本文關(guān)鍵詞：RNA干擾NF-κB p65、STAT3基因增強尼妥珠單抗在下咽癌FaDu細(xì)胞的抗腫瘤活性研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：背景頭頸鱗癌(head and neck squamous cell carcinoma, HNSCC)的發(fā)生、發(fā)展是多種抑癌基因異常,同時伴隨多條增殖相關(guān)的分子通路持續(xù)性激活的過程。其中研究最多的是表皮生長因子受體(epidermal growth factor receptor, EGFR)通路,并且EGFR的高表達與疾病的預(yù)后呈負(fù)相關(guān)。EGFR的靶向治療或?qū)嶒炑芯恐饕校簡慰寺】贵w和小分子酪氨酸激酶抑制劑。盡管EGFR的靶向治療提高了進展期以及復(fù)發(fā)腫瘤的生存期,但這部分病人的治療效果仍然很差。EGFR靶向治療耐藥性機制尚未完全明確,然而下游分子信號通路過度激活可能是耐藥機制之一。我們試圖通過聯(lián)合阻斷下游的NF-κB以及STAT-3,進一步促進EGFR單克隆抗體尼妥珠誘導(dǎo)的下咽癌Fadu細(xì)胞系細(xì)胞凋亡,抑制細(xì)胞增殖。目的探究聯(lián)合抑制NF-κB p65, STAT-3基因的表達增強尼妥珠單抗對下咽癌Fadu田胞系增殖的抑制作用,促進細(xì)胞凋亡。方法1向Fadu田胞中加入尼妥珠單抗：Oug/mL,50 ug/mL, ug/mL,100 ug/mL, 200ug/mL,72小時后蛋白免疫印跡法檢測EGFR, NF-κB p65, STAT-3的表達。針對NF-κB p65和STAT-3基因分別篩選4條擬干擾靶點,分別構(gòu)建這兩種基因的shRNA真核表達載體,以及一條不針對任何序列的陰性對照表達載體shRNA NC。利用脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染shRNA至293T細(xì)胞,篩選出具有干擾效果的真核表達載體。2將篩選出的質(zhì)粒分為5組：①脂質(zhì)體(1 ug/mL)+shRNA p65;②脂質(zhì)體(1 ug/mL)+shRNA STAT-3; ③脂質(zhì)體(1 ug/mL)+shRNA p65、STAT-3;④脂質(zhì)體(1 ug/mL)+shRNANC;⑤shRNA p65、STAT-3+尼妥珠單抗(100ug/mL)。轉(zhuǎn)染48小時后蛋白免疫印跡法檢測EGFR,NF-κB P65、STAT-3蛋白的表達,于轉(zhuǎn)染48,72,96小時后檢測細(xì)胞增殖、細(xì)胞凋亡和細(xì)胞周期。結(jié)果1加入尼妥珠單抗后Fadu細(xì)胞系EGFR的表達下降,同時NF-κB p65、 STAT-3的表達明顯增加,并且呈劑量依賴型。成功構(gòu)建重組質(zhì)粒表達載體pGPU6/GFP/Hygro-p65、pGPU6/GFP/Neo-STAT-3以及pGPU6/GFP/Hygro-NC, NF-κB p65、STAT-3與對照組mRNA相比,分別下降至53.2%和47.4%。。2 NF-κB p65、STAT-3靶向shRNA轉(zhuǎn)染后顯著降低了相應(yīng)蛋白的表達(p0.05)。同時干擾NF-κB p65、STAT-3基因表達組較單獨組均更加顯著抑制了FaDu細(xì)胞增殖促進了凋亡(p0.01)。與聯(lián)合干擾組相比,加入尼妥珠單抗后較進一步促進凋亡(p0.01)。結(jié)論同時干擾基因?qū)aDu細(xì)胞生長有顯著抑制作用,提示NF-κB p65、 STAT-3可能作為下咽癌基因治療的聯(lián)合藥物靶點,并且增強了尼妥珠單抗的抗腫瘤活性。
【關(guān)鍵詞】：頭頸鱗癌 下咽癌 NF-κB p65 STAT-3
【學(xué)位授予單位】：中國人民解放軍醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R739.91;R739.63
【目錄】：

