Gαi介導(dǎo)MYDGF（骨髓源性生長(zhǎng)因子）信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)促血管新生作用的研究
發(fā)布時(shí)間：2021-02-20 14:40
多種眼部疾病的重要的致病原因?yàn)檠蹆?nèi)病理性新生血管生成,抑制病理性新生血管生成是一個(gè)有效的治療眼部諸多病理性新生血管性疾病的方法。與血管生成關(guān)系密切的細(xì)胞生長(zhǎng)因子例如血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子（VEGF）、表皮生長(zhǎng)因子（EGF）等都有促進(jìn)血管內(nèi)皮細(xì)胞增殖并促進(jìn)病理性新生血管進(jìn)展的作用。尋找途徑抑制這些生長(zhǎng)因子的作用就可以在一定程度上有效地減緩病理性新生血管的發(fā)展。我們課題組以往的研究結(jié)果發(fā)現(xiàn),Gαi蛋白在血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子（VEGF）、表皮生長(zhǎng)因子（EGF）等細(xì)胞因子活化下游AKT-mTOR和MAPK/ERK等信號(hào)通路中發(fā)揮重要作用。MYDGF是骨髓源性的血管生長(zhǎng)因子,既往研究已經(jīng)證實(shí)其在機(jī)體各組織器官中都有不同程度的表達(dá),并且有較強(qiáng)的促進(jìn)血管內(nèi)皮細(xì)胞增殖和存活的作用,本課題主要探討Gαi是否在MYDGF介導(dǎo)的新生血管形成過(guò)程中發(fā)揮著重要作用,希望能為治療眼內(nèi)病理性新生血管性疾病提供一個(gè)新的思路。研究目的?解析Gαi介導(dǎo)MYDGF信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)的分子機(jī)制;?明確MYDGF及Gαi表達(dá)量對(duì)于血管生成的作用。研究方法?培養(yǎng)野生型小鼠胚胎成纖維細(xì)胞（WT-MEFs）,Gαi1和Gαi3雙敲除的小鼠胚胎成纖維細(xì)胞...
【文章來(lái)源】：南京醫(yī)科大學(xué)江蘇省
【文章頁(yè)數(shù)】：74 頁(yè)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【部分圖文】：
在MEFs中，雙敲Gαi1和Gαi3蛋白會(huì)導(dǎo)致MYDGF介導(dǎo)的下游AKT-mTOR及MAPK/ERK信號(hào)通路活化水平明顯降低甚至缺失
南京醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文組相比，用 MYDGF 處理單一敲除 Gαi1 的 MEFs（Gαi1KO-MEFs）或單一敲除Gαi3 的 MEFs（Gαi3KO-MEFs）后 AKT-mTOR 和 MAPK/ERK 信號(hào)通路中的標(biāo)志性蛋白（即 Akt、Gsk3α3β、S6、S6K、Erk）的磷酸化水平均出現(xiàn)不同程度降低。而雙敲 Gαi1 和 Gαi3 的 MEFs（DKO-MEFs）組的上述標(biāo)志性蛋白的磷酸化水平明顯降低并出現(xiàn)部分缺失表現(xiàn)，在與之前的實(shí)驗(yàn)結(jié)果是一致的。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明：在 MEFs 中，單一敲除 Gαi1 或 Gαi3 蛋白可以部分抑制MYDGF 介導(dǎo)的下游 AKT-mTOR 及 MAPK/ERK 通路的活化。
MAPK/ERK 信號(hào)通路中發(fā)揮何種作用，我們利用野生型小鼠胚胎成纖維細(xì)胞（WT-MEFs）和敲除 WT-MEFs 中的 Gαi2 蛋白而獲得的 Gαi2KO-MEFs 細(xì)胞株作為細(xì)胞模型以進(jìn)行接下來(lái)的實(shí)驗(yàn)。用指定濃度（25ng/ml）的 MYDGF 處理上述兩種細(xì)胞不同時(shí)長(zhǎng)（0、5、10、20 min），收集處理后的細(xì)胞蛋白，運(yùn)用 WesternBlot 法檢測(cè)在不同作用時(shí)間下， 25 ng/ml 的 MYDGF 對(duì)于 WT-MEFs 和Gαi2KO-MEFs 中 AKT-mTOR 和 MAPK/ERK 信號(hào)通路活化相關(guān)的標(biāo)志性蛋白（Akt-S473、S6、Erk）的磷酸化水平以明確 Gαi2 蛋白在 MYDGF 介導(dǎo)的AKT-mTOR 和 MAPK/ERK 信號(hào)通路活化中的作用。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示：相對(duì)于對(duì)照組（WT-MEFs），Gαi2 蛋白敲除的小鼠胚胎成纖維細(xì)胞實(shí)驗(yàn)組中 p- Akt-S473、p- S6 和 p- Erk 的水平并未見明顯波動(dòng)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明：在 MEFs 中，單一敲除 Gαi2 蛋白對(duì) MYDGF 介導(dǎo)的下游AKT-mTOR 及 MAPK/ERK 信號(hào)通路活化沒(méi)有明顯影響。
