機(jī)械敏感離子通道Piezo調(diào)控眼壓和房水循環(huán)的實(shí)驗(yàn)研究
發(fā)布時(shí)間：2020-12-28 02:34
青光眼是以特征性視神經(jīng)萎縮、視野缺損及視力下降為共同特征的眼科疾病。持續(xù)性眼壓升高是明確的青光眼發(fā)病的危險(xiǎn)因素之一,因此,控制眼壓是青光眼治療的主要手段。穩(wěn)定的眼內(nèi)壓主要取決于房水產(chǎn)生與外排速率間的平衡。由內(nèi)部色素上皮層和外部非色素上皮層組成的睫狀體上皮負(fù)責(zé)房水的產(chǎn)生,小梁網(wǎng)-Schlemm管通路和葡萄膜鞏膜通路主要負(fù)責(zé)房水的外排。但是,由于房水產(chǎn)生和外排調(diào)節(jié)的復(fù)雜性,目前沒有有效的方法來治療升高的眼壓。先前的研究表明,TRPV4和TREK-1通道,作為一種重要的機(jī)械感壓力受器,在小梁網(wǎng)細(xì)胞和非色素上皮細(xì)胞表達(dá)并且在調(diào)控房水產(chǎn)生和外排中發(fā)揮重要的作用。這提示我們機(jī)械敏感性離子通道發(fā)揮重要的調(diào)節(jié)眼壓的生理和病理學(xué)作用。作為一種新型的機(jī)械敏感通道,盡管Piezo通道近年來已被報(bào)道在不同組織器官的機(jī)械轉(zhuǎn)導(dǎo)和功能維持方面發(fā)揮著至關(guān)重要的作用。但是Piezo是否在房水產(chǎn)生和外排通路上有明確的表達(dá),以及在調(diào)控眼壓和房水循環(huán)方面發(fā)揮怎樣的功能目前仍然不清楚。目的:本研究旨在探究機(jī)械敏感離子通道Piezo1和Piezo2在房水循環(huán)通路的表達(dá),以及Piezo通道對(duì)于眼壓和房水循環(huán)的影響。方法:利用免疫熒...
【文章來源】：青島大學(xué)山東省
【文章頁數(shù)】：63 頁
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【部分圖文】：
人源小梁網(wǎng)組織Piezo免疫熒光染色的定量分析
結(jié)果12細(xì)胞中觀察到的Piezo1通道熒光強(qiáng)度要比PE細(xì)胞強(qiáng)。在3個(gè)供體的組織樣品中都證實(shí)了Piezo1通道的這種表達(dá)模式（圖1.3A）。同樣的，Piezo2在NPE和PE細(xì)胞中均表達(dá)，且主要在NPE細(xì)胞中表達(dá)（圖1.3B）。此外，在負(fù)責(zé)房水葡萄膜鞏膜流出通路的睫狀肌中我們也觀察到了Piezo2通道的明顯表達(dá)（圖1.4）。這些數(shù)據(jù)表明，Piezo1和Piezo2在睫狀體，尤其是負(fù)責(zé)房水產(chǎn)生的NPE中高表達(dá)，Piezo2在睫狀肌中明顯表達(dá)。表明了Piezo在響應(yīng)外界機(jī)械變化進(jìn)而調(diào)節(jié)房水產(chǎn)生和葡萄膜鞏膜流出通路中可能會(huì)發(fā)揮重要的作用。圖1.3Piezo在人源睫狀體非色素上皮細(xì)胞中表達(dá)睫狀體的非色素上皮（NPE）和色素上皮（PE）細(xì)胞顯示在明場(chǎng)（BF）圖像中（左圖）。在NPE細(xì)胞和PE細(xì)胞（尤其是NPE細(xì)胞）中均有Piezo1（紅色，A右圖）和Piezo2（紅色，B右圖）表達(dá)。右圖的左下角以較高倍數(shù)顯示了NPE細(xì)胞的染色結(jié)果。細(xì)胞核用DAPI染成藍(lán)色。比例尺：100μm。PC：后房，NPE：非色素上皮細(xì)胞，PE：色素上皮細(xì)胞。
青島大學(xué)碩士學(xué)位論文13圖1.4Piezo2在人源睫狀肌中明顯表達(dá)左圖，睫狀肌顯示在明場(chǎng)（BF）圖像中；右圖，Piezo2在睫狀肌中明顯表達(dá)。右圖左下角以較高倍數(shù)顯示了睫狀肌的染色結(jié)果。細(xì)胞核用DAPI染成藍(lán)色。比例尺：100μm。PC：后房，CM：睫狀跡3.Piezo在小鼠的虹膜角膜角有明顯表達(dá)我們進(jìn)一步研究了Piezo通道在小鼠眼睛前節(jié)，特別是虹膜角膜角的表達(dá)。在我們的研究中通過帶有ColIV抗體的IHC來區(qū)分小鼠的前房角組織（圖1.5A）。用Piezo1和Piezo2抗體進(jìn)行的IHC研究是在C57BL/6J背景的小鼠中進(jìn)行的。