【摘要】：目的:研究2周(2 weeks,2 w)、3月(3 months,3 m)、1年(1 year,1 y)和D-半乳糖(D-galactose,D-gal)衰老模型組豚鼠耳蝸血管紋中,鈣激活氯通道(gcalcium-activated chloride channels,CaCCs)的組成蛋白-跨膜蛋白A(transmem-brane protein 16A,TMEM16A)和跨膜蛋白B(transmem-brane protein 16B,TMEM16B)的表達,以及其表達量與年齡性聽力改變的相互關(guān)系,探討這兩種通道蛋白在老年性耳聾發(fā)生發(fā)展中可能發(fā)揮的作用。方法:D-gal頸背部皮下注射制備衰老模型,并利用Morris水迷宮及SOD活性、MDA含量檢測來驗證衰老模型。然后通過聽性腦干反應(yīng)(ABR)檢測不同年齡組別豚鼠的聽力水平變化;利用免疫熒光技術(shù)標記豚鼠耳蝸血管紋上的TMEM16A和TMEM16B,研究不同年齡組豚鼠TMEM16A及TMEM16B在血管紋的時空表達;通過QRT-PCR以及Westen blot技術(shù)檢測血管紋TMEM16A及TMEM16B在蛋白和mRNA水平的表達變化;分析它們與年齡相關(guān)性聽力損失之間可能存在的關(guān)系。結(jié)果:(1)衰老模型制備完成后發(fā)現(xiàn),D-gal組豚鼠進食及自主活動均減少,毛色枯槁無光澤,掉毛嚴重;Morris水迷宮行為測試發(fā)現(xiàn)實驗組豚鼠較年輕豚鼠逃避潛伏期延長,而穿越平臺次數(shù)少(P0.01,n=10);生化指標檢測發(fā)現(xiàn)實驗組豚鼠SOD活性升高,MDA含量降低(P0.01,n=10);ABR閾值實驗組明顯高于年輕豚鼠(P0.01,n=10)。(2)ABR檢測結(jié)果顯示,其閾值雖呈年齡相關(guān)性升高,但只有D-gal和3 m組之間具有統(tǒng)計學(xué)差異(P0.01,n=10)。(3)免疫熒光結(jié)果顯示不同年齡組別的豚鼠耳蝸血管紋均有TMEM16A及TMEM16B表達,且其熒光強度隨年齡增長逐漸增強,但D-gal組強度減弱。(4)QRT-PCR結(jié)果顯示各年齡組別豚鼠耳蝸血管紋中TMEM16A及TMEM16B mRNA的表達水平隨年齡而改變。其表達水平隨鼠齡增加呈遞增趨勢,但D-gal組明顯降低。D-gal組與其他各組(除2 w外)之間比較均有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05,n=6)。(5)Westen blot技術(shù)發(fā)現(xiàn)TMEM16A及TMEM16B在各年齡組別豚鼠耳蝸血管紋蛋白水平表達量有差異。出生后其表達水平隨鼠齡增加而上調(diào),但D-gal組時明顯下降。D-gal組與其他各組(除2 w外)之間比較均有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05,n=6)。結(jié)論:豚鼠耳蝸血管紋TMEM16A和TMEM16B的表達量隨豚鼠的衰老明顯下降,可能與年齡相關(guān)性聽力減退有一定的相關(guān)性。
【圖文】：

鈣激活氯通道在不同鼠齡豚鼠耳蝸血管紋的表達變化實 驗 結(jié) 果（Results）鼠一般狀態(tài)觀察gal 組豚鼠自造模起到 3 w 時即出現(xiàn)精神萎靡，進食減少，皮膚松弛，行動遲動減少等現(xiàn)象。造模成功后（4 w），D-gal 組豚鼠毛色枯槁無光澤，，且脫毛嚴 組及 NS 組外觀及一般狀態(tài)幾乎同實驗前。orris 水迷宮行為測試實驗

鈣激活氯通道在不同鼠齡豚鼠耳蝸血管紋的表達變化明顯落后于其他兩組（如圖 1c）。經(jīng)統(tǒng)計，經(jīng)過 4 d 尋找平臺訓(xùn)練，3 組豚鼠的逃避伏期均逐漸下降，3 組間進行比較，第 1 d 3 組間無顯著差異（58.69±5.56, 57.58±9.43.34±6.96 s），第 2 d 到第 4 d，D-gal 組的逃避潛伏期均高于 control 組和 NS 組（見圖），且從第 3 d 開始有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。而第 5 d 去除隱藏平臺后，3 組豚鼠穿平臺的次數(shù)也具有統(tǒng)計學(xué)意義（6.40±3.78, 6.60±2.19, 3.17±1.33 次）（見圖 2b）。結(jié)果表明，gal 組豚鼠較 control 組和 NS 組豚鼠空間學(xué)習(xí)能力減弱。
【學(xué)位授予單位】：石河子大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：R764.436

【參考文獻】

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1 郝文洋;商瑩瑩;倪道鳳;姜鴻;徐春曉;高志強;王素菊;李奉蓉;趙翠霞;;年齡對言語誘發(fā)ABR的頻率跟隨反應(yīng)影響[J];聽力學(xué)及言語疾病雜志;2016年06期

2 劉艷輝;王艷萍;王洋;馬克濤;司軍強;李麗;;豚鼠耳蝸血管紋周細胞電生理特性的研究[J];中華耳鼻咽喉頭頸外科雜志;2016年08期

3 周s

本文編號：2570888