目的:探索Gremlin-1作為一種內(nèi)源性骨形成蛋白（Bone morphogenetic protein,BMP）信號通路的抑制因子,對發(fā)生重復(fù)損傷的視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞（Retinal pigmented epithelium,RPE）逐漸出現(xiàn)再分化障礙以及上皮間充質(zhì)轉(zhuǎn)化（Epithelial-mesenchymal transition,EMT）中的作用。方法:為了建立RPE細(xì)胞的重復(fù)損傷模型,反復(fù)傳代培養(yǎng)的人胎兒視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞（fetal RPE,fRPE）被認(rèn)為是一種重復(fù)損傷模型。為了探究Gremlin-1的作用,我們利用重組人類Gremlin-1（0.1μg/ml·d）處理細(xì)胞,并且利用si RNA敲除GREM1來探索該基因表達(dá)下降后是否能夠抑制EMT的發(fā)生。為判斷細(xì)胞的形態(tài)學(xué)變化,我們利用相差顯微鏡觀察細(xì)胞的形態(tài),并且在亮視野下可以觀察色素的形成,色素的出現(xiàn)意味著RPE細(xì)胞更趨向于正常的形態(tài),并且在此基礎(chǔ)上我們利用了細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)來判斷Gremlin-1對于細(xì)胞遷移率的影響。為了判斷細(xì)胞是否有RPE細(xì)胞特定的功能,我們利用q-PCR來檢測不同實(shí)驗(yàn)組的RPE細(xì)胞的基因表達(dá):... 

【文章來源】：南京醫(yī)科大學(xué)江蘇省

【文章頁數(shù)】：41 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

A：第32天，未經(jīng)任何處理的P2細(xì)胞具有正常的鵝卵石樣外觀，在亮視野中具有更多的色素，而P4細(xì)胞具有成纖維細(xì)胞樣并失去色素

南京醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文中 GREM1 的相關(guān)表達(dá)低于第 4 代細(xì)胞。比例尺：Ph：100μm，Bf：500μm;數(shù)據(jù)表達(dá)為平均值±SEM（平均值的標(biāo)準(zhǔn)誤），n = 3，**** P <0.0001，*** P <0.001，與 P2 代相比; #### P <0.0001，＃P <0.05 對比 P4 空白; Ph：相差顯微鏡; Bf：亮視野 CDH1：上皮標(biāo)記; VIM：EMT 標(biāo)記。

南京醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文為探討胎兒RPE細(xì)胞和EMT細(xì)胞中GREM1的動態(tài)表達(dá)變化，我們分析了GREM1與 SNAI1 之間的關(guān)系。將進(jìn)入 EMT 的 P4 代細(xì)胞以 10000 細(xì)胞/ cm2密度接種在培養(yǎng)皿中，分成兩組：一組用 SB431542（10μm SB431542 組）處理，另一組為對照組未經(jīng)任何處理（對照組），并在第 2,5,10,15 和 30 天在相差顯微鏡下觀察細(xì)胞并收集相應(yīng)細(xì)胞進(jìn)行 q-PCR 分 GREM1、SNAI1 以及 RPE65 在不同組中的表達(dá)變化以及趨勢。最終，在 SB431542 組中，細(xì)胞分化成 RPE 樣細(xì)胞，而在對照組中，細(xì)胞逐漸形成成纖維細(xì)胞樣形狀（圖 3A），GREM1 和 SNAI1 的表達(dá)在兩組中具有相似的趨勢。其中，在對照組中，SNAI1 隨著 GREM1 的上調(diào)而逐漸上調(diào)，RPE65 同時(shí)持續(xù)保持低表達(dá)，同樣的，SB431542 組中，SNAI1 具有與 GREM1 類似的低表達(dá)而 RPE65 則逐漸上調(diào)（圖 3B）。

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]上皮-間充質(zhì)轉(zhuǎn)化在增生性玻璃體視網(wǎng)膜病變發(fā)病機(jī)制中的作用[J]. 劉帥,金海鷹.  國際眼科縱覽. 2016 (04)
[2]老年性黃斑變性視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞替代治療研究進(jìn)展[J]. 沈涵,劉慶淮,袁松濤.  中華眼底病雜志. 2016 (01)
[3]胎兒視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞的原代培養(yǎng)和體外增殖能力的測定[J]. 袁松濤,薛志剛,林卿,劉慶淮,范國平.  中華細(xì)胞與干細(xì)胞雜志(電子版). 2014(01)



本文編號：2920777