【摘要】：目的:研究2周(2 weeks,2 w)、3月(3 months,3 m)、1年(1 year,1 y)和D-半乳糖(D-galactose,D-gal)衰老模型組豚鼠耳蝸血管紋中,鈣激活氯通道(gcalcium-activated chloride channels,CaCCs)的組成蛋白-跨膜蛋白A(transmem-brane protein 16A,TMEM16A)和跨膜蛋白B(transmem-brane protein 16B,TMEM16B)的表達(dá),以及其表達(dá)量與年齡性聽力改變的相互關(guān)系,探討這兩種通道蛋白在老年性耳聾發(fā)生發(fā)展中可能發(fā)揮的作用。方法:D-gal頸背部皮下注射制備衰老模型,并利用Morris水迷宮及SOD活性、MDA含量檢測(cè)來驗(yàn)證衰老模型。然后通過聽性腦干反應(yīng)(ABR)檢測(cè)不同年齡組別豚鼠的聽力水平變化;利用免疫熒光技術(shù)標(biāo)記豚鼠耳蝸血管紋上的TMEM16A和TMEM16B,研究不同年齡組豚鼠TMEM16A及TMEM16B在血管紋的時(shí)空表達(dá);通過QRT-PCR以及Westen blot技術(shù)檢測(cè)血管紋TMEM16A及TMEM16B在蛋白和mRNA水平的表達(dá)變化;分析它們與年齡相關(guān)性聽力損失之間可能存在的關(guān)系。結(jié)果:(1)衰老模型制備完成后發(fā)現(xiàn),D-gal組豚鼠進(jìn)食及自主活動(dòng)均減少,毛色枯槁無光澤,掉毛嚴(yán)重;Morris水迷宮行為測(cè)試發(fā)現(xiàn)實(shí)驗(yàn)組豚鼠較年輕豚鼠逃避潛伏期延長(zhǎng),而穿越平臺(tái)次數(shù)少(P0.01,n=10);生化指標(biāo)檢測(cè)發(fā)現(xiàn)實(shí)驗(yàn)組豚鼠SOD活性升高,MDA含量降低(P0.01,n=10);ABR閾值實(shí)驗(yàn)組明顯高于年輕豚鼠(P0.01,n=10)。(2)ABR檢測(cè)結(jié)果顯示,其閾值雖呈年齡相關(guān)性升高,但只有D-gal和3 m組之間具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.01,n=10)。(3)免疫熒光結(jié)果顯示不同年齡組別的豚鼠耳蝸血管紋均有TMEM16A及TMEM16B表達(dá),且其熒光強(qiáng)度隨年齡增長(zhǎng)逐漸增強(qiáng),但D-gal組強(qiáng)度減弱。(4)QRT-PCR結(jié)果顯示各年齡組別豚鼠耳蝸血管紋中TMEM16A及TMEM16B mRNA的表達(dá)水平隨年齡而改變。其表達(dá)水平隨鼠齡增加呈遞增趨勢(shì),但D-gal組明顯降低。D-gal組與其他各組(除2 w外)之間比較均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05,n=6)。(5)Westen blot技術(shù)發(fā)現(xiàn)TMEM16A及TMEM16B在各年齡組別豚鼠耳蝸血管紋蛋白水平表達(dá)量有差異。出生后其表達(dá)水平隨鼠齡增加而上調(diào),但D-gal組時(shí)明顯下降。D-gal組與其他各組(除2 w外)之間比較均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05,n=6)。結(jié)論:豚鼠耳蝸血管紋TMEM16A和TMEM16B的表達(dá)量隨豚鼠的衰老明顯下降,可能與年齡相關(guān)性聽力減退有一定的相關(guān)性。
【圖文】：

鈣激活氯通道在不同鼠齡豚鼠耳蝸血管紋的表達(dá)變化實(shí) 驗(yàn) 結(jié) 果（Results）鼠一般狀態(tài)觀察gal 組豚鼠自造模起到 3 w 時(shí)即出現(xiàn)精神萎靡，進(jìn)食減少，皮膚松弛，行動(dòng)遲動(dòng)減少等現(xiàn)象。造模成功后（4 w），D-gal 組豚鼠毛色枯槁無光澤，，且脫毛嚴(yán) 組及 NS 組外觀及一般狀態(tài)幾乎同實(shí)驗(yàn)前。orris 水迷宮行為測(cè)試實(shí)驗(yàn)

鈣激活氯通道在不同鼠齡豚鼠耳蝸血管紋的表達(dá)變化明顯落后于其他兩組（如圖 1c）。經(jīng)統(tǒng)計(jì)，經(jīng)過 4 d 尋找平臺(tái)訓(xùn)練，3 組豚鼠的逃避伏期均逐漸下降，3 組間進(jìn)行比較，第 1 d 3 組間無顯著差異（58.69±5.56, 57.58±9.43.34±6.96 s），第 2 d 到第 4 d，D-gal 組的逃避潛伏期均高于 control 組和 NS 組（見圖），且從第 3 d 開始有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。而第 5 d 去除隱藏平臺(tái)后，3 組豚鼠穿平臺(tái)的次數(shù)也具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（6.40±3.78, 6.60±2.19, 3.17±1.33 次）（見圖 2b）。結(jié)果表明，gal 組豚鼠較 control 組和 NS 組豚鼠空間學(xué)習(xí)能力減弱。
【學(xué)位授予單位】：石河子大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號(hào)】：R764.436

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 郝文洋;商瑩瑩;倪道鳳;姜鴻;徐春曉;高志強(qiáng);王素菊;李奉蓉;趙翠霞;;年齡對(duì)言語(yǔ)誘發(fā)ABR的頻率跟隨反應(yīng)影響[J];聽力學(xué)及言語(yǔ)疾病雜志;2016年06期

2 劉艷輝;王艷萍;王洋;馬克濤;司軍強(qiáng);李麗;;豚鼠耳蝸血管紋周細(xì)胞電生理特性的研究[J];中華耳鼻咽喉頭頸外科雜志;2016年08期

3 周s

本文編號(hào)：2570888