• 英文縮略詞表6-7
• 中文摘要7-9
• 英文摘要9-11
• 前言11-13
• 材料與方法13-27
• 結(jié)果27-39
• 討論39-42
• 結(jié)論42-43
• 參考文獻43-47
• 綜述47-57
• 參考文獻52-57
• 攻讀學(xué)位期間發(fā)表文章情況57-58
• 個人簡介58-59
• 致謝59

【共引文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前7條

1 郭丹;李龍承;;從人到線蟲的RNAa現(xiàn)象[J];科學(xué)通報;2014年30期

2 周興文;李紀(jì)元;朱宇林;孫迎坤;;金花茶CnCHS基因原核表達載體的構(gòu)建及表達分析[J];河南農(nóng)業(yè)科學(xué);2014年11期

3 宋琦;李曉明;;頭頸鱗癌表皮生長因子受體靶向治療抵抗機制的研究進展[J];臨床耳鼻咽喉頭頸外科雜志;2015年02期

4 周興文;李紀(jì)元;朱宇林;;金花茶查爾酮合成酶基因CnCHS的克隆及遺傳轉(zhuǎn)化研究[J];植物研究;2015年03期

5 蔡潔明;舒?zhèn)骼^;楊偉民;褚燭天;;miRNA-31和STAT-3在舌鱗狀細(xì)胞癌中的表達及臨床意義[J];口腔醫(yī)學(xué)研究;2015年08期

6 買熱艷木·艾爾肯;熱沙來提·阿不都瓦衣特;王巖蛟;依馬木·買買提明;日斯拉特·艾力木;斯坎德爾·白克力;;STAT3、Cyclin D1在大鼠肝癌組織中的表達變化及意義[J];山東醫(yī)藥;2014年24期

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中國重要會議論文全文數(shù)據(jù)庫 前3條

1 飛翔;唐曉杰;丁惠強;鎖志剛;樊濤;;JAK/STAT信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路在大鼠急性脊髓損傷中的異常激活及意義[A];寧夏醫(yī)學(xué)會骨科分會第七屆學(xué)術(shù)年會論文匯編[C];2012年

2 飛翔;唐曉杰;丁惠強;鎖志剛;樊濤;;JAK/STAT信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路在大鼠急性脊髓損傷中的異常激活及意義[A];第三屆全國脊髓損傷治療與康復(fù)研討會論文集[C];2012年

3 飛翔;唐曉杰;丁惠強;鎖志剛;樊濤;;JAK2/STAT3信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路在大鼠急性脊髓損傷中對細(xì)胞凋亡的調(diào)控作用[A];第三屆全國脊髓損傷治療與康復(fù)研討會論文集[C];2012年

中國博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前2條

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中國碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

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4 李日輝;浸染法RNAi調(diào)控蘿卜過氧化物酶基因rsprx1表達的初步研究[D];河南師范大學(xué);2013年

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6 李寅;Ets-1與STAT6在食管病變組織中的表達及其臨床意義[D];新鄉(xiāng)醫(yī)學(xué)院;2013年

7 童丹;IL-17、IL-6、COX-2和TGF-β1在宮頸上皮內(nèi)瘤變和宮頸癌中的表達及意義[D];天津醫(yī)科大學(xué);2014年

8 彭慧;STAT3持續(xù)激活抵抗吉非替尼的作用及機制研究[D];中國海洋大學(xué);2014年

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10 李繼東;干擾素誘導(dǎo)蛋白Nmi改變小泛素樣修飾蛋白（SUMO）連接酶UBE2I的核定位[D];暨南大學(xué);2013年

  本文關(guān)鍵詞：RNA干擾NF-κB p65、STAT3基因增強尼妥珠單抗在下咽癌FaDu細(xì)胞的抗腫瘤活性研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：298047