【摘要】：第一部分嗜酸性粒細(xì)胞在慢性鼻炎患者上下氣道中的臨床研究第一節(jié)上下氣道炎癥評估方法的標(biāo)準(zhǔn)化目的:建立上下氣道炎癥評估方法的標(biāo)準(zhǔn)化。方法:通過與呼吸疾病國家重點實驗室共同參與上下氣道炎性疾病的相關(guān)課題的研究,在該課題中摸索出了上下氣道炎癥評估(鼻肺部一氧化氮(NO)、氣道高反應(yīng)性及細(xì)胞學(xué))的方法及相應(yīng)正常值。結(jié)果:鼻部NO正常值范圍:400~900ppb,肺部5~25ppb;鼻激發(fā)后鼻阻力較基礎(chǔ)值增加≥100%,支氣管激發(fā)FEV1較基礎(chǔ)值下降≥20%,判定為陽性;鼻灌洗EOS≥2.00/HP,誘導(dǎo)痰EOS≥2.5%為陽性。結(jié)論:上下氣道炎癥評估方法的標(biāo)準(zhǔn)化為上下氣道的后續(xù)研究提供了相關(guān)的方法學(xué)及研究基礎(chǔ)。第二節(jié)嗜酸性粒細(xì)胞在慢性鼻炎患者上下氣道炎癥相關(guān)中的意義目的:通過研究嗜酸性粒細(xì)胞(eosinophils,EOS)在慢性鼻炎患者上下氣道及全身的表達(dá)和關(guān)聯(lián),探討預(yù)測下氣道炎癥的鼻部炎癥指標(biāo)。方法:共收集變應(yīng)性鼻炎(allergic rhinitis,AR)患者162例,非變應(yīng)性鼻炎(non-allergic rhinitis,NAR)患者117例,對照組104例(control,Ctrl)。全部研究對象均行詳細(xì)病史采集、皮膚點刺實驗(skin prick test,SPT)、血清總Ig E(total immunoglobin E,t Ig E)、血EOS、鼻灌洗及誘導(dǎo)痰EOS、鼻激發(fā)及支氣管激發(fā)實驗(nasal provocation test,NPT;bronchial provocation test,BPT)、鼻及呼出氣一氧化氮(nasal nitric oxide,NNO;Fractional exhaled nitric oxide,Fe NO)檢測(第一部分第一節(jié)所標(biāo)準(zhǔn)化后的上下氣道檢測方法)。多組間比較采用單因素方差分析,兩組間比較采用LSD t檢驗或Mann-Whitney U檢驗。相關(guān)性分析采用Pearson或Spearman相關(guān)參數(shù)測試法。結(jié)果:AR、NAR組較Ctrl組各炎癥指標(biāo)均有顯著性差異(p0.01)。AR組鼻EOS、NNO、痰EOS、Fe NO、血EOS及血t Ig E較NAR組高(p0.01),而鼻阻力、NPT及BPT兩組間無統(tǒng)計學(xué)差異。無論AR組、NAR組、還是鼻炎組(AR+NAR)鼻EOS與痰EOS、Fe NO、t Ig E及血EOS相關(guān)(p0.05),而與BPT無關(guān)。控制性別、年齡、身高及體重四個因素后,鼻EOS與痰EOS仍呈正相關(guān)(p0.01)。多元線性回歸分析顯示,鼻EOS、血EOS及皮膚點刺試驗與痰EOS水平存在統(tǒng)計學(xué)關(guān)聯(lián)(p0.05)。痰EOS作因變量行l(wèi)ogistic回歸分析發(fā)現(xiàn)鼻EOS在AR組、NAR組及鼻炎組均有意義,正確分類能力分別為77.2%、79.5%及78.1%(P0.001),而Fe NO及BPT未發(fā)現(xiàn)鼻部有價值指標(biāo)。經(jīng)ROC曲線分析鼻EOS對痰EOS陰陽判斷的最佳臨界值為3.30個/200HP。結(jié)論:1、AR組炎癥指標(biāo)較NAR組重,但都明顯高于對照組;2、鼻EOS與下氣道及全身多個炎癥指標(biāo)相關(guān),且是痰EOS增高的相關(guān)因素。第二部分:小鼠上下氣道一致的變應(yīng)性氣道炎癥動物模型的建立目的:建立小鼠上下氣道一致的變應(yīng)性氣道炎癥(allergic airway inflammation,AAI)動物模型。方法:通過腹腔注射卵白蛋白(ovalbumin,OVA)基礎(chǔ)致敏,滴鼻與霧化吸入OVA續(xù)貫激發(fā),末次激發(fā)后評價小鼠模型的癥狀、血清特異性Ig E(specific immunoglobulin E,s Ig E)濃度及鼻肺粘膜的病理改變。結(jié)果:模型組鼻、肺部癥狀評分與對照組相比均有顯著統(tǒng)計學(xué)差異(P(27)0.01)。模型組鼻、肺部黏膜破壞程度(1、2級)與對照組相比均有顯著統(tǒng)計學(xué)差異(P(27)0.01),而3級均無統(tǒng)計學(xué)意義(P(29)0.05)。