本文關鍵詞：HSP60在大鼠耳蝸發(fā)育和藥物性聾過程中的表達，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：感音神經性聾是耳科的常見病,耳蝸毛細胞的損傷是引起感音神經性聾的重要原因,如何防止毛細胞損傷、保護毛細胞是我們研究的重要課題。熱休克蛋白是在真核和原核生物中都廣泛表達,進化中高度保守的一類蛋白質,有一個共同的特性就是提高細胞的應激能力,對細胞起到保護作用。熱休克蛋白60(Heat Shock protein,HSP60)是分子量為60 k Da的熱休克蛋白家族,目前研究在神經退行性疾病的發(fā)生、發(fā)展中起著重要的作用,本研究中我們檢測了HSP60在SD大鼠耳蝸發(fā)育過程中和藥物性耳聾模型中的表達變化,結果提示隨著耳蝸的發(fā)育中,HSP60表達量逐漸升高,大鼠藥物性耳聾模型中HSP60的表達量升高。通過耳蝸免疫熒光染色和免疫組織化學染色,我們定位HSP60在耳蝸中表達于Corti器的部分支持細胞中。推測HSP60在大鼠耳蝸的發(fā)育過程和藥物性耳聾發(fā)生過程中,可能介導支持細胞對毛細胞的保護作用。實驗一HSP60在大鼠耳蝸發(fā)育中的表達目的檢測HSP60在大鼠耳蝸發(fā)育中的表達變化,觀察HSP60在耳蝸發(fā)育中的表達分布。方法SD大鼠50只,雌雄不限,按出生后天數(shù)分為五組:P0、P3、P7、P14和P28。實時定量PCR和Western Blot分別檢測HSP60的m RNA和蛋白表達量的變化;免疫熒光組織化學染色,觀察HSP60在耳蝸的表達部位分布及表達變化。結果實時定量PCR和Western Blot的結果顯示HSP60在SD大鼠出生后即有表達,呈增長趨勢,到P14時,與前三組有統(tǒng)計學差異(P0.05),P28與P14相同而維持穩(wěn)定狀態(tài)(P0.05)。免疫熒光染色,觀察到HSP60于P0-P7沒有明顯陽性表達,P14和P28表達于Corti器的部分支持細胞。結論大鼠出生后HSP60在耳蝸中表達量呈增長趨勢,表達于Corti器的支持細胞中,可能在耳蝸發(fā)育過程中對毛細胞起到了保護作用。實驗二HSP60在藥物性耳聾大鼠耳蝸中的表達變化目的檢測HSP60在大鼠耳蝸的表達分布及硫酸卡那霉素和呋塞米損傷下的表達變化。方法正常成年SD大鼠20只,雌雄不限,隨機分為兩組:對照組和實驗組(D7組),實驗組給予呋塞米100mg/kg頸靜脈注射,而后立即硫酸卡那霉素500mg/kg后腿內側肌肉注射;對照組相應的注射等量的生理鹽水。ABR檢測聽力變化;實時定量PCR檢測HSP60的m RNA表達量的變化;免疫熒光染色觀察HSP60在耳蝸中的表達變化及分布。結果ABR檢測顯示實驗組較對照組明顯升高(P0.05),且頻率越高,升高越明顯。實時定量PCR結果顯示D7組HSP60表達量升高(P0.05)。冰凍切片免疫熒光染色和免疫組織化學染色,觀察到HSP60表達于Corti器上的支持細胞內。冰凍切片免疫組織化學染色和基底膜鋪片免疫熒光染色,觀察到D7組HSP60表達升高。結論HSP60表達于支持細胞,正常生理情況下即表達,藥物中毒性耳聾模型中表達量升高,推測HSP60可能參與了藥物性耳聾的發(fā)生過程。
【關鍵詞】：熱休克蛋白60 支持細胞 聽力損失
【學位授予單位】：第四軍醫(yī)大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R764.43
【目錄】：

• 縮略語表5-6
• 中文摘要6-9
• 英文摘要9-12
• 前言12-14
• 文獻回顧14-22
• 實驗一 HSP60在大鼠耳蝸發(fā)育中的表達22-37
• 1 材料22-25
• 1.1 實驗動物22
• 1.2 主要試劑22-23
• 1.3 主要儀器23-24
• 1.4 溶液配制24-25
• 2 方法25-32
• 2.1 實驗安排25
• 2.2 耳蝸樣本取材25-26
• 2.3 實時定量PCR26-28
• 2.4 Western Blot28-31
• 2.5 免疫熒光染色31-32
• 2.6 統(tǒng)計學分析32
• 3 結果32-35
• 3.1 HSP60在耳蝸不同發(fā)育階段耳蝸中的表達變化32-33
• 3.2 HSP60在耳蝸不同發(fā)育階段耳蝸中的表達部位33-35
• 4 討論35-37
• 實驗二 HSP60在藥物性耳聾大鼠耳蝸中的表達變化37-53
• 1 材料37-39
• 1.1 實驗動物37
• 1.2 主要試劑37-38
• 1.3 主要儀器38-39
• 1.4 溶液配制39
• 2 方法39-45
• 2.1 實驗安排39
• 2.2 ABR檢測39-40
• 2.3 耳蝸樣本取材40
• 2.4 實時定量PCR40-43
• 2.5 免疫熒光染色43-44
• 2.6 掃描電鏡觀察44
• 2.7 免疫組化染色44-45
• 2.8 統(tǒng)計學分析45
• 3 結果45-50
• 3.1 藥物誘導大鼠耳聾模型的建立45-47
• 3.2 HSP60在藥物性耳聾中的表達變化47-50
• 4 討論50-53
• 小結53-55
• 參考文獻55-61
• 附錄61-62
• 個人簡歷和研究成果62-63
• 致謝63

  本文關鍵詞：HSP60在大鼠耳蝸發(fā)育和藥物性聾過程中的表達，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

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本文編號：262319