本文關(guān)鍵詞：RNA干擾NF-κB p65、STAT3基因增強(qiáng)尼妥珠單抗在下咽癌FaDu細(xì)胞的抗腫瘤活性研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：背景頭頸鱗癌(head and neck squamous cell carcinoma, HNSCC)的發(fā)生、發(fā)展是多種抑癌基因異常,同時(shí)伴隨多條增殖相關(guān)的分子通路持續(xù)性激活的過(guò)程。其中研究最多的是表皮生長(zhǎng)因子受體(epidermal growth factor receptor, EGFR)通路,并且EGFR的高表達(dá)與疾病的預(yù)后呈負(fù)相關(guān)。EGFR的靶向治療或?qū)嶒?yàn)研究主要有：?jiǎn)慰寺】贵w和小分子酪氨酸激酶抑制劑。盡管EGFR的靶向治療提高了進(jìn)展期以及復(fù)發(fā)腫瘤的生存期,但這部分病人的治療效果仍然很差。EGFR靶向治療耐藥性機(jī)制尚未完全明確,然而下游分子信號(hào)通路過(guò)度激活可能是耐藥機(jī)制之一。我們?cè)噲D通過(guò)聯(lián)合阻斷下游的NF-κB以及STAT-3,進(jìn)一步促進(jìn)EGFR單克隆抗體尼妥珠誘導(dǎo)的下咽癌Fadu細(xì)胞系細(xì)胞凋亡,抑制細(xì)胞增殖。目的探究聯(lián)合抑制NF-κB p65, STAT-3基因的表達(dá)增強(qiáng)尼妥珠單抗對(duì)下咽癌Fadu田胞系增殖的抑制作用,促進(jìn)細(xì)胞凋亡。方法1向Fadu田胞中加入尼妥珠單抗：Oug/mL,50 ug/mL, ug/mL,100 ug/mL, 200ug/mL,72小時(shí)后蛋白免疫印跡法檢測(cè)EGFR, NF-κB p65, STAT-3的表達(dá)。針對(duì)NF-κB p65和STAT-3基因分別篩選4條擬干擾靶點(diǎn),分別構(gòu)建這兩種基因的shRNA真核表達(dá)載體,以及一條不針對(duì)任何序列的陰性對(duì)照表達(dá)載體shRNA NC。利用脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染shRNA至293T細(xì)胞,篩選出具有干擾效果的真核表達(dá)載體。2將篩選出的質(zhì)粒分為5組：①脂質(zhì)體(1 ug/mL)+shRNA p65;②脂質(zhì)體(1 ug/mL)+shRNA STAT-3; ③脂質(zhì)體(1 ug/mL)+shRNA p65、STAT-3;④脂質(zhì)體(1 ug/mL)+shRNANC;⑤shRNA p65、STAT-3+尼妥珠單抗(100ug/mL)。轉(zhuǎn)染48小時(shí)后蛋白免疫印跡法檢測(cè)EGFR,NF-κB P65、STAT-3蛋白的表達(dá),于轉(zhuǎn)染48,72,96小時(shí)后檢測(cè)細(xì)胞增殖、細(xì)胞凋亡和細(xì)胞周期。結(jié)果1加入尼妥珠單抗后Fadu細(xì)胞系EGFR的表達(dá)下降,同時(shí)NF-κB p65、 STAT-3的表達(dá)明顯增加,并且呈劑量依賴型。成功構(gòu)建重組質(zhì)粒表達(dá)載體pGPU6/GFP/Hygro-p65、pGPU6/GFP/Neo-STAT-3以及pGPU6/GFP/Hygro-NC, NF-κB p65、STAT-3與對(duì)照組mRNA相比,分別下降至53.2%和47.4%。。2 NF-κB p65、STAT-3靶向shRNA轉(zhuǎn)染后顯著降低了相應(yīng)蛋白的表達(dá)(p0.05)。同時(shí)干擾NF-κB p65、STAT-3基因表達(dá)組較單獨(dú)組均更加顯著抑制了FaDu細(xì)胞增殖促進(jìn)了凋亡(p0.01)。與聯(lián)合干擾組相比,加入尼妥珠單抗后較進(jìn)一步促進(jìn)凋亡(p0.01)。結(jié)論同時(shí)干擾基因?qū)aDu細(xì)胞生長(zhǎng)有顯著抑制作用,提示NF-κB p65、 STAT-3可能作為下咽癌基因治療的聯(lián)合藥物靶點(diǎn),并且增強(qiáng)了尼妥珠單抗的抗腫瘤活性。
【關(guān)鍵詞】：頭頸鱗癌 下咽癌 NF-κB p65 STAT-3
【學(xué)位授予單位】：中國(guó)人民解放軍醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R739.91;R739.63
【目錄】：

• 英文縮略詞表6-7
• 中文摘要7-9
• 英文摘要9-11
• 前言11-13
• 材料與方法13-27
• 結(jié)果27-39
• 討論39-42
• 結(jié)論42-43
• 參考文獻(xiàn)43-47
• 綜述47-57
• 參考文獻(xiàn)52-57
• 攻讀學(xué)位期間發(fā)表文章情況57-58
• 個(gè)人簡(jiǎn)介58-59
• 致謝59

【共引文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前7條

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中國(guó)博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前2條

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中國(guó)碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

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  本文關(guān)鍵詞：RNA干擾NF-κB p65、STAT3基因增強(qiáng)尼妥珠單抗在下咽癌FaDu細(xì)胞的抗腫瘤活性研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號(hào)：298047