模型組鼻灌洗、肺灌洗及血清中OVAs Ig E濃度均較對照組明顯增高(P(27)0.01)。模型組鼻、肺部EOS和杯狀細(xì)胞(goblet cell,GC)均較對照組明顯增高(P(27)0.01)。模型組鼻、肺EOS數(shù)目呈顯著正相關(guān)(r=0.775,P(27)0.01),GC數(shù)也呈正相關(guān)(r=0.723,P(27)0.05)。結(jié)論:本造模方法能夠成功建立小鼠癥狀學(xué)、免疫學(xué)及病理學(xué)三方面上下氣道一致的AAI模型。第三部分變應(yīng)性氣道炎癥小鼠經(jīng)鼻給藥后對上下氣道影響及機制研究目的:利用高遷移率族族蛋白1(High-mobility group box 1 protein,HMGB1)及其受體阻滯劑晚期糖基化終產(chǎn)物受體(receptor of advanced glycation end products,RAGE)干預(yù)AAI小鼠,觀察其治療效果并闡述其可能機制。方法:32只BALB/c小鼠隨機分為模型組(A)、HMGB1組(B)、RAGE組(C)及對照組(D)。OVA致敏的小鼠每周三次OVA滴鼻激發(fā),持續(xù)3周。B組在滴鼻激發(fā)后1小時給予HMGB1干預(yù)。C組激發(fā)前1小時給予RAGE干預(yù),然后A、B、C三組進(jìn)行連續(xù)5天的OVA霧化吸入激發(fā)。末次激發(fā)后評估所得的鼻肺部癥狀、血清細(xì)胞因子(OVAs Ig E、IL4、IL10、IL17及IFN-γ)及病理改變(EOS、GC)。結(jié)果:A、B、C三組鼻部癥狀積分均較D組明顯(P(27)0.01),C組較A、B組明顯好轉(zhuǎn)(P(27)0.01)。A、B、C三組肺部癥狀評級與D組比較均有統(tǒng)計學(xué)意義(P(27)0.01),C組較A、B組有統(tǒng)計學(xué)差異(P(27)0.01),A、B兩組間比較無統(tǒng)計學(xué)差異(P(29)0.05)。A、B、C三組血清OVAs Ig E的濃度均顯著高于對照組(P(27)0.01),A、B組亦顯著高于C組(P(27)0.01),A、B兩組間比較無統(tǒng)計學(xué)差異(P(29)0.05)。IL-4 A、B、C三組均較對照組高(P(27)0.01),C組較A、B組低(P(27)0.01),AB之間無統(tǒng)計學(xué)差異(P(29)0.05)。IL-10 A、B、C三組均較對照組高(P(27)0.01),C組較A、B組低(P(27)0.01),AB之間比較有統(tǒng)計學(xué)差異(P(27)0.05)。IL-17 A、B、C三組均較對照組高(P(27)0.01),AC、BC、AB組間比較均有顯著統(tǒng)計學(xué)差異(P(27)0.01)。IFN-γAC、BC、AD、BD組間比較均有顯著統(tǒng)計學(xué)差異(P(27)0.01),AB、CD組間比較無統(tǒng)計學(xué)差異(P(29)0.05)。IFN-γ/IL4比值A(chǔ)、B、C三組均較對照組低(P(27)0.01),C組較A、B組高(P(27)0.01),AB之間比較無統(tǒng)計學(xué)差異(P(29)0.05)。IL-17/IL-10比值A(chǔ)、B、C、D四組間比較均無統(tǒng)計學(xué)差異(P(29)0.05)。A、B、C三組鼻、肺部黏膜EOS浸潤程度及1000um長GC數(shù)較對照組均有顯著差異(P(27)0.01),鼻、肺部EOS及GC四個指標(biāo)AC、BC組間比較均有顯著性差異(P(27)0.01),而AB組比較均無統(tǒng)計學(xué)意義(P(29)0.05)。B組鼻、肺EOS數(shù)目呈正相關(guān)(r=0.841;p=0.009),GC數(shù)目也呈正相關(guān)(r=0.781;p=0.022);C組鼻、肺黏膜EOS也呈正相關(guān)(r=0.744;p=0.034),而C組GC無明顯相關(guān)性(P(29)0.05)。結(jié)論:1.本研究證實HMGB1能夠加重AAI小鼠部分炎癥指標(biāo)水平,而其受體阻滯劑(RAGE)能夠明顯降低AAI炎癥水平;2.HMGB1參與調(diào)節(jié)AAI可能是通過改變Th1/Th2平衡減少組織EOS浸潤得以實現(xiàn);3.鼻部EOS與肺部EOS呈正相關(guān),控制鼻部EOS的同時也控制了肺部EOS,但鼻肺部的GC相關(guān)性不如EOS。
【學(xué)位授予單位】：南京醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號】：R765.21
【圖文】：