【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]Role of stromal cell-derived factor 1α pathway in bone metastatic prostate cancer[J]. Nisha Gupta,Dan G.Duda. The Journal of Biomedical Research. 2016(03)
本文編號(hào)：3042914
【文章來(lái)源】：南京醫(yī)科大學(xué)江蘇省
【文章頁(yè)數(shù)】：74 頁(yè)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【部分圖文】：
在MEFs中，雙敲Gαi1和Gαi3蛋白會(huì)導(dǎo)致MYDGF介導(dǎo)的下游AKT-mTOR及MAPK/ERK信號(hào)通路活化水平明顯降低甚至缺失
南京醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文組相比，用 MYDGF 處理單一敲除 Gαi1 的 MEFs（Gαi1KO-MEFs）或單一敲除Gαi3 的 MEFs（Gαi3KO-MEFs）后 AKT-mTOR 和 MAPK/ERK 信號(hào)通路中的標(biāo)志性蛋白（即 Akt、Gsk3α3β、S6、S6K、Erk）的磷酸化水平均出現(xiàn)不同程度降低。而雙敲 Gαi1 和 Gαi3 的 MEFs（DKO-MEFs）組的上述標(biāo)志性蛋白的磷酸化水平明顯降低并出現(xiàn)部分缺失表現(xiàn)，在與之前的實(shí)驗(yàn)結(jié)果是一致的。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明：在 MEFs 中，單一敲除 Gαi1 或 Gαi3 蛋白可以部分抑制MYDGF 介導(dǎo)的下游 AKT-mTOR 及 MAPK/ERK 通路的活化。
MAPK/ERK 信號(hào)通路中發(fā)揮何種作用，我們利用野生型小鼠胚胎成纖維細(xì)胞（WT-MEFs）和敲除 WT-MEFs 中的 Gαi2 蛋白而獲得的 Gαi2KO-MEFs 細(xì)胞株作為細(xì)胞模型以進(jìn)行接下來(lái)的實(shí)驗(yàn)。用指定濃度（25ng/ml）的 MYDGF 處理上述兩種細(xì)胞不同時(shí)長(zhǎng)（0、5、10、20 min），收集處理后的細(xì)胞蛋白，運(yùn)用 WesternBlot 法檢測(cè)在不同作用時(shí)間下， 25 ng/ml 的 MYDGF 對(duì)于 WT-MEFs 和Gαi2KO-MEFs 中 AKT-mTOR 和 MAPK/ERK 信號(hào)通路活化相關(guān)的標(biāo)志性蛋白（Akt-S473、S6、Erk）的磷酸化水平以明確 Gαi2 蛋白在 MYDGF 介導(dǎo)的AKT-mTOR 和 MAPK/ERK 信號(hào)通路活化中的作用。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示：相對(duì)于對(duì)照組（WT-MEFs），Gαi2 蛋白敲除的小鼠胚胎成纖維細(xì)胞實(shí)驗(yàn)組中 p- Akt-S473、p- S6 和 p- Erk 的水平并未見明顯波動(dòng)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明：在 MEFs 中，單一敲除 Gαi2 蛋白對(duì) MYDGF 介導(dǎo)的下游AKT-mTOR 及 MAPK/ERK 信號(hào)通路活化沒(méi)有明顯影響。
【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]Role of stromal cell-derived factor 1α pathway in bone metastatic prostate cancer[J]. Nisha Gupta,Dan G.Duda. The Journal of Biomedical Research. 2016(03)
本文編號(hào)：3042914
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