【摘要】：研究背景 由于腫瘤、外傷所導(dǎo)致的氣管缺損臨床上至今沒有理想的修復(fù)方法。目前,常用的手段是兩端的端端吻合；當(dāng)缺損過長時,只能利用人工材料修復(fù)氣管,由于感染、排斥以及材料的變性等并發(fā)癥限制其在臨床的應(yīng)用。軟骨組織工程技術(shù)的發(fā)展使氣管再生成為可能,在以往成功構(gòu)建管狀軟骨的實驗中,學(xué)者們多采用軟骨細(xì)胞接種到多孔的支架材料,如PGA等,并在動物體內(nèi)形成軟骨。但是應(yīng)用支架材料主要存在兩個問題,一是細(xì)胞接種效率比較低。由于液體的流動性,很多細(xì)胞在接種時容易丟失,細(xì)胞分布也不均勻,這對構(gòu)建特定形態(tài)的組織是不利的。二是軟骨細(xì)胞材料復(fù)合物往往是植入有免疫缺陷的動物體內(nèi)如裸鼠進(jìn)行構(gòu)建,而當(dāng)植入具有免疫功能的動物體內(nèi)時,構(gòu)建的組織工程軟骨質(zhì)量常常不如在免疫缺陷動物內(nèi)構(gòu)建的滿意。我們考慮可能是材料直接植入后引起了宿主組織較為強(qiáng)烈的炎癥反應(yīng),進(jìn)而影響了軟骨細(xì)胞的功能。我們設(shè)想如果將可引起炎癥反應(yīng)的支架材料去除,利用細(xì)胞自身分泌的基質(zhì)將彼此連接起來形成細(xì)胞膜片。用細(xì)胞膜片的方式可以防止細(xì)胞流失,不僅提高細(xì)胞利用率,而且避免了材料降解產(chǎn)物對組織形成的影響。目的 研究利用羊耳軟骨細(xì)胞形成軟骨細(xì)胞膜片構(gòu)建無細(xì)胞支架組織工程管狀軟骨的可行性。方法 取羊耳軟骨組織,膠原消化法獲得軟骨細(xì)胞。體外培養(yǎng)擴(kuò)增羊耳軟骨細(xì)胞至第2代(P2),通過以0.5×106/mL,1.0×106/mL,1.5×106/mL,2.0×106/mL,2.5×106/mL5個不同密度接種于35mm直徑圓形培養(yǎng)皿,培養(yǎng)7天后來確定哪種細(xì)胞密度可以形成軟骨細(xì)胞膜片。 將所形成的軟骨細(xì)胞膜片均勻包裹于不同的內(nèi)支撐,分別為：打孔圓柱硅膠管,PGA包裹的打孔圓柱硅膠管,未打孔的圓柱硅膠管。然后將軟骨細(xì)胞膜片-內(nèi)支撐復(fù)合物植入裸鼠背部皮下,4周后取材檢測。以大體觀察、組織學(xué)、免疫組織化學(xué)等方法對形成的軟骨進(jìn)行評價。結(jié)果 P2軟骨細(xì)胞經(jīng)高密度接種培養(yǎng)1周后,以2.0×106/mL和2.5×106/mL這兩種軟骨細(xì)胞密度接種的可形成具有一定厚度的軟骨細(xì)胞膜片,呈乳白半透明狀,有光澤和彈性,可以用鑷子簡單地夾起,并折疊和卷曲,可操作性良好。 軟骨細(xì)胞膜片和打孔圓柱硅膠管內(nèi)支撐復(fù)合物植入裸鼠背部皮下,4周后取材可見形成了良好的管狀軟骨,乳白色,有光澤,質(zhì)地均勻,彈性好,具有中等偏硬的硬度。HE染色見軟骨陷窩形態(tài)規(guī)則,番紅0染色及Ⅱ型膠原免疫組化均成陽性表達(dá)。由于硅膠管打孔,導(dǎo)致軟骨細(xì)胞膜片向孔內(nèi)長入,最終形成的管狀軟骨內(nèi)面凹凸不平。 軟骨細(xì)胞膜片和PGA包裹的打孔圓柱硅膠管內(nèi)支撐復(fù)合物植入裸鼠背部皮下,4周后取材可見形成了良好的管狀軟骨,乳白色,有光澤,質(zhì)地均勻,彈性好,具有中等偏硬的硬度。HE染色見軟骨陷窩形態(tài)規(guī)則,番紅0染色及11型膠原免疫組化均成陽性表達(dá)。由于硅膠管外面包裹一層PGA,可以阻止軟骨細(xì)胞膜片向孔內(nèi)長入,最終形成的管狀軟骨內(nèi)面平整。但是由于PGA未能完全降解,形成的軟骨不均勻,降解部位軟骨形成不良。 軟骨細(xì)胞膜片和未打孔的圓柱硅膠管內(nèi)支撐復(fù)合物植入裸鼠背部皮下,4周后取材可見形成了良好的管狀軟骨,內(nèi)表面光滑平整,乳白色,有光澤,質(zhì)地均勻,彈性好,具有中等偏硬的硬度。HE染色見軟骨陷窩形態(tài)規(guī)則,番紅0染色及Ⅱ型膠原免疫組化均成陽性表達(dá)。 結(jié)論 軟骨細(xì)胞膜片復(fù)合硅膠管內(nèi)支撐的方法能形成管狀軟骨,為氣管軟骨的再造提供了新的方法。
【學(xué)位授予單位】：北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2012
【分類號】：R762

【參考文獻(xiàn)】

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1 肖開顏;周廣東;劉偉;崔磊;曹誼林;;組織工程技術(shù)修復(fù)兔氣管軟骨缺損的實驗研究[J];中華胸心血管外科雜志;2006年01期

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本文編號：2555131