表 2. 三組間上下氣道炎癥指標(biāo)水平比較AR NAR Ctrl F/ 3.70(1.20~14.23)※＃1.40(0.20~3.40)＃0.00(0.00~0.06)11.442 0.32±0.10＃0.26±0.08＃0.11±0.04 5.437 61.73(100/162)＃65.81(77/117)＃5.77(6/104) 101.440673.50(466.80~936.00)※＃455.80(248.10~705.60)＃102.50(58.00~577.73)19.440 2.97(0.00~10.63)※＃1.00(0.23~2.00)＃0.25(0.00~0.50)70.727 49.28±26.37※＃34.07±19.11＃16.57±7.07 69.449 13.58(22/162)＃10.26(12/117)＃0(0/104) 14.836 4.00(2.00~7.00)※＃2.00(1.00~5.00)＃1.80(1.08~3.00)47.453 208.01(61.70~387.50)※＃43.30(19.00~122.00)＃42.00(27.78~54.50)46.525 R 組，p〈0.01；＃與 Ctrl 組，p〈0.01

圖 2 誘導(dǎo)痰細(xì)胞學(xué)涂片 HE×400白色箭頭為 EOS，黑色箭頭為中性粒細(xì)胞，箭頭為淋巴細(xì)胞，黃色箭頭為巨噬細(xì)胞，紅色箭頭為上皮鼻 EOS 與下氣道及全身炎癥指標(biāo)的相關(guān)性分析與痰 EOS（r=0.448，P＜0.001）、FeNO（r=0.202，P=0.02=0.048）及血 EOS（r=0.321；P＜0.001）有統(tǒng)計學(xué)意義（詳=0.062，P=0.270）無統(tǒng)計學(xué)意義。 組鼻 EOS 與下氣道及全身炎癥指標(biāo)的相關(guān)性分析與痰 EOS（r=0.442，P＜0.001）、FeNO（r=0.268， P=8，P=0.003）及血 EOS（r=0.334，P＜0.001）有統(tǒng)計學(xué)意 BPT（r=0.028，P=0.763）無統(tǒng)計學(xué)意義。鼻 EOS 與下氣道及全身炎癥指標(biāo)的相關(guān)性分析

AR組鼻與痰EOS散點圖

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2 張勇;徐定遠(yuǎn);江滿杰;張鵬;陳偉;李澤卿;王秋萍;;單純滴鼻致敏豚鼠上下氣道病理改變[J];中國耳鼻咽喉顱底外科雜志;2009年02期

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本文編號：2786697