目的X射線照射腫瘤細胞后能否引起其產(chǎn)生多藥耐藥性（multidrug resistance,MDR）,以及尋找相關的關鍵分子并探明其作用機制是國內(nèi)外研究的熱點和重點。我們前期實驗研究發(fā)現(xiàn)人類血小板內(nèi)皮細胞黏附因子-1（platelet endothelial cell adhesion molecule-1, PEC AM-1）與X射線輻射誘導的人鼻咽鱗癌耐藥細胞CNE1/R中MDR的形成相關。我們通過穩(wěn)定干擾CNE1/R中PECAM-1的表達,檢測干擾后MDR-1表達水平的變化,探討PECAM-1和MDR-1的關系。方法采用RNA干擾（RNA interference, RNAi）技術,設計PEC AM-1的siRNA片段,克隆至質(zhì)粒pSilencer2.1中,構建重組質(zhì)粒pSilencer2.1-PECAM-1;采用脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染法將空質(zhì)粒pSilencer2.1和重組質(zhì)粒pSilencer2.1-PECAM-1分別轉(zhuǎn)染入CNE1/R中,分別為對照組和實驗組；采用G418篩選轉(zhuǎn)染細胞,挑取細胞單克隆擴大培養(yǎng),從而獲得單克隆細胞系PSilencer2.1/CNE1/R和pSilencer... 

【文章來源】：大連大學遼寧省

【文章頁數(shù)】：44 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
引言
第一部分 重組質(zhì)粒pSilencer2.1-PECAM-1的構建及細胞轉(zhuǎn)染
    1 實驗材料和方法
        1.1 實驗材料
        1.2 重組質(zhì)粒的構建
            1.2.1 PECAM-1的siRNA序列的設計與合成
            1.2.2 PECAM-1的siRNA片段克隆至pSilencer2.1載體
            1.2.3 重組質(zhì)粒pSilencer2.1-PECAM-1的大量提取及純化
        1.3 細胞轉(zhuǎn)染
            1.3.1 細胞的復蘇與培養(yǎng)
            1.3.2 細胞轉(zhuǎn)染
            1.3.3 G418篩選單克隆細胞
    2 實驗結(jié)果
第二部分 穩(wěn)定干擾CNE1/R中PECAM-1后其表達的檢測
    1 實驗材料與方法
        1.1 實驗材料
        1.2 干擾PECAM-1后Real Time PCR檢測其表達
            1.2.1 細胞RNA的提取與質(zhì)量檢測
            1.2.2 逆轉(zhuǎn)錄反應
            1.2.3 Real Time PCR反應
        1.3 干擾PECAM-1后Western blot檢測其表達
            1.3.1 細胞總蛋白的提取和定量
            1.3.2 Western blot
    2 實驗結(jié)果
第三部分 干擾CNE1/R中PECAM-1后檢測MDR-1表達
    1 實驗材料和方法
        1.1 實驗材料
        1.2 干擾PECAM-1后Real time PCR檢測MDR-1表達
            1.2.1 細胞RNA的提取與質(zhì)量檢測
            1.2.2 逆轉(zhuǎn)錄反應
            1.2.3 Real Time PCR反應
        1.3 干擾PECAM-1后Western blot檢測MDR-1表達
            1.3.1 細胞總蛋白的提取和定量
            1.3.2 Western blot
    2 實驗結(jié)果
討論
結(jié)論
參考文獻
文獻綜述
    參考文獻
攻讀碩士學位期間發(fā)表學術論文情況
致謝


【參考文獻】：
期刊論文
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本文編號：3044748