目的:1、研究惡性脈絡膜黑色素瘤組織（UM）中成纖維細胞生長因子2（FGF2）的表達情況。2、證明通過FGF2刺激人侵襲性脈絡膜黑色素瘤（MUM2B）細胞系,使腫瘤細胞的規(guī)模更大而且更傾向于遷移。而這一過程是通過鈣存儲通道（SOCE）調(diào)控鈣釋放激活鈣調(diào)因子1（Orai1）和基質(zhì)細胞反應分子1（STIM1）的表達實現(xiàn)的。3、驗證鈣通道阻滯劑三磷酸肌醇受體拮抗劑（2-APB）阻止了由FGF2引起的腫瘤細胞的遷移作用。方法:1.收集惡性脈絡膜黑色素瘤病人的一般情況以及腫瘤組織（原位癌組織和肝肺轉(zhuǎn)移癌組織）等的臨床資料。HE切片染色和免疫組化檢測FGF2在腫瘤中的表達,并分析FGF2水平和臨床病理類型等參數(shù)的關(guān)系。同時對比在樣本中Orai1和STIM1蛋白的表達情況。2.將MUM2B細胞分為三組,腫瘤細胞組（對照組）、腫瘤細胞+FGF2組（FGF2組）、腫瘤細胞+FGF2+2-APB組（FGF2/2-APB組）,用Fluo3-AM作為鈣離子指示劑染色細胞內(nèi)的鈣離子,然后再用流式細胞儀檢測三組中鈣離子的含量。3.采用Western-Blot方法測定對照組、FGF2組、FGF2/2-APB組中的O... 

【文章來源】：重慶醫(yī)科大學重慶市

【文章頁數(shù)】：96 頁

【學位級別】：博士

【部分圖文】：

FGF2在人脈絡膜黑色素瘤組織中的表達

圖 2 FGF2 對細胞內(nèi) Ca2+濃度的影響及鈣通道調(diào)控蛋白的表達(A)FGF2 刺激升高細胞內(nèi)濃度，2-APB 逆轉(zhuǎn)這種效應(左)；(B)FGF2 刺激增加 MUM2B 細胞 STIM1 和 ORAI1 的表達2-APB 逆轉(zhuǎn)這種效應(左)。STIM1 和 ORAI1 與β-actin 蛋白的相對表達量比較(右)(*P<0.05+FGF2 組的細胞和對照組比較；FGF2/2-APB 處理組的細胞和 FGF2 組的細胞比較**P<0.05Figure 2 The effect of FGF2 on intracellular Ca2+concentration and expression of store-operated calciuentry-regulated proteins. (A) FGF2 stimulation elevated intracellular calcium concentration, and 2-APreversed this effect (left); (B) FGF2 stimulation increased the expression of STIM1 and ORAI1 of MUMcells, and 2-APB reversed this effect (left). Relative amounts of protein expression of STIM1 and ORAcompared with -actin (right) (*P<0.05 between FGF2-treated cells and the control cells, **P<0.05 betweFGF2/2-APB-treated cells and the FGF2-treated cells).2.3 FGF2 加速了 MUM2B 細胞創(chuàng)傷愈合

圖 3 2-APB 阻止了如下作用：由 FGF2 引起的 MUM2B 細胞水平和垂直遷移的增力的降低。（A）創(chuàng)傷愈合試驗在 0, 12 和 24 小時的圖像（100r）（左）。在創(chuàng)傷愈不同時間的遷移距離(右)；(B)對侵入 Boyden 室的細胞進行染色(200r)(左)。在 5 個計數(shù)侵襲細胞數(shù)(右)；(C)在 5 倍高倍鏡區(qū)域計數(shù)結(jié)合細胞數(shù)(200r)(*P<0.05，在 FG和 control 組之間比較，**P<0.05FGF2/2-APB 細胞組和 FGF2 細胞組之間比較)Figure 3 2-APB impairs increased horizontal and vertical migration and decreased MUM2BcellscausedbyFGF2.(A)Imagesofwoundhealingassayat0,12, and 24 h (Migration distances at different times in the wound healing assay (right); (B) Celthrough the Boyden chamber were stained (200r) (left). The numbers of invadingcounted in five predetermined fields (right); (C) The numbers of bound cells werefive high magnification (200r) fields (*P<0.05 between FGF2-treated cells and the c**P<0.05betweenFGF2/2-APB-treatedcellsandthe FGF2-treatedcells).

【參考文獻】：
期刊論文
[1]脈絡膜黑色素瘤的研究進展[J]. 裴超,劉靜霞.  國際眼科雜志. 2017(12)
[2]SOCE在消化道腫瘤細胞增殖及遷移中的調(diào)控作用[J]. 孔瑞,盧潔.  胃腸病學和肝病學雜志. 2017(11)
[3]2-APB對自發(fā)性高血壓大鼠腦微動脈平滑肌細胞縫隙連接的影響[J]. 王洋,馬克濤,張雯,李麗,趙磊,魏麗麗,司軍強.  石河子大學學報(自然科學版). 2014(03)
[4]STIM/SOCE通路參與細胞功能調(diào)控的研究進展[J]. 馬騰,全弘宇,趙柏雄,李紅麗.  中國細胞生物學學報. 2014(05)
[5]脈絡膜黑色素瘤發(fā)生機制的研究進展[J]. 張薇,何彥津.  眼科研究. 2010(05)
[6]姜黃素對人多發(fā)性骨髓瘤細胞表達Survivin、Bcl-2、Bax的影響[J]. 劉波,白慶咸,陳協(xié)群,高廣勛,顧宏濤.  中國實驗血液學雜志. 2007(04)
[7]中藥活性成分對卵巢癌的直接作用機制研究進展[J]. 郭方,徐叢劍.  中國中西醫(yī)結(jié)合雜志. 2005(12)
[8]姜黃素和兒茶素聯(lián)用對二甲基肼誘導的大鼠大腸癌變過程中環(huán)氧合酶2表達的影響[J]. 許剛,黃文,張衛(wèi)民,賴卓勝,何美蓉,王亞東,張亞歷.  第一軍醫(yī)大學學報. 2005(01)
[9]姜黃素對膀胱癌EJ細胞的作用研究[J]. 孫明,楊宇如,李虹,蘇斌,盧一平,魏強,范天勇.  中藥材. 2004(11)
[10]姜黃素誘導人卵巢癌細胞株A2780凋亡及其分子機制的研究[J]. 鄭麗端,童強松,吳翠環(huán).  癌癥. 2002(12)

博士論文
[1]Butein通過線粒體途徑誘導人葡萄膜黑色素瘤細胞凋亡[D]. 崔治華.吉林大學 2013
[2]STIM1/Orai1介導的Ca2+內(nèi)流參與氣道平滑肌細胞增殖[D]. 鄒進晶.武漢大學 2011

碩士論文
[1]Orai1和STIM1在姜黃素誘導的非小細胞肺癌細胞凋亡中的作用[D]. 林丹苗.南方醫(yī)科大學 2013



本文編號：2900355