1/R中,分別為對(duì)照組和實(shí)驗(yàn)組；采用G418篩選轉(zhuǎn)染細(xì)胞,挑取細(xì)胞單克隆擴(kuò)大培養(yǎng),從而獲得單克隆細(xì)胞系PSilencer2.1/CNE1/R和pSilencer... 

【文章來(lái)源】：大連大學(xué)遼寧省

【文章頁(yè)數(shù)】：44 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
引言
第一部分 重組質(zhì)粒pSilencer2.1-PECAM-1的構(gòu)建及細(xì)胞轉(zhuǎn)染
    1 實(shí)驗(yàn)材料和方法
        1.1 實(shí)驗(yàn)材料
        1.2 重組質(zhì)粒的構(gòu)建
            1.2.1 PECAM-1的siRNA序列的設(shè)計(jì)與合成
            1.2.2 PECAM-1的siRNA片段克隆至pSilencer2.1載體
            1.2.3 重組質(zhì)粒pSilencer2.1-PECAM-1的大量提取及純化
        1.3 細(xì)胞轉(zhuǎn)染
            1.3.1 細(xì)胞的復(fù)蘇與培養(yǎng)
            1.3.2 細(xì)胞轉(zhuǎn)染
            1.3.3 G418篩選單克隆細(xì)胞
    2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
第二部分 穩(wěn)定干擾CNE1/R中PECAM-1后其表達(dá)的檢測(cè)
    1 實(shí)驗(yàn)材料與方法
        1.1 實(shí)驗(yàn)材料
        1.2 干擾PECAM-1后Real Time PCR檢測(cè)其表達(dá)
            1.2.1 細(xì)胞RNA的提取與質(zhì)量檢測(cè)
            1.2.2 逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)
            1.2.3 Real Time PCR反應(yīng)
        1.3 干擾PECAM-1后Western blot檢測(cè)其表達(dá)
            1.3.1 細(xì)胞總蛋白的提取和定量
            1.3.2 Western blot
    2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
第三部分 干擾CNE1/R中PECAM-1后檢測(cè)MDR-1表達(dá)
    1 實(shí)驗(yàn)材料和方法
        1.1 實(shí)驗(yàn)材料
        1.2 干擾PECAM-1后Real time PCR檢測(cè)MDR-1表達(dá)
            1.2.1 細(xì)胞RNA的提取與質(zhì)量檢測(cè)
            1.2.2 逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)
            1.2.3 Real Time PCR反應(yīng)
        1.3 干擾PECAM-1后Western blot檢測(cè)MDR-1表達(dá)
            1.3.1 細(xì)胞總蛋白的提取和定量
            1.3.2 Western blot
    2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
討論
結(jié)論
參考文獻(xiàn)
文獻(xiàn)綜述
    參考文獻(xiàn)
攻讀碩士學(xué)位期間發(fā)表學(xué)術(shù)論文情況
致謝


【參考文獻(xiàn)】：
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