如圖1.5B左圖所示，我們可以在整個(gè)TM組織、Schlemm管內(nèi)皮細(xì)胞、角膜上皮和內(nèi)皮細(xì)胞、睫狀體的上皮細(xì)胞中觀察到Piezo1和Piezo2的陽性染色（圖1.5B左圖）。我們通過高放大倍數(shù)圖像進(jìn)一步確定了小梁網(wǎng)和Schlemm管的染色結(jié)果（圖1.5B右圖）。另外，我們通過Westernblot進(jìn)一步確定了小鼠虹膜角膜角中Piezo1和Piezo2的明顯表達(dá)（圖1.6A）。如圖1.6B所示，基于Westernblot條帶的定量結(jié)果顯示，Piezo1和Piezo2與β-actin的相對(duì)表達(dá)分別為2.19±1.30（n=3）和0.726±0.089（n=3）。這些結(jié)果表明，Piezo通道可以在小鼠虹膜角膜角中明顯表達(dá)，暗示了它們?cè)谡{(diào)節(jié)小鼠房水循環(huán)中的潛在作用。
本文編號(hào)：2942971
【文章來源】：青島大學(xué)山東省
【文章頁數(shù)】：63 頁
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【部分圖文】：
人源小梁網(wǎng)組織Piezo免疫熒光染色的定量分析
結(jié)果12細(xì)胞中觀察到的Piezo1通道熒光強(qiáng)度要比PE細(xì)胞強(qiáng)。在3個(gè)供體的組織樣品中都證實(shí)了Piezo1通道的這種表達(dá)模式（圖1.3A）。同樣的，Piezo2在NPE和PE細(xì)胞中均表達(dá)，且主要在NPE細(xì)胞中表達(dá)（圖1.3B）。此外，在負(fù)責(zé)房水葡萄膜鞏膜流出通路的睫狀肌中我們也觀察到了Piezo2通道的明顯表達(dá)（圖1.4）。這些數(shù)據(jù)表明，Piezo1和Piezo2在睫狀體，尤其是負(fù)責(zé)房水產(chǎn)生的NPE中高表達(dá)，Piezo2在睫狀肌中明顯表達(dá)。表明了Piezo在響應(yīng)外界機(jī)械變化進(jìn)而調(diào)節(jié)房水產(chǎn)生和葡萄膜鞏膜流出通路中可能會(huì)發(fā)揮重要的作用。圖1.3Piezo在人源睫狀體非色素上皮細(xì)胞中表達(dá)睫狀體的非色素上皮（NPE）和色素上皮（PE）細(xì)胞顯示在明場(chǎng)（BF）圖像中（左圖）。在NPE細(xì)胞和PE細(xì)胞（尤其是NPE細(xì)胞）中均有Piezo1（紅色，A右圖）和Piezo2（紅色，B右圖）表達(dá)。右圖的左下角以較高倍數(shù)顯示了NPE細(xì)胞的染色結(jié)果。細(xì)胞核用DAPI染成藍(lán)色。比例尺：100μm。PC：后房，NPE：非色素上皮細(xì)胞，PE：色素上皮細(xì)胞。
青島大學(xué)碩士學(xué)位論文13圖1.4Piezo2在人源睫狀肌中明顯表達(dá)左圖，睫狀肌顯示在明場(chǎng)（BF）圖像中；右圖，Piezo2在睫狀肌中明顯表達(dá)。右圖左下角以較高倍數(shù)顯示了睫狀肌的染色結(jié)果。細(xì)胞核用DAPI染成藍(lán)色。比例尺：100μm。PC：后房，CM：睫狀跡3.Piezo在小鼠的虹膜角膜角有明顯表達(dá)我們進(jìn)一步研究了Piezo通道在小鼠眼睛前節(jié)，特別是虹膜角膜角的表達(dá)。在我們的研究中通過帶有ColIV抗體的IHC來區(qū)分小鼠的前房角組織（圖1.5A）。用Piezo1和Piezo2抗體進(jìn)行的IHC研究是在C57BL/6J背景的小鼠中進(jìn)行的。如圖1.5B左圖所示，我們可以在整個(gè)TM組織、Schlemm管內(nèi)皮細(xì)胞、角膜上皮和內(nèi)皮細(xì)胞、睫狀體的上皮細(xì)胞中觀察到Piezo1和Piezo2的陽性染色（圖1.5B左圖）。我們通過高放大倍數(shù)圖像進(jìn)一步確定了小梁網(wǎng)和Schlemm管的染色結(jié)果（圖1.5B右圖）。另外，我們通過Westernblot進(jìn)一步確定了小鼠虹膜角膜角中Piezo1和Piezo2的明顯表達(dá)（圖1.6A）。如圖1.6B所示，基于Westernblot條帶的定量結(jié)果顯示，Piezo1和Piezo2與β-actin的相對(duì)表達(dá)分別為2.19±1.30（n=3）和0.726±0.089（n=3）。這些結(jié)果表明，Piezo通道可以在小鼠虹膜角膜角中明顯表達(dá)，暗示了它們?cè)谡{(diào)節(jié)小鼠房水循環(huán)中的潛在作